4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1678-03
«Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций
3'-азидо-3'-дезокситимидина (азидотимидин) в воздухе рабочей зоны»

(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

СОДЕРЖАНИЕ

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание азидотимидина в диапазоне массовых концентраций 0,005 - 0,08 мг/м³.

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула C₁₀H₁₃N₅O₅.

2.3. Молекулярная масса 267,25.

2.4. Регистрационный номер CAS 30516-87-1.

2.5. Физико-химические свойства.

Азидотимидин - белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок, без запаха с температурой плавления 120 - 123 °С, растворим в воде, 0,01 н водном растворе соляной кислоты, этиловом и метиловом спиртах, мало растворим в хлороформе, очень мало растворим в эфире.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Азидотимидин - структурный аналог тимидина, противовирусный препарат, ингибирующий репликацию ретровирусов, включая вирус иммунодефицита человека (ВИЧ). Азидотимидин умеренно опасен при попадании в желудок, обладает слабым местно-раздражающим действием, способен к кожной резорбции, вызывая при этом системные токсические эффекты, оказывает выраженное влияние на иммунную систему, гемопоэз и костный мозг, способен вызывать отдаленные эффекты: мутагенный, канцерогенный (включая трансплацентарный бластомогенез), эмбриотоксический, тератогенный, обладает общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) азидотимидина в воздухе рабочей зоны 0,01 мг/м³.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций азидотимидина с погрешностью, не превышающей ±20,0 %, при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовых концентраций азидотимидина выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на способности растворов азидотимидина в 0,01 н водном растворе соляной кислоты поглощать УФ-излучение.

Измерение производят при длине волны 267 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания азидотимидина в анализируемом объеме пробы - 10 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации азидотимидина в воздухе - 0,005 мг/м³ (при отборе 2000 дм³ воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток азидотимидина.

Определению не мешают целлюлоза микрокристаллическая, крахмал, лактоза моногидрат, магний стеариново-кислый.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы, реактивы, растворы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

5.2. Реактивы, растворы

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже приведенных в данном разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших обучение и имеющих навыки работы на спектрофотометре.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 84106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80 %.

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор азидотимидина с концентрацией 500 мкг/см³ готовят растворением 0,0500 г вещества в 0,01 н водном растворе соляной кислоты в мерной колбе, вместимостью 100 см³. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор азидотимидина № 1 с концентрацией 100 мкг/см³ готовят разбавлением 5 см³ основного стандартного раствора 0,01 н водным раствором соляной кислоты в мерной колбе, вместимостью 25 см³. Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.3. Стандартный раствор азидотимидина № 2 с концентрацией 20 мкг/см³ готовят разбавлением 5 см³ стандартного раствора № 1 0,01 н водным раствором соляной кислоты в мерной колбе, вместимостью 25 см³. Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.4. Приготовление 0,1 н водного раствора соляной кислоты. 8,22 см³ концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19 г/см³) помещают в мерную колбу, вместимостью 1000 см³, и разбавляют дистиллированной водой до 1000 см³. Раствор устойчив в течение 30 дней.

9.1.5. Приготовление 0,01 н водного раствора соляной кислоты. 100 см³ 0,1 н соляной кислоты помещают в мерную колбу, вместимостью 1000 см³, и разбавляют дистиллированной водой до 1000 см³. Раствор устойчив в течение 30 дней.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы азидотимидина, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии согласно, табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении азидотимидина

Градуировочные растворы используют свежеприготовленными.

Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 10 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 20 мм при длине волны 267 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества.

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания азидотимидина в мкг.

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта прибора.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 200 дм³/мин аспирируют через фильтр АФА-ХП-20, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ следует отобрать 2000 дм³ воздуха. Пробы хранят в химических бюксах с пришлифованными крышками не более трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой, вместимостью 25 см³, приливают 5 см³ 0,01 н водного раствора соляной кислоты и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения азидотимидина. Затем фильтр отжимают и повторно обрабатывают 5 см³ того же раствора. Фильтр снова тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр «белая лента» в мерную пробирку, вместимостью 10 см³ и доводят 0,01 н водным раствором соляной кислоты до 10 см³. Степень десорбции азидотимидина с фильтра 98 %.

Оптическую плотность получаемых анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 20 мм при длине волны 267 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания азидотимидина проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание: фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в 0,01 н водном растворе соляной кислоты вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток азидотимидина.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию азидотимидина (С, мг/м³) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:

а - количество азидотимидина, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;

V - объем воздуха, отобранного для анализа (дм³) и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде:

Значение Δ = 0,00036 + 0,20С, мг/м³, где Δ - характеристика погрешности.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - C₁. Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза - C₂. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы (C₁) (общая концентрация не должна превышать верхней границы диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - C₃. Результаты анализа исходной рабочей пробы - C₁, рабочей пробы, разбавленной в два раза - C₂, и рабочей пробы, разбавленной в два раза с добавкой - С₃, получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

где:

C₁ - результат анализа рабочей пробы;

С₂ - результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

C₃ - результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

X - величина добавки анализируемого компонента;

K - норматив оперативного контроля погрешности.

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

где:

C₁ - результат анализа рабочей пробы;

C₂ - результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы.

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 1 ч 40 мин.

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °C и давление 101,33 кПа) проводят по формуле:

где:

t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (Прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент.

Приложение 2

Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям