Методические указания
Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ
от 5 июня 2000 г. № 13-7-2/2045
«Методические указания по лабораторной диагностике эймериозов животных»

1. Общие положения

1.1. Эймериозы (кокцидиозы) - протозойные болезни животных, вызываемые простейшими рода Eimeria отряда Coccidiida, встречаются повсеместно, чаще в весенне-летний периоды, в теплых помещениях возможны зимой и протекают остро, подостро, хронически. Сельскохозяйственные животные, пушные звери, кролики чаще болеют в возрасте - 15 - 120 дн., птицы - с 10-дневного возраста и старше.

1.2. Диагноз на эймериозы устанавливают с учетом эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований (микроскопического, копрологического).

1.3. В лабораторию для исследования на эймериозы направляют:

от 20 - 30 подозреваемых в заболевании животных из прямой кишки пробы фекалий до 5 г;

от павших или вынужденно убитых - отрезки пораженных тонких и толстых кишок, перевязанные с обоих концов;

от пушных зверей, кроликов и птиц - групповые пробы фекалий или трупы целиком.

Отобранный патологический материал и пробы фекалий упаковывают во влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора, а трупы - не позднее 4 - 6 ч после гибели.

1.4. Лабораторные исследования на эймериозы включают:

микроскопию препаратов из соскобов пораженных участков органов и кишечника;

копроскопию мазков из фекалий;

определение видов и интенсивности инвазии.

2. Микроскопическое исследование

2.1. Трупы животных вскрывают и делают соскобы с пораженных мест слизистых оболочек тонких, толстых кишок, дополнительно у кроликов - из печени, птиц - со слизистой слепых отростков и гусей - из почек. Соскобы исследуют сразу.

2.2. Из каждого соскоба готовят по одному препарату. Небольшую часть соскоба наносят на предметное стекло, добавляют 2 - 3 капли жидкости, состоящей из равных частей глицерина и воды, тщательно размельчают иглой, накрывают покровным стеклом и исследуют в раздавленной капле в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении в 140 - 280 раз.

2.3. При микроскопии учитывают, что меронты (шизонты) - тельца овальной или круглой формы, внутри которых сформировано множество мерозоитов; мерозоиты -клетки продолговатой формы с ядром; незрелые ооцисты - клетки с зернистой цитоплазмой шарообразной формы.

3. Копрологическое исследование

3.1. Фекалии исследуют для определения видового состава и количества ооцист эймерий.

3.2. Определение видов. Берут 3 г фекалий, переносят в ступку, добавляют 20 см3 воды, тщательно размешивают, фильтруют через капроновое или металлическое сито с размером ячеек 0,5 - 1,0 мм2, перемешанный фильтрат переливают в пробирку и центрифугируют при 2000 - 3000 об/мин в течение 2 - 3 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют жидкость, состоящую из равных частей насыщенного раствора хлорида натрия (380 - 400 г хлорида натрия растворяют в 1 дм3 горячей воды) и глицерина, размешивают и вновь центрифугируют при 1500 об/мин - 2 - 3 мин. При отсутствии глицерина можно использовать один насыщенный раствор хлорида натрия. Наибольшей флотационной способностью растворы обладают при температуре 20 - 22 °С. Металлической петлей (диаметр 5 - 7 мм) снимают с поверхностной пленки 3 капли, переносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении в 140 - 280 раз.

При микроскопии обнаруживают незрелые и спорулированные ооцисты эймерий. Виды эймерий дифференцируют по локализации, спорулированным ооцистам, их размеру, форме, цвету, характеру оболочек, наличии микропиле и остаточных тел в ооцисте (Приложение).

3.3. Определение интенсивности инвазии. Берут 3 г фекалий, переносят в ступку, добавляют 45 см3 воды, хорошо размешивают и фильтруют через металлическое или капроновое сито с размером ячеек 0,5 - 1,0 мм2. Затем берут 10 см3 фильтрата, переливают в пробирку, центрифугируют при 2000 - 2500 об/мин в течение 2 - 3 мин и жидкость сливают полностью. К осадку добавляют 10 см3 насыщенного раствора хлорида натрия, размешивают, пипеткой набирают 0,15 см3 суспензии, переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении 140 - 280 раз.

Подсчитывают количество ооцист эймерий в препарате. Подсчет ооцист проводят во всех 225 квадратах камеры Горяева и полученную сумму умножают на коэффициент 1111. Полученное количество показывает число ооцист в 1 г фекалий.

3.4. В зависимости от количества ооцист в 1 г фекалий определяют относительную степень пораженности по следующей таблице:

Вид животного

Количество ооцист в 1 г фекалий

слабая

средняя

сильная

Крупный и мелкий рогатый скот

до 1000

1000 - 5000

свыше 5000

Кролик

до 10000

10000 - 100000

свыше 100000

Птица, пораженная E.acervulina

до 1000

1000 - 30000

свыше 30000

У остальных видов эймерий птиц ооцист меньше

4. Результаты исследования считают положительными при обнаружении в препаратах исследованных материалов шизонтов, мерозоитов, незрелых и спорулированных ооцист эймерий.

5. Срок микроскопического (копрологического) исследования до 3 дн.

Методические указания по лабораторной диагностике эймериозов животных подготовлены Московской государственной академией ветеринарной медицины и биотехнологии (Н.Н. Евплов), Центральной научно-методической ветеринарной лабораторией (В.А. Седов, В.Д. Певнева), Всероссийским институтом экспериментальной ветеринарии (В.Т. Заблоцкий).

Утверждаю

Заместитель руководителя Департамента ветеринарии Минсельхозпрода России

В.В. Селиверстов


Приложение

к Методическим указаниям по лабораторной
диагностике эймериозов животных

Характеристика спорулированных ооцист распространенных видов эймерий

Вид эймерий

Локализация

Размер (мкм)

Форма

Цвет оболочки

Характер оболочки

Микропиле

Остаточное тело в ооцисте

1

2

3

4

5

6

7

8

Крупный рогатый скот

Eimeria zuemii

толстый кишечник

18×16,5

круглая

бесцветный

толстая

нет

нет

Е. Bovis

тонкий кишечник

27,7×20,3

овальная

светло-коричневый

толстая

едва заметно

нет

Е. Ellipsoidalis

тонкий кишечник

23,4×18,9

эллипсовидная

бесцветный

толстая

нет

нет

Овцы

Е. Ovinoidalis (Е. ninaekohljkimovae)

тонкий кишечник

17,6×13,3

овальная

желтовато-серый

тонкая

нет

нет

Е. ovina (Е. arloingi)

тонкий кишечник

28×19

вытянуто-эллипсоидальная

бесцветный

толстая

есть

нет

Е.faurei

тонкий и толстый кишечник

28×21

яйцевидная

прозрачный, желтоватый

тонкая

есть

нет

Свиньи

E. debliecki

тонкий кишечник

24,9×17,0

овальная, почти круглая

бесцветный

гладкая

нет

нет

E. scabra

толстый кишечник

31,9×22,5

овальная, эллипсоидальная

коричневый

сильно шероховатая

есть

нет

Верблюды

E. noelleri

тонкий кишечник

90×72,5

широко-овальная

желтоватый

толстая

есть

нет

E. cameli

тонкий кишечник

28,2×21

круглая

желто-зеленый, темно-бурый

 

есть

нет

E. dromedari

тонкий кишечник

27,8×22

овальная

коричневый

 

нет

нет

Северные олени

E. polaris

тонкий кишечник

25×15

овальная

желтый

 

нет

нет

E. tarandina

тонкий кишечник

19×17

яйцевидная

желтый

 

нет

нет

E. mayeri

тонкий кишечник

17×15

круглая

светло-серый

 

есть

нет

Пушные звери

E. vulpis

тонкий кишечник

32×24

овальная

бесцветный

 

есть

нет

E. mesnili

тонкий кишечник

17×10

овальная

бесцветный

 

есть

нет

Кролики

E. stiedae

в печени

35,0×20,5

овальная

желто-коричневый

гладкая, тонкая

есть

есть

E. perforans

тонкий кишечник

21,9×13,9

овальная, почти круглая

желто-коричневый

гладкая

есть

нет

E. magna

тонкий кишечник

35×24

овальная

коричневый

гладкая

есть

есть

E. media

тонкий кишечник

31,2×18,5

эллипсоидная, овальная

светло-желтый

гладкая

есть

есть

Птица

E. tenella

слепые отростки

19,0×22,0

овальная

бесцветный

гладкая

нет

нет

E. necatrix

тонкий кишечник

14,2×16,7

овальная

бесцветный

гладкая

нет

нет

E. maxima

тонкий кишечник

20,7×30,5

яйцевидная

желто-коричневый

шероховатая

нет

нет

E. acervulina

12-перстная кишка

14,6×18,3

овальная

светло-желтый

гладкая

заметно

нет

Содержание

1. Общие положения. 1

2. Микроскопическое исследование. 1

3. Копрологическое исследование. 1

5. Срок микроскопического (копрологического) исследования до 3 дн. 2

Приложение к Методическим указаниям по лабораторной диагностике эймериозов животных. 2