ГОСТ ISO 15914-2016
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
КОРМА ДЛЯ ЖИВОТНЫХ
Ферментативный метод определения содержания общего крахмала
Animal feeding stuffs. Enzymatic determination of total starch content
МКС 65.120
Дата введения 2017-07-01
Предисловие
Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"
Сведения о стандарте
1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт кормов имени В.Р.Вильямса (ФГБНУ "ВНИИ кормов им.В.Р.Вильямса") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5
2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии
3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 мая 2016 г. N 88-П)
За принятие проголосовали:
Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97 |
Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97 |
Сокращенное наименование национального органа по стандартизации |
Армения |
AM |
Минэкономики Республики Армения |
Беларусь |
BY |
Госстандарт Республики Беларусь |
Казахстан |
KZ |
Госстандарт Республики Казахстан |
Киргизия |
KG |
Кыргызстандарт |
Россия |
RU |
Росстандарт |
4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 сентября 2016 г. N 1253-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 15914-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.
5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 15914:2004* "Корма для животных. Ферментативный метод определения содержания общего крахмала" ("Animal feeding stuffs - Enzymatic determination of total starch content", IDT).
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.
Международный стандарт разработан Техническим комитетом по стандартизации ISO/TC 34 "Пищевые продукты", Подкомитетом SC 10 "Корма для животных" Международной организации по стандартизации (ISO).
При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА
6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2020 г.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"
1 Область применения
Настоящий стандарт устанавливает ферментативный метод определения содержания общего крахмала в кормах для животных и в сырье для их производства.
Метод также применим для установления наличия примесей в крахмале.
В анализируемой пробе не должно содержаться компонентов, которые обладают абсорбцией при длине волны 340 нм.
Аналитический диапазон метода определения общего крахмала в анализируемой пробе от 40 до 1000 г/кг. Диапазоны содержания от 200 до 1000 г/кг и от 40 до 200 г/кг крахмала определяются по различным стандартным растворам глюкозы. В случае содержания крахмала в анализируемой пробе в диапазоне от 40 г/кг до 200 г/кг применяется другая процедура разбавления стандартного раствора глюкозы и проб.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).
ISO 3696:1987, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)
ISO 6498:1998, Animal feeding stuffs - Preparation of test samples (Корма для животных. Приготовление проб для испытания)
_______________
Заменен на ISO 6498:2012.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 крахмал (starch): Натуральный растительный полимер, состоящий из длинных неразветвленных цепей 1,4--D-глюкозных единиц (амилоза) и/или длинных
-1,6-разветвленных цепей
-1,4-связанных глюкозных единиц (амилопектин).
3.2 содержание крахмала (starch content): Массовая доля крахмала и высокомолекулярных продуктов его распада, нерастворимых в 40%-ном этаноле, определенная в соответствии с методом, установленным в настоящем стандарте.
Примечание - Содержание крахмала выражается в граммах на килограмм.
4 Сущность метода
Размолотую анализируемую пробу экстрагируют 40%-ным этанолом для удаления растворимых сахаров. После удаления сахаров остаток анализируемой пробы для экстракции и растворения в ней крахмала обрабатывают водным раствором диметилсульфоксида (ДМСО) (объемная доля 90%) при температуре 100°C, затем концентрированной соляной кислотой при температуре 60°C.
Растворенный и разжиженный крахмал количественно превращается в глюкозу с помощью фермента амилоглюкозидазы. Количество образовавшейся глюкозы определяют гексокиназным методом [1], [2].
5 Реактивы
Используют реактивы установленной аналитической чистоты.
5.1 Вода чистотой не менее 3-й степени по ISO 3696.
5.2 Этанол (CH
OH) объемной долей 40%
Этанол объемом 417 см (объемная доля 96%) разбавляют водой до 1000 см
.
5.3 Соляная кислота, c(HCl)=12 моль/дм.
