Дополнения к ПНД Ф СБ 14.1.92-96 «Методическое руководство по гидробиологическому контролю нитчатых микроорганизмов активного ила», М., 1996.

К разделу 6.3. Техника окрашивания по методу Грама

Окрашивание по Граму может дать неправильные или неожиданные результаты, что связано с:

а) использованием недоброкачественных красителей;

б) приготовлением слишком толстого мазка и затруднением обесцвечивания.

К разделу 6.3.1. Предварительная подготовка необходимых растворов

Раствор Люголя (Lugol). Состав:

кристаллический йод - 1,0 г;

йодистый калий - 2,0 г;

дистиллированная вода - 300 см³.

Приготовление раствора Люголя. Йодистый калий растворяют в 5 - 10 см³ холодной дистиллированной воды, затем прибавляют кристаллический йод, оставляют на сутки до полного растворения йода и после этого приливают остальное количество воды.

Если не удается добиться хороших результатов окрашивания, можно использовать более концентрированный раствор йода по Бурке вместо раствора Люголя (техника окрашивания используется та же).

Раствор йода по Бурке. Состав:

йодистый калий - 2,0 г;

йод - 1,0 г;

дистиллированная вода - 100 см³.

Приготовление раствора йода по Бурке. В ступке растереть пестиком 2,0 г йодистого калия и 1,0 г йода. При растирании добавлять дистиллированную воду по 2 - 5 см³. После тщательного растирания промыть пестик и ступку, вылить в склянку и довести объем красителя до 100 см³ остатками дистиллированной воды.

К разделу 6.4. Техника окрашивания по методу Нейссера

Водный раствор красителя хризоидина. Состав:

хризоидин (сухой порошок) - 1,0 г;

дистиллированная вода - 150 см³.

Приготовление водного раствора хризоидина. В воронку на бумажный фильтр (красная, белая ленты) насыпают 1,0 г хризоидина и выливают на него 150 см³ кипящей дистиллированной воды, полностью растворяя порошок. После охлаждения краситель готов к употреблению.

Спиртовой раствор красителя

Везувина. Состав:

Везувин (сухой порошок) - 2,0 г;

спирт этиловый 96° - 60 см³;

дистиллированная вода - 40 см³.

Приготовление спиртового раствора красителя Везувина. 2,0 г Везувина высыпают во флакон, заливают спиртом и ставят на 24 ч в термостат при 37 °С, периодически взбалтывая. К полученному спиртовому раствору добавляют 40 см³ кипящей дистиллированной воды, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр (белая, красная ленты).