4.1. Методы контроля

Методические указания МУК 4.1.033-95

"Химические факторы. Определение селена в продуктах питания"

(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июля 1995 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Введены впервые

1. Область применения

Необходимость контроля за содержанием селена в продуктах питания обусловлена узким интервалом допустимого и достаточного уровня потребления этого микроэлемента человеком, составляющим 50 - 200 мкг/день.

При длительном поступлении высоких доз селена могут наблюдаться токсикозы, при уровне ниже минимального предела отмечается увеличение риска возникновения и развития кардиологических и ряда онкологических заболеваний, ослабление антиоксидантной защиты организма.

Ранее в России не проводился контроль за содержанием селена в пищевых продуктах в связи с отсутствием утвержденных методов анализа.

С введением методических указаний появляется возможность получения данных о содержании селена в различных продуктах питания как местного производства, так и импортируемых из-за рубежа.

Методические указания предназначены для учреждений Госсанэпиднадзора и других ведомств, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов.

2. Сущность метода

Сущность метода определения селена заключается в осуществлении мокрого сжигания образца смесью азотной и хлорной кислот, восстановлении шестивалентного селена до Се⁺⁴ действием соляной кислоты и образовании комплекса селенистой кислоты с 2,3-диаминофталином-пиазоселенола, величина флуоресценции которого пропорциональна содержанию селена в пробе.

Нижний предел определения селена - 0,08 мкг/кг (мкг/дм³).

3. Отбор и подготовка проб

Отбор продуктов питания осуществляется в несколько этапов: отбора транспортных упаковок, отбора пробы и навесок для анализа.

Каждая из перечисленных операций должна проводиться в строгом соответствии с требованиями ГОСТов на исследуемые продукты: ГОСТ 5667-65 "Хлеб и хлебобулочные изделия", ГОСТ 27668-88 "Мука и отруби", ГОСТ 26312.1-84 "Крупа", ГОСТ 8756-70 "Продукты пищевые консервированные", ГОСТ 7269-79 "Мясо", ГОСТ 7202.0-74 "Мясо птицы", ГОСТ 9792-73 "Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц", ГОСТ 3622-68 "Молоко и молочные продукты", ГОСТ 7631-2008 "Рыба, морские млекопитающие, морские беспозвоночные и продукты их переработки".

Отобранные образцы продуктов герметично упаковывают в полиэтиленовые мешки или стеклянные банки с притертыми крышками. Образцы доставляют в лабораторию для анализа сразу же после отбора проб или, в случае необходимости, хранят в сухом месте, а для скоропортящихся продуктов осуществляют замораживание - 4 - 10 °С, используя для этой цели холодильники или соответствующие приспособления.

К исследованию скоропортящихся образцов следует приступать в день их доставки в лабораторию. При отсутствии такой возможности образцы должны хранить при указанной выше температуре не более недели со времени отбора среднего образца.

Образцы продуктов (зерновые, мясо, рыба, грибы) перед проведением анализа сушат при температуре не выше 60 °С на воздухе или в эксикаторе над пятиокисью фосфора. Консервы, колбасные изделия и молочные продукты допускается анализировать без предварительного высушивания.

Высушенные образцы растирают в фарфоровой ступке, перемешивают и отбирают пробу на анализ. Консервированные продукты перед проведением анализа гомогенезируют.

4. Аппаратура, материалы, реактивы

Алюминиевый блок сжигания на 40 - 60 проб с глубиной отверстий 6,5 см и диаметром на 0,01 см, превышающим диаметр используемых пробирок для сжигания. Блок сжигания должен быть снабжен устройством регулировки температуры: реле, контактным термометром.

Электроплитка бытового назначения по ГОСТ 14919-83.

Контактный термометр, работающий в диапазоне температур 0 - 200 °С по ГОСТ 9871-75.

Электрореле по ТУ 25111378-77.

Весы аналитические ВЛП-20 или другие лабораторные весы 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 20 г по ГОСТ 19491-74.