5.4 Водный раствор гидроксида натрия, c(NaOH)=4 моль/дм
В химическом стакане растворяют 40 г гидроксида натрия в 50 см воды. После охлаждения раствор переносят в мерную колбу вместимостью 250 см
и его объем доводят до метки водой.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Выделяется тепло. Необходимо проводить растворение в защитных очках.
5.5 Раствор уксусной кислоты, c(CHCOOH)=2 моль/дм
В мерную колбу вместимостью 500 см вносят 200 см
воды, затем 59 см
ледяной уксусной кислоты. Доводят объем раствора в колбе до метки водой.
5.6 Раствор уксуснокислого натрия, c(CHCOONa)=2 моль/дм
В мерной колбе вместимостью 500 см растворяют в воде 82,0 г уксуснокислого натрия и разбавляют раствор до метки водой.
5.7 Буфер уксуснокислого натрия, c(CHCOONa/H)=2 моль/дм
, pH=4,8 ед. pH
Смешивают 41 см раствора уксусной кислоты (5.5) 59 см
раствора уксуснокислого натрия (5.6). Проверяют значение pH на pH-метре и, при необходимости, устанавливают требующееся значение pH, пользуясь раствором уксусной кислоты или уксуснокислого натрия.
Ежедневно готовят свежий буферный раствор.
5.8 Диметилсульфоксид (ДМСО), объемной долей 90%
Смешивают ДМСО и воду в объемном соотношении 9:1.
5.9 Осветляющие растворы по Каррезу
5.9.1 Раствор железистосинеродистого калия (II), c[KFe(CN)
]=0,25 моль/дм
.
В мерной колбе вместимостью 1 дм растворяют в воде 106 г трехводного железистосинеродистого калия (II) [K
Fe(CN)
·3H
O]. Доводят объем раствора до метки водой.
5.9.2 Раствор уксуснокислого цинка в 0,5 моль/дм уксусной кислоты, c[Zn(CH
CO
)
]=1 моль/дм
.
В мерной колбе вместимостью 1 дм растворяют в воде 219,5 г двуводного уксуснокислого цинка [
] и 30 г ледяной уксусной кислоты. Доводят объем раствора до метки водой.
5.10 Раствор йода в йодистом калии
В мерной колбе вместимостью 1 дм растворяют в воде 12,7 г йода (I
) и 24,0 г йодистого калия (KI). Доводят объем раствора водой до метки. Перед использованием полученный раствор разбавляют в 10 раз.
5.11 Стандартный раствор глюкозы
5.11.1 Стандартные растворы глюкозы, используемые при анализе проб, содержащих крахмал в пределах 200-1000 г/кг
Готовят три стандартных раствора глюкозы c[CH
O
]=0,0194 моль/дм
. В каждой мерной колбе вместимостью 100 см
растворяют в воде (350±1) мг безводной глюкозы, взвешенной с точностью 1 мг. Доводят объем раствора до метки водой.
5.11.2 Стандартные растворы глюкозы, используемые при анализе проб, содержащих крахмал в пределах 40-200 г/кг
Готовят три стандартных раствора глюкозы c[CH
O
]=0,0039 моль/дм
. В каждой мерной колбе вместимостью 500 см
растворяют в воде (350±1) мг безводной глюкозы. Доводят объем раствора до метки водой.
Ежедневно готовят свежие стандартные растворы глюкозы.
5.12 Раствор амилоглюкозидазы (АМГ), 160 единиц/см
Амилоглюкозидазу (АМГ) массой 267 мг [EC 3.2.1.3 (Aspergillus niger, Roche Diagnostics, No 1202367, 6 U/mg)] растворяют в смеси 9 см
воды и 1 см
буфера уксуснокислого натрия (5.7). При хранении и использовании фермента необходимо тщательно соблюдать рекомендации производителя.
_______________
Roche Diagnostics No. 1202367 является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.
Если используется другой фермент, следует учитывать его активность, как указано в примечании. В этом случае необходимую массу фермента, достаточную для разложения крахмала, определяют в соответствии с его активностью.
