|
ГОСУДАРСТВЕННОЕ
САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ |
3.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций
микроорганизмов - продуцентов,
бактериальных препаратов и их
компонентов в атмосферном воздухе
населенных мест
Методические
указания
МУК 4.2.1054-01
Минздрав
России
Москва 2001
1. Подготовлены: д.м.н. М.В. Далин (Российский Университет дружбы народов), к.м.н. Н.П. Сергеюк (Научно-исследовательский центр «ЭКОС») на основании материалов секции «Гигиенические аспекты биотехнологии микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной Комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию Минздрава России (прот. № 7 от 28.04.01).
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 6 июня 2001 г.
4. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ
|
Главный
государственный санитарный |
3.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение
концентраций микроорганизмов-
продуцентов, бактериальных препаратов и их
компонентов в атмосферном воздухе
населенных мест
|
Методические указания |
1. Общие положения и область применения
Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций промышленных микроорганизмов и бактериальных препаратов в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне от 100 до 5000 клеток в 1 м3 воздуха.
Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации промышленных микроорганизмов и бактериальных препаратов в атмосферном воздухе населенных мест и оценки соответствия уровня их содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТов 17.2.4.02-81 «Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ» и 8.653-96 ГСИ «Методики выполнения измерений».
Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
2. Характеристика штамма микроорганизма
2.1. Таксономическое положение штамма
2.2. Морфология колоний и клеток. (Данные по каждому штамму для п.п. 2.1, 2.2 представлены в табл.)
3. Пределы измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток микроорганизма в воздушной среде в диапазоне концентраций от 10 до 5000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.
4. Метод измерений
Метод основан на аспирации из воздуха клеток микроорганизма на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
5. Средства измерений, оборудование, вспомогательные устройства, материалы
При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
|
Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова) Импактор микробиологический ИМБ-15 |
ТУ 64-12791-77 |
|
Прибор для бактериологического анализа воздуха «Флора-100» |
|
|
Термостаты электрические суховоздушные или водяные |
|
|
Автоклав электрический |
ГОСТ 9586-75 |
|
Бокс, оборудованный бактерицидными лампами |
|
|
Холодильник бытовой |
|
|
Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200 |
|
|
Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211 |
|
|
Лупа с увеличением 10× |
|
|
Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм |
|
|
Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл |
|
|
Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл |
|
|
Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл |
|
|
Секундомер |
ГОСТ 9586-75 |
|
Барометр |
ГОСТ 24696-79 |
|
Марля медицинская |
ГОСТ 9412-77 |
|
Вата медицинская гигроскопическая |
ГОСТ 25556-81 |
5.2. Питательные среды
|
Агар микробиологический |
Селективная среда (среда для каждого штамма микроорганизмов представлена в табл.).
6. Требования безопасности
При выполнении измерений концентрации клеток в воздушной среде соблюдают следующие требования.
Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТу 12.1.005-88.
Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТу 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
Руководство «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980), «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).
Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
7. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.
8. Проведение измерения
8.1. Условия отбора проб воздуха
Для определения концентрации микроорганизма производят отбор проб воздуха при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время отбора пробы воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. В том случае, если определяется концентрация микроорганизмов имеющих обильный воздушный мицелий, отбор производят в жидкостные поглотители с последующим разведением и посевом на плотную питательную среду.
8.2. Выполнение анализа
Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.
Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. При необходимости в селективную среду добавляют компоненты, подавляющие рост посторонней микрофлоры. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате и производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.
9. Вычисление результатов измерения
Расчет концентрации клеток в перерасчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:
X - концентрация клеток в воздухе;
N - количество колоний, выросших на чашке;
1000 - коэффициент перерасчета на 1 м3 воздуха;
V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).
Для консорциумов микроорганизмов используют следующую методику подсчета:
A = 100∙N/d, где
A - концентрация консорциума (КОЕ/м3);
N - концентрация контрольного микроорганизма (КОЕ/м3);
d - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).
Контрольные микроорганизмы, входящие в состав консорциумов (препаратов, созданных на основе живых микроорганизмов и включающих в себя два и более штаммов), представлены в табл. с пометкой КМ, там же приведены торговые названия препаратов.
Используемые сокращения и условные обозначения
|
АС - |
Агаризованная среда |
|
МПА - |
Мясо-пептонный агар |
|
МСЭА - |
Агар с экстрактом мозга и сердца |
|
РНСП - |
Роды с неясным систематическим положением |
|
САС - |
Синтетическая агаризованная среда |
|
ВЗ - |
Выброс запрещен |
Пояснение к таблице
Микроорганизмы, сведения о которых представлены в табл., разделены на группы, не являющиеся формальными таксономическими категориями, но подразделяющие штаммы на легко определяемые фенотипические единицы.
Таксономическое положение каждого штамма определено до уровня семейства за исключением т.н. «Родов с неясным систематическим положением» согласно «Определителю бактерий Берджи» (М., «Мир», 1997).
Для каждого из штаммов микроорганизмов представлена селективная твердая питательная среда и специальные добавки в среду, необходимые для подавления посторонней микрофлоры.
Колонка «Примечания» содержит сведения об особенностях штамма как упрощающих его идентификацию (способность к образованию какого-либо пигмента, специфическая ферментативная активность и т.д.), так и создающих возможность экспресс-диагностики.