1.1. Аскосфероз - инфекционная болезнь пчелиных и трутневых личинок и куколок, вызываемая грибом Ascosphaera apis (Pericystis apis).

1.2. Диагноз на аскосфероз ставят на основании характерных клинических признаков поражения расплода и результатов лабораторного исследования.

1.3 При подозрении на аскосфероз в ветеринарную лабораторию направляют в соответствии с действующими правилами взятия патологического материала, крови, кормов и пересылки их для лабораторного исследования образцы сотов (соты) размером не менее 10×15 см с больными и погибшими личинками, куколками и среднюю пробу пыльцы (перги), предназначенную для продажи, в целлофановых пакетах в количестве 10 г от каждой партии.

1.4. Лабораторная диагностика аскосфероза пчел заключается в микроскопическом исследовании патологического материала, пыльцы и выделении чистой культуры гриба.

2.1. Для микроскопического исследования делают соскоб налета мицелия с поверхности пораженных личинок, помещают его на предметное стекло и наносят каплю 50 %-ного модного раствора глицерина или каплю лактофенола (20 г кристаллического фенола, 16 мл молочной кислоты и 31 мл глицерина). Исследование проводят при малом увеличении микроскопа (7×10).

2.2. В положительном случае обнаруживают гифы мицелия, характерные цисты, заполненные спорами.

Обнаружение грибных элементов в патологическом материале дает основание поставить предварительный диагноз на аскосфероз.

3.1. Для получения чистой культуры гриба из патологического материала (1 - 2 трупов пораженных личинок и 10 %-ной эмульсии пыльцы (перги) на стерильном физиологическом растворе) делают посев на одну из питательных сред 2 %-ный солодовый агар, картофельно-декстрозный агар, агар Сабуро или сусловый агар.

Перед посевом питательный агар расплавляют в водяной бане и после охлаждения до 45 - 50 °С добавляют в него антибиотики (пенициллина 50 БД и стрептомицина 100 БД на 1 мл среды) для подавления сопутствующей бактериальной флоры.

3.2 Пораженные личинки извлекают из ячеек, помещают в стерильную чашку Петри, разламывают их с помощью препаровальной иглы. Затем частицы размером не более 1 мм и эмульсию пыльцы помещают при помощи бактериологической петли в чашки Петри с одной из питательных сред в 3 - 5 точек (по одной частице в каждую точку). Посевы выдерживают при 26 - 30 °С и наблюдают за ними в течение 10 сут, имея в виду, что в процессе развития гриба на поверхности среды на 3 - 5-е сут появляются белые пушистые колонии, которые в дальнейшем могут приобретать вид зеленовато-серого, войлокообразного налета.

3.3. Чистую культуру гриба Ascosphaera apis получают путем дополнительного пересева культуры с периферии колоний, характерных для данного гриба.

3.4. Мазки из культуры исследуют под микроскопом. При положительном результате обнаруживают многоклеточный септированный мицелий с многоядерными клетками, ветвистые гифы, споровые шары, которые, в свою очередь, заключены в шаровидную цисту. Споры мелкие, эллиптические, гладкие, бесцветные.

Следует иметь в виду, что встречаются два подвида этого гриба: Ascosphaera apis var. apis, A. apis var. major, отличающиеся размерами споровых цист и спор Ascosphaera apis var. apis имеет размеры спор 3 - 3,8×2,3 мкм и диаметр споровых цист 32 - 99 мкм (в среднем 65,8 мкм), a Ascosphaera apis major имеют размеры спор 3,3 - 4,2×2,5 мкм и диаметр споровых цист 88,4 - 168 мкм (в среднем 128,4 мкм).

3.5. Одновременно необходимо дифференцировать полученную культуру гриба путем микроскопического и микологического исследований, имея в виду аспергиллез и возможность развития на перге гриба Bettsia alvei (Ascosphaera alvei), отличающегося от возбудителя аскосфероза пчел тем, что он не поражает расплод пчелиных семей, а часто поражает ячейки с пыльцой (пергой) осенью и весной, так как лучше растет при температуре до 20 °С. Гриб Bettsia alvei не образует внутри спороцисты споровых шаров и аскоспоры лежат свободно в спороцисте.

3.6. Лабораторный диагноз на аскосфероз устанавливают на основании положительных результатов микроскопического н микологического исследований.

3.7. Срок лабораторного исследования до 10 дней. При выделении из пыльцы (перги) гриба Ascosphaera apis ее нельзя использовать в качестве белковой подкормки пчелиным семьям.

С утверждением настоящих методических указаний утрачивают силу Методические указания по лабораторной диагностике аскосфероза пчел, утвержденные от 14 сентября 1983 г. № 115-6а

СОДЕРЖАНИЕ