Примечание - Различные поставщики фермента используют различные обозначения единиц активности фермента. В настоящем стандарте использовано следующее обозначение единицы активности фермента АМГ - 1 единица амилоглюкозидазы, способная выделять 1 мкмоль глюкозы из гликогена за 1 мин при 25°C и pH=4,75 ед. 10 см раствора фермента достаточно для 75 определений.
5.13 Набор реактивов для определения концентрации D-глюкозы ферментативным гексокиназным УФ-методом (R-Biopharm, No. 716251). Согласно инструкции производителя неиспользованные наборы можно хранить в течение года при температуре 4°C. Реактивы, включенные в набор и их приготовление при проведении анализов - по 5.13.1 и 5.13.2.
________________
R-Biopharm AG No. 716251 является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.
5.13.1 Раствор буфер/субстрат (склянка 1)
Содержимое склянки 1 растворяют в 45 см воды. Реактив хранят при температуре 4°C в темном месте в течение не более четырех недель и используют при комнатной температуре.
5.13.2 Раствор фермента (склянка 2)
Раствор готов для использования.
5.13.3 Окрашивающий раствор
Смешивают 22,5 см раствора буфер/субстрат (5.13.1) с 95 см
воды и 0,45 см
раствора фермента (5.13.2) и гомогенизируют. Полученное количество раствора достаточно для проведения приблизительно 40 измерений. Используют только свежеприготовленные окрашивающие растворы при комнатной температуре.
6 Оборудование, посуда и вспомогательные материалы
6.1 Аналитические весы с точностью взвешивания 0,1 мг.
6.2 Центрифуга с ускорением (180±10) g и 3000 g, подходящая для пробирок с завинчивающимися крышками вместимостью 12 см (значение g дается на дне пробирки).
6.3 Водяная баня, поддерживающая температуру (100±2)°C.
6.4 Водяная баня, поддерживающая температуру (60±1)°C.
6.5 pH-метр градуированный с комбинированным стеклянным электродом точностью измерения 0,01 ед. pH.
6.6 Микропипетки градуированные с регулируемым объемом раствора: 40-200 мкдм, 200-1000 мкдм
, 1-5 см
и дозатор с регулируемым объемом раствора 1-5 см
.
6.7 Спектрометр с проточной кюветой, позволяющий проводить измерения при длине волны 340 нм.
6.8 Ротационный шейкер с частотой вращения 50 об/мин для центрифужных пробирок с завинчивающимися крышками (6.11).
6.9 Дозатор/разбавитель Hook&Tucker Compudil D.
________________
Hook&Tucker Compudil D является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.
6.10 Сушильный шкаф с принудительной вентиляцией воздуха.
6.11 Стеклянные центрифужные пробирки, 10016 мм, с завинчивающимися крышками, подходящими к резиновым пробкам, покрытым фторопластом.
6.12 Мерные колбы вместимостью 100 см широкогорлые, снабженные притертым стеклянным соединением 14/23, позволяющие измерять значение pH раствора в колбе комбинированным стеклянным электродом.
6.13 Мешалка для пробирок (Vortex mixer) для альтернативного метода разложения и растворения крахмала по 8.4.2.
________________
Vortex mixer является примером имеющегося в продаже подходящего продукта. Эта информация предоставляется для удобства пользователей настоящего стандарта.
6.14 Шейкерная водяная баня, поддерживающая температуру (100±2)°C, с длиной хода 2 см, частотой колебаний 150-200 раз в минуту. Водяная баня должна быть снабжена штативом, чтобы пробирки размещались в воде в горизонтальном положении.
6.15 Стеклянные центрифужные пробирки вместимостью не менее 20 см с завинчивающимися насадками, подходящими к резиновым пробкам, покрытым фторопластом.
6.16 Стеклянные шарики диаметром 3 мм.
7 Приготовление анализируемой пробы
Анализируемую пробу готовят в соответствии с ISO 6498.
