ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ МИКСОМАТОЗА
КРОЛИКОВ
(утверждены 8 мая 1981 г., № 116-6а)
1.1. Миксоматоз - острая инфекционная болезнь кроликов и зайцев. Возбудитель - ДНК-содержащий вирус, который относится к семейству вирусов оспы, устойчив во внешней среде и к химическим средствам.
1.2. Лабораторная диагностика миксоматоза кроликов заключается в гистологическом исследовании патологического материала. При отрицательном результате этого исследования и отсутствии характерных клинических признаков болезни с разрешения ветеринарного органа, края, республики, не имеющей областного деления, ставится биологическая проба.
(Новая редакция. Изм. от 18.04.1985 г.)
1.3. Лабораторный диагноз на миксоматоз кроликов считается установленным при получении положительных результатов биологической пробы на кроликах и гистологического исследования.
1.4. Срок исследования - 15 сут.
2.1. В лабораторию доставляют клинически больных кроликов или их трупы (не позднее 2 ч после гибели) или патологический материал (участки кожи вместе с инфильтрированной подкожной клетчаткой) в термосе со льдом или 50 % -ном растворе х. ч. глицерина.
3.1. Для исследования отбирают от вынужденно убитых или павших кроликов измененные участки кожи вокруг век, губ, носа, ушей, гениталий, ануса, вдоль позвоночника.
3.2. В стерильные чашки Петри вырезают ножницами кусочки студенисто-отечной подкожной клетчатки вместе с дермальным слоем кожи, промывают физиологическим раствором или раствором Хенкса с антибиотиками (пенициллин 1000 ЕД/мл и стрептомицин 500 мг/мл). Затем кусочки ткани переносят в стерильные ступки, измельчают, тщательно растирают, разводят физиологическим раствором или раствором Хенкса до 10 %-ной суспензии, центрифугируют при 1 - 2 тыс. об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками в вышеуказанных дозах, выдерживают при комнатной температуре в течение 2 ч и проверяют на стерильность высевом на питательные среды.
При отсутствии роста микрофлоры на питательных средах надосадочную жидкость используют для заражения кроликов.
4.1. Биопробу проводят на молодых кроликах (лучше использовать белых) массой 1,5 - 2 кг, взятых из хозяйств, благополучных по инфекционным заболеваниям.
4.2. Двум кроликам на предварительно выбритый участок кожи в области бока вводят исследуемый материал внутрикожно в дозе 0,1 - 0,2 мл и по капле в конъюнктивальные мешки глаз.
Для контроля оставляют двух незаряженных кроликов.
4.3. При положительной биопробе на 3 - 6-й день после заражения на месте введения появляются покраснение и отек.
На 5 - 10-й день развиваются конъюнктивиты и риниты. В дальнейшем заболевание может протекать в двух формах: отечной или узелковой.
При отечной форме в области головы, ушей, ануса и наружных половых органов развиваются отечно-студенистая инфильтрация подкожной клетчатки, истечения из глаз серозно-фибринозного или гнойного экссудата. На 4 - 10-й день после появления первых клинических признаков заболевания кролики погибают.
При узелковой форме в коже ушей, головы, на веках и других частях тела образуются узелки, которые впоследствии некротизируются. При этой форме заболевание может проходить без гибели животных.
Контрольные кролики должны оставаться здоровыми.
При патологоанатомическом исследовании обнаруживают в подкожной клетчатке участки студенистого инфильтрата, иногда - отек и кровоизлияния в легких.
5.1. Для гистологических исследований берут кусочки кожи вместе со студнеобразно измененной подкожной клетчаткой, фиксируют в 10 - 15 %-ном нейтральном формалине.
5.2. После фиксации кусочки патологического материала заливают в парафин, срезы красят гематоксилин-эозином, тионином или крезилвиолетом (на выявление слизи - окраска слизи в синий цвет).
При миксоматозе в клетках эпидермы кожи и корневого влагалища волос наблюдаются вакуолизация цитоплазмы, кариолизис и кариорексис, встречаются внутриклеточные цитоплазматические ацидофильные включения: в кориуме (дерме) и подкожной клетчатке - серозный инфильтрат, набухшие фибробласты, ретикулярные клетки, эозинофилы и «миксомные» клетки (1).