УТВЕРЖДАЮ Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР А.И. ЗАИЧЕНКО 28 января 1980 г. № 2139-80 |
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДУАЛА
В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОЧВЕ И ВОДЕ
ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Е.И. Марциновского и лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1.1. Дуал
1.2. 2-этил-6-метил-N-(N’-метил-2-метоксиэтил)-хлорацетанилид
1.3. Структурная формула:
1.4. СГА-24705
1.5. Химически чистое вещество дуала представляет собой бесцветную жидкость с точкой кипения 100 °С, хорошо растворяется в большинстве органических растворителей (хлороформ, гексан и др.). Слабо растворяется в воде 5 мг/л при 20 °С.
Разрушается в сильно кислотных и щелочных средах. Препарат малотоксичен для теплокровных животных. ЛД при оральном введении для крыс составляет 3170 мг/кг.
Выпускается в форме эмульгирующихся концентратов.
Метод основан на извлечении дуала из растительных проб, почвы и воды органическим растворителем (хлороформ, бензол), очистке экстрактов путем осаждения коэкстрактивных веществ и способом перераспределения между двумя несмешивающимися жидкостями.
Количественное определение проводят хроматографическим в тонком слое методом.
Минимально детектируемое количество 2 - 3 мкг, нижний предел определения 0,02 - 0,04 мг/кг.
Р - размах варьирования, % |
|
|
|
в растениях 86,0 - 91,5 |
|
|
в почве 92,5 - 97,5 |
|
∆ - среднее значение определения, % |
|
|
|
в растениях 85,5 |
|
|
в почве 95 |
95,0 |
S - стандартное отклонение, % |
|
|
|
в растениях 2,5 |
|
|
в почве 2,5 |
|
Доверительный интервал среднего при Р = 0,95 и n = 5 % |
||
|
для растений 85,5 ± 2,5 |
|
|
для почвы 95,6 ± 2,5 |
Метод специфичен, другие ацетанилидные препараты в данных условиях хроматографирования определению не мешают.
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 3160-51, CHCl3.
н-Гексан, х.ч., МРТУ 6-09-2937-66, CH3(CH2)4CH3.
Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-63, CH3COCH3.
Бензол, ч.д.а., ГОСТ 5955-68, C6H6.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66, Na2SO4.
Аммоний хлористый, х.ч., ГОСТ 3773-60, NH4Cl.
Кислота ортофосфорная, ч., ГОСТ 6552-58, H3PO4.
Силикагель ЛМ 5/40, ЧССР, или КСК.
Аммиак, ос.ч., МРТУ 6-09-3266-66, NH4OH.
Кальций сернокислый, ч.д.а., ГОСТ 3210, CaSO4 × 2H2O.
Серебро азотнокислое, х.ч., ГОСТ 1277-63, AgNO3.
Коагулирующий раствор: 5 г хлористого аммония растворяют в 10 мл дистиллированной воды, приливают 10 мл 85-процентной ортофосфорной кислоты и доливают до литра дистиллированной водой.
Проявляющий реактив: 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 7 мл аммиака и доводят до 100 мл ацетоном.
Стандартный раствор дуала в хлороформе с содержанием по д.н. 100 мкг/мл.
Колбы конические на шлифах КШ-500 29/32 ТС, ГОСТ 10394-72.
Колбы грушевидные ОКТ-14/23 ТС, ГОСТ 10394-72.
Делительные воронки ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.
Воронки.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, 100 мл.
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-IМ, ТУ 25-11-917-74.
Хроматографическая камера.
Микропипетки (0,1 - 0,2 мл).
Камера для опрыскивания.
Опрыскиватель.
Для приготовления сорбционной массы из силикагеля на 10 пластинок размером 9×12 см берут 35 г силикагеля, 2 г гипса и 90 мл дистиллированной воды. Силикагель с гипсом растирают в фарфоровой ступке, прибавляют воду и размешивают до образования однородной массы. 10 г суспензии наносят на пластинку и равномерно распределяют по поверхности.
Сушат пластинки в горизонтальном положении в течение 18 - 20 часов при комнатной температуре, хранят в эксикаторе.
Растительную пробу измельчают ножом на кусочки 0,5×0,5×0,5 см, зерно размалывают и отбирают среднюю пробу 40 г.
Почву в естественно-влажном состоянии или воздушно-сухую просеивают через почвенное сито и для анализа отбирают 100 г.
Проба воды - 200 мл.
Анализируемые навески помещают в конические колбы емкостью 250 мл; пробы воды - в делительные воронки, куда добавляют по 10 мл хлористого натрия. Из растений и почвы дуал экстрагируют 80 мл хлороформа или бензола путем встряхивания в течение 1,5 часа. Экстракты отфильтровывают через бумажный фильтр со слоем безводного сернокислого натрия, колбу и фильтр трижды промывают тем же растворителем по 20 мл. Из воды препарат экстрагируют хлороформом трижды по 10 минут порциями по 60, 50 и 40 мл. Объединенный экстракт сушат безводным сернокислым натрием.
Экстракты концентрируют под вакуумом до 0,5 - 1,0 мл при температуре воды 40 °С. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха.
Сухой остаток растворяют в 3 - 4 мл охлажденного ацетона и прибавляют 25 - 30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу на 40 минут помещают в холодильник. Водно-ацетоновую смесь после охлаждения фильтруют через плотный бумажный фильтр. Дуал экстрагируют в делительной воронке н-гексаном трижды в течение 5 минут порциями по 40 мл.
Объединенный экстракт концентрируют под вакуумом до 0,5 - 1,0 мл. Остаток растворителя удаляют в токе воздуха.
Сухой остаток растворяют в небольшом объеме хлороформа (0,2 - 0,3 мл) и наносят на расстоянии 2 см от нижнего края хроматографической пластинки со слоем силикагеля. Стенки колбы тщательно смывают несколькими порциями растворителя, который наносят в центр пятна. Справа наносят стандартные растворы дуала.
Для дополнительной очистки используют двумерную хроматографию. В качестве первой подвижной фазы применяют четыреххлористый углерод. Затем хроматографируют в системе подвижных растворителей диэтиловый спирт, четыреххлористый углерод в соотношении 2:3, повернув пластину на К 90° по направлению движения первой подвижной фазы. После того как фронт подвижного растворителя поднимется на высоту 10 см, хроматограмму вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и помещают на 5 минут под источник УФ-света, после чего ее опрыскивают проявляющим реактивом и снова облучают УФ-светом до четкого проявления темно-серых пятен дуала.
Rf дуала в данных условиях хроматографирования составляет 0,65 - 0,67.
Количественное определение производится путем сравнения интенсивности окраски и площади пятен проб и стандартных растворов.
Содержание препарата в анализируемой пробе, мг/л, мг/кг, рассчитывают по формуле:
где:
A - количество мкг стандартного раствора препарата;
S1 - площадь пятна стандартного раствора, мм2;
S2 - площадь пятна пробы, мм2;
P - вес или объем пробы, взятой на анализ, г, мл.
Соблюдать требования безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями, УФ-светом.