Баня водяная с терморегулятором.

Микроизмельчитель ткани РТ-2 по ТУ 64-1-1505-79.

Спектрофлуориметр Hitachi MPF-2A (Япония) или любой другой спектрофлуориметр, работающий в области длин волн: ламбда возбуждения 300 - 500 нм, ламбда эмиссии 300 - 700 нм.

Пробирки с притертыми пробками высотой 12 см.

Колбы конические на шлифах с притертыми пробками вместимостью 50, 100, 200 см³ по ГОСТ 10394-72.

Цилиндры мерные вместимостью 50 и 100 см³ по ГОСТ 1770-74.

Колбы мерные вместимостью 500 и 1000 см³ по ГОСТ 1770-74.

Пипетки (бюретки) вместимостью 0,5; 1,0; 5 и 10 см³ по ГОСТ 20292-72.

Воронки химические по ГОСТ 8613-75.

Воронка делительная вместимостью 100 см³ по ГОСТ 2536-82.

Фильтры обеззоленные по ТУ 6-09-1678-77.

Бумага индикаторная универсальная рН 1 - 12 по ТУ 6-09-1181-76.

Аммиак водный плотностью 0,88 г/см³ по ГОСТ 3760-76.

Вода дистиллированная по ГОСТ 66709-72.

Гексан, C₆H₁₄, по ТУ 6-29-3375-78.

2,3-диаминонафталин, чистота не менее 98 %, C₁₀H₁₀N₂, фирма "Флука".

Кислота азотная, HNO₃, по ГОСТ 4461-67.

Кислота соляная, HCL, плотностью 1,19 г/см³ по ГОСТ 3118-77.

Кислота хлорная, HCLO₄, 42 % или 57 % по ТУ 6-09-2878-73.

Натрий селенистокислый, Na₂SeO₃, ч. по ТУ 6-09-1316-76.

Образцы сравнения* с известным содержанием селена: пшеничная мука, молоко сухое, ржаная мука, яичный порошок.

Перекись водорода, Н₂О₂, 30 % по ГОСТ 10929-64.

Тетранатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, C₁₀H₁₂N₂Na₄О₈, по ТУ 6-09-11-1298-79.

Все используемые реактивы должны быть квалификации "чда" или "хч".

_____________

* Образцы могут быть предоставлены по требованию заказчика лабораторией пищевой токсикологии Института питания РАМН, контактный телефон: 971-12-29, Голубкина Надежда Александровна.

5. Требования техники безопасности при проведении испытаний

Помещение, в котором проводится определение селена, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции анализа необходимо проводить в вытяжном шкафу с использованием индивидуальных средств защиты.

Работу с 2,3-диаминонафталином следует осуществлять только в резиновых перчатках.

6. Подготовка к испытанию

6.1. Приготовление растворов

6.1.1. Растворы соляной кислоты.

6.1.1.1. 0,1 М раствор: 1 см³ 36 %-ной соляной кислоты разбавляют в мерной колбе до 100 см³ дистиллированной водой.

6.1.1.2. 6 М раствор: 51 см³ 36 %-ной соляной кислоты разбавляют в мерной колбе до 100 см³ дистиллированной водой.

6.1.2. Раствор аммиака: 25 %-ный раствор аммиака разбавляют дистиллированной водой 1:1.

6.1.3. Раствор тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты: 1,25 г тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты растворяют в 100 см³ дистиллированной воды.

6.1.4. Раствор 2,3-диаминонафталина растворяют в 100 см³ 0,1 М соляной кислоты при слабом нагревании (10 - 15 минут при температуре не выше 50 °С). Полученный раствор переносят в делительную воронку, трижды экстрагируют гексаном (3×15 см³), водный слой отделяют, фильтруют через фильтровальную бумагу, хранят под слоем гексана при 0 + 4 °С в темноте до момента флуориметрического определения. Раствор готовят в день проведения анализа.