8 Проведение анализа
8.1 Анализируемая проба
Анализы выполняют в двукратной повторности.
Взвешивают около 200 мг анализируемой пробы (раздел 7) в центрифужной пробирке (6.11). Во второй центрифужной пробирке взвешивают вторые 200 мг как дубликат подготовленной пробы (раздел 7).
Анализируют пробы в каждой пробирке.
8.2 Экстракция сахаров
В каждую пробирку добавляют 10 см этанола (5.2). Экстрагируют растворимые сахара путем непрерывного встряхивания суспензии в течение 10 мин на ротационном шейкере (6.8). Затем центрифугируют в течение 10 мин на центрифуге (6.2) с радиальным ускорением (180±10)g и удаляют надосадочную жидкость. Экстракцию проводят дважды.
8.3 Холостая проба
Начиная с этой стадии в каждой серии анализов выполняют холостое определение, которое включает все стадии анализа, кроме взятия навески анализируемой пробы в пробирку.
8.4 Разложение крахмала
8.4.1 Общее
Разложение и растворение крахмала можно выполнить двумя способами (8.4.2 - способ 1 или 8.4.3 - способ 2). При проведении анализа по 8.4.3 анализируемую пробу помещают в стеклянную центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой вместимостью не менее 20 см (6.15).
8.4.2 Проведение анализа 1
В пробирку с анализируемой пробой при непрерывном перемешивании на мешалке для пробирок (6.13) дозатором добавляют 10 см ДМСО (5.8) и продолжают перемешивать до получения свободной от комочков суспензии. Пробирку закрывают завинчивающейся крышкой.
Примечание - Энергичная гомогенизация при добавлении ДМСО необходима для предотвращения образования микрогеля и/или комочков. Образование микрогеля и комочков приводит к получению ошибочного результата анализа, главным образом, заниженного, в связи с неполным гидролизом крахмала ферментом АМГ.
После гомогенизации пробирку немедленно вставляют в ротационный шейкер (6.8) и помещают на 30 мин в сушильный шкаф при температуре 100°C для расщепления крахмала. Пробирку охлаждают, после чего пипеткой (6.6) добавляют 1,7 см концентрированной соляной кислоты (5.3), тщательно перемешивают. Пробирку закрывают и помещают в ротационный шейкер. Для частичного гидролиза пробы пробирку ставят в сушильный шкаф (6.10) при непрерывном встряхивании в течение 30 мин при температуре 60°C.
Далее анализ выполняют по 8.4.4.
8.4.3 Проведение анализа 2
В остаток в стеклянной центрифужной пробирке (6.15) помещают 15 стеклянных шариков (6.16). В пробирку с помощью раздаточного устройства/разбавителя, при непрерывном перемешивании на мешалке (6.13), добавляют 10,0 см водного ДМСО до получения суспензии без комочков. Пробирку закрывают завинчивающейся крышкой.
Примечание - Энергичная гомогенизация при добавлении ДМСО необходима для предотвращения образования микрогеля и/или комочков. Микрогель и комочки приводят к ошибочному результату определения содержания крахмала.
Пробирку помещают в штативе в горизонтальном положении в кипящую водяную баню (6.14) и встряхивают в течение 30 мин. После охлаждения в нее пипеткой (6.6) добавляют 1,7 см концентрированной соляной кислоты (5.3) и тщательно перемешивают. Пробирку закрывают и помещают в водяную баню при температуре (60±1)°C, встряхивают в течение 30 мин. При этом происходит частичный гидролиз крахмала. Далее анализ выполняют по 8.4.4.
8.4.4 Регулирование значения pH
Пробирку охлаждают и ее содержимое переносят в мерную колбу вместимостью 100 см (6.12). Добавляют 5 см
водного раствора гидроксида натрия (5.4) и 2,5 см
буфера уксуснокислого натрия (5.7), раствор гомогенизируют. Измеряют значение pH раствора на pH-метре (6.5). При необходимости значение pH устанавливают до (4,8±0,1) ед. pH разбавленной соляной кислотой или гидроокисью натрия. Смывают раствор и приставшие с ним частички пробы с электродов pH-метра водой в ту же мерную колбу и доводят объем раствора до метки водой.
8.5 Ферментативное разложение крахмала в глюкозу
Сразу после гомогенизации пипеткой (6.6) переносят 5,00 см (этот объем в формуле расчета содержания крахмала по 9.2 соответствует объему, обозначенному как
) гомогенизированного раствора расщепленного и частично разложенного крахмала (8.4.4) в чистую и сухую стеклянную пробирку (6.11). Пипеткой (6.6) добавляют 0,125 см
раствора фермента АМГ (5.12). Закрывают пробирку завинчивающейся крышкой и тщательно гомогенизируют. Раствор инкубируют в водяной бане при температуре 60°C в течение времени не менее 16 ч. Для инактивации АМГ пробирку помещают в кипящую водяную баню на 15 мин. Пробирку охлаждают до комнатной температуры и добавляют пипеткой 0,125 см
раствора железистосинеродистого калия (5.9.1) и встряхивают в течение 1 мин. Добавляют пипеткой 0,125 см
раствора уксуснокислого цинка (5.9.2) и снова встряхивают в течение 1 мин. В пробирке содержится 5,375 см
раствора (который равен
при расчетах в 9.2). Затем центрифугируют в течение 10 мин с радиальным ускорением не менее 3000 g. Надосадочную жидкость переносят в чистую и сухую пробирку.
Для проверки полноты гидролиза крахмала в центрифужную пробирку добавляют несколько см воды, кипятят в течение 10 мин, охлаждают и вносят 0,2 см
раствора йода. Голубая окраска показывает наличие крахмала, что означает его неполное разложение. В случае наличия крахмала анализ данной пробы повторяют (см. 8.1).
8.6 Ферментативное определение содержания глюкозы
8.6.1 Пробы с содержанием крахмала 200-1000 г/кг
В отдельные чистые сухие пробирки помещают по 0,5 см каждого из растворов гидролизованного крахмала (8.5), холостой пробы (8.3), три стандартных раствора глюкозы (5.11.1) и воду (5.1). В пробирки с помощью дозатора/разбавителя (6.9) приливают по 9,5 см
воды (5.1) и гомогенизируют.
8.6.2 Пробы с содержанием крахмала 40-200 г/кг
Отбирают пипеткой по 0,5 см растворов гидролизованного крахмала (8.5), холостой пробы (8.3), трех стандартных растворов глюкозы (5.11.2) и воды (5.1) в отдельную чистую сухую пробирку. Отобранные растворы разбавляют при помощи дозатора/разбавителя (6.9) с 1,5 см
воды (5.1) и гомогенизируют.
Если ожидается низкое содержание крахмала (менее 200 г/кг), для повышения чувствительности определения используют другое соотношение разбавления для ферментативного гидролиза крахмала в глюкозу. Такое же разбавление необходимо соблюдать и для холостой пробы.
Готовят стандартные растворы глюкозы сравнительно более низкой концентрации и разбавляют стандартные растворы также, как и растворы анализируемой и холостой проб.
Колориметрические измерения холостой пробы (8.3), воды (5.1) и трех стандартных растворов глюкозы проводят дважды. Анализируемые пробы, содержащие гидролизованный крахмал, измеряют один раз.
Пипеткой (6.6) переносят по 0,4 см разбавленных растворов анализируемой пробы, холостой пробы, разбавленных стандартных растворов глюкозы и воды в чистые сухие центрифужные пробирки. В пробирки пипеткой (6.6) добавляют 2,62 см
окрашивающего раствора (5.13.3) и тщательно перемешивают. Измеряют абсорбцию (см. 6.7) раствора при длине волны 340 нм относительно воды.
9 Обработка и выражение результатов
Вычисляют значение абсорбции для каждого их трех стандартных растворов глюкозы (E), для чего из значения абсорбции стандартного раствора глюкозы, полученного на приборе (E
) вычитают значение абсорбции окрашенной воды (E
), по формуле
. (1)
Значение абсорбции неокрашенной воды (по определению) равно нулю.
Используя линейный регрессионный анализ, строят градуировочный график для значений абсорбции против содержания глюкозы в неразбавленных стандартных растворах глюкозы (в г/дм).
Вычисляют значение абсорбции раствора анализируемой пробы (E), для чего из значения абсорбции раствора пробы, полученного на приборе (E
), вычитают значение абсорбции раствора холостой пробы (E
) по формуле
. (2)
Используя градуировочный график, (9.1), вычисляют содержание глюкозы () в неразбавленных растворах пробы (8.5), г/дм
.
Смотреть приложение A.
9.2 Вычисление содержания крахмала
Содержание крахмала в анализируемой пробе , г/кг, вычисляют по формуле
, (3)
где - содержание глюкозы в растворе пробы, вычисленное в соответствии с 9.1, г/дм
;
V - объем раствора крахмала в 8.5, взятого для гидролиза (5,00 см
);
V - общий объем раствора после ферментативного гидролиза крахмала в глюкозу в 8.5, равный 5,375 см
;
m - масса анализируемой пробы, г.
Для вычисления содержания крахмала по вышеприведенной формуле необходимо, чтобы были использованы соответствующие разбавления растворов пробы в 8.6.1 и стандартных растворов глюкозы в 5.11.
10 Прецизионность
10.1 Межлабораторные испытания
Подробности межлабораторных испытаний по определению прецизионности метода приводятся в приложении B. Значения, полученные в межлабораторных испытаниях, не применимы для других диапазонов концентрации и матриц, отличающихся от приведенных.
10.2 Повторяемость
Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытания, полученными с использованием одного и того же метода, на идентичном анализируемом материале в одной и той же лаборатории одним и тем же оператором на одном и том же оборудовании в течение короткого интервала времени, не должна превышать более чем в 5% случаев предел повторяемости:
- 14 г/кг для гороха, комбикорма молочного скота и тапиоки;
- 17 г/кг для корма поросят;
- 48 г/кг для корма кур-несушек (см. приложение B).
10.3 Воспроизводимость
Абсолютная разница между двумя независимыми единичными результатами испытания, полученными с использованием одного и того же метода на идентичном анализируемом материале в разных лабораториях различными операторами на различном оборудовании в течение короткого интервала времени, не должна превышать более чем в 5% случаев предел воспроизводимости:
- 25 г/кг для корма поросят;
- 34 г/кг для тапиоки;
- 36 г/кг для комбикорма молочного скота;
- 48 г/кг для корма кур-несушек;
- 50 г/кг для гороха (см. приложение B).
11 Протокол испытаний
Протокол испытаний должен включать:
- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;
- использованный метод отбора проб, если он известен;
- использованный метод анализа со ссылкой на настоящий стандарт;
- все подробности анализа, не установленные в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, вместе с подробностями любых случайностей, которые могли оказать влияние на результат(ы) анализа;
- полученный результат анализа или два результата анализа, если контролировалась повторяемость.
Приложение A
(справочное)
Отдельные примечания к ходу проведения анализа
A.1 Градуировочная кривая, построенная по результатам трехкратного измерения холостого и стандартного растворов, более достоверна, чем кривая, построенная на результатах однократного измерения холостого и пяти градуировочных растворов различных концентраций [5].
A.2 Для получения точных результатов анализируемая проба не должна содержать компонентов, которые обладают абсорбцией или абсорбцией в условиях проведения анализа при длине волны 340 нм. Поэтому при анализе неизвестных проб следует контролировать отсутствие в них таких компонентов следующим способом.