Все операции проводятся в рассеянном свете! Не допускается использовать смазку шлифов колб и делительной воронки!

6.1.5. Стандартные растворы селенистокислого натрия.

6.1.5.1. Основной стандартный раствор, содержащий 1 мкмоль селена в 1 см³: растворяют 0,01729 г селенистокислого натрия в небольшом количестве 0,1 М соляной кислоты в мерной колбе на 100 см³ и доводят до метки соляной кислотой указанной концентрации. Раствор хранят в темноте не более 1 месяца.

6.1.5.2. Рабочий стандартный раствор, содержащий 1 нмоль селена в 1 см³: пипеткой вносят 5 см³ основного стандартного раствора (п. 6.1.5.1.) в мерную колбу вместимостью 500 см³ и доводят объем до метки 0,1 М соляной кислотой. Раствор хранят в темноте не более месяца.

7. Проведение испытания

7.1. Мокрое сжигание

Взвешивают и переносят в пробирки для сжигания от 50 до 100 мг (в зависимости от содержания селена), но не более 100 мг, исследуемых продуктов и соответствующий образец сравнения. Для построения калибровочной кривой в 6 пробирок вносят: 0 (контрольный раствор); 0,1; 0,2; 0,4; 0,5 и 0,6 см³ стандартного рабочего раствора селенистокислого натрия (п. 6.1.5.2), что соответствует 0; 0,1; 0,2; 0,4; 0,5 и 0,6 нмоль селена в пробе. Во все пробирки добавляют по 1 см³ азотной кислоты и 0,7 см³ 52 %-ной хлорной кислоты (1 см³ 42 %-ной кислоты) и оставляют при комнатной температуре на 12 - 18 часов. Затем пробирки помещают в блок сжигания и осуществляют минерализацию в температурном режиме: 120 °С - 1 час, 150 °С - 1 час, 180 - 185 °С - 1,5 часа. По окончании процесса растворы образцов должны быть бесцветными. При наличии обугливания сжигание следует повторить на новой навеске, увеличив количество хлорной кислоты до 1,0 см³ 52 % (1,4 см³ 42 %).

7.2. Удаление следов азотной кислоты

Для удаления следов азотной кислоты блок сжигания охлаждают до 150 °С, добавляют к пробам 1 - 2 капли перекиси водорода и выдерживают при указанной температуре в течение 10 минут. По окончании процесса пробы сразу же вынимают из блока сжигания.

7.3. Восстановление шестивалентного селена до Se⁺⁴

К пробам добавляют по 1 см³ 6 М соляной кислоты и выдерживают при 110 °С в течение 10 минут. По окончании процесса пробы сразу же вынимают из блока сжигания и добавляют по 1 см³ дистиллированной воды.

7.4. Конденсация селенистой кислоты с 2,3-диаминонафталином

В каждую пробирку добавляют по 0,5 см³ раствора тетранатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и по 1 см³ разбавленного аммиака (по п. 6.1.2). Быстро доводят рН проб до 1 - 1,5 по универсальному индикатору, добавляя в случае необходимости по каплям разбавленный аммиак или 0,1 М соляной кислоты. К полученным растворам приливают по 1,0 см³ заранее приготовленного раствора 2,3-диаминонафталина (по п. 6.1.4) и выдерживают 30 минут при 50 °С, закрыв предварительно пробку от попадания прямого света.

По окончании процесса пробы вынимают, охлаждают до комнатной температуры и каждую интенсивно экстрагируют 2,5 см³ гексана в течение 50 - 60 секунд.

Определяют величину флуоресценции органического экстракта при ламбда возб. 376 нм и ламбда эмиссии 51 нм.

Дополнительный контроль за точностью анализа осуществляют, снимая спектры флуоресценции при указанной длине волны возбуждающего света в интервале длин волн 450 - 600 нм. Получаемые спектры должны иметь один максимум флуоресценции при 519 нм. Точность анализа определяют также сравнением результата определения селена в образце сравнения с регламентируемым значением.