По 0,4 см подготовленных по 8.6.1 растворов анализируемой пробы и холостой пробы пипеткой переносят в стеклянные пробирки. В пробирки прибавляют 2,6 см
окрашивающего раствора, приготовленного без добавления раствора фермента.
Через 30-60 мин измеряют абсорбцию растворов при длине волны 340 нм. Разница в абсорбции между растворами анализируемой и холостой проб не должна превышать 0,002 единицы абсорбции. Для анализа проб, у которых эта разница выше, метод не применим. Пробы, исследованные при разработке настоящего стандарта, - пробы кормов для животных, зерен злаков (кукурузы, пшеницы), лебеды и лиофильно-высушенной картофельной мезги - удовлетворяли этому условию.
Приложение B
(справочное)
Результаты межлабораторных испытаний
Межлабораторные испытания проводились в 1998 г. в соответствии с [4]. Участвовало двенадцать лабораторий. Изучались пробы обезвоженной тапиоки, корма для кур-несушек, зерна гороха, корма для поросят и комбикорма для молочного скота. Показатели прецизионности приводятся в таблице B.1.
Таблица B.1 - Статические* результаты межлабораторного исследования
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.
|
Проба | ||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Количество лабораторий после удаления выбросов |
9 |
10 |
9 |
8 |
10 |
Количество принятых результатов |
18 |
20 |
18 |
16 |
20 |
Среднее содержание крахмала, г/кг |
456 |
447 |
233 |
704 |
394 |
Стандартное отклонение повторяемости s |
5 |
6 |
5 |
5 |
17 |
Коэффициент вариации повторяемости, % |
1,1 |
1,3 |
2,1 |
0,7 |
4,3 |
Предел повторяемости r, 2,8·s |
14 |
17 |
14 |
14 |
48 |
Стандартное отклонение воспроизводимости s |
18 |
9 |
13 |
12 |
17 |
Коэффициент вариации воспроизводимости, % |
3,9 |
2,0 |
5,6 |
1,7 |
4,3 |
Предел воспроизводимости R, 2,8·s |
50 |
25 |
36 |
34 |
48 |
Пробы:
1 - зерно гороха;
2 - корм для поросят;
3 - корм для молочного скота;
4 - тапиока обезвоженная;
5 - корм для кур-несушек.
|
Приложение ДА
(справочное)
Сведения о соответствии ссылочных международных стандартов межгосударственным стандартам
Таблица ДА.1
Обозначение ссылочного международного стандарта |
Степень соответствия |
Обозначение и наименование соответствующего |
ISO 3696:1987 |
IDT |
ГОСТ ISO 3696-2013 "Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля" |
ISO 6498:1998 |
- |
*, |
* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его принятия рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта.
Примечание - В настоящем стандарте использовано следующее условное обозначение степени соответствия стандартов:
- IDT - идентичные стандарты.
|
_______________
Действует ГОСТ ISO 6498-2014 "Корма, комбикорма. Подготовка проб для испытаний", идентичный ISO 6498:2012.
Библиография
[1] |
Brunt K., Sanders P. and Rozema T. The enzymatic determination of starch in food, feed and raw materials of the starch industry. Starch/ | |
[2] |
Method of enzymatic bioanalysis and food analysis. Boehringer Mannheim, 1995, pp.46-49 and 126-129 | |
[3] |
ISO 5725-1:1994 |
Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 1: General principles and definitions [Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Общие принципы определений] |
[4] |
ISO 5725-2:1994 |
Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method [Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерения] |
[5] |
Miller J.C. and Miller J.N. Statistics for analytical chemistry, 2nd edition, 1992, pp.112-115, Ellis Horwood, New York, London, Toronto, Sydney, Tokyo, Singapore | |
[6] |
Brunt K., Sanders P. and Rozema T. The enzymatic determination of starch in food, feed and raw materials of the starch industry. Starch/ |
УДК 633.1001.4:006.354 |
|
МКС 65.120 |
Ключевые слова: корма, крахмал, ферментативный метод, фотометрия, амилоглюкозидаза, гексокиназа |