Хроматографические методы определения остаточных
количеств 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты (2,4-Д) в воде,
почве, фураже, продуктах питания растительного и
животного происхождения*

_____________

Разработан В.Д. Чмиль, Д.И. Чканиковым, Н.Н. Павловым, А.М. Макеевым, ВНИИГИНТОКС и ВНИИ фитопатологии, утвержден 20 декабря, № 1541-76.

Краткая характеристика препарата

2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д) белое кристаллическое вещество, стабильное при хранении. Т. пл. 141 °С, т. кип. 160 °С/0,4 мм рт. ст. Константа диссоциации 2,3·10^-3. Стабильна при хранении в растворах различных органических растворителей и в кристаллическом состоянии. При 20 °С 540 мг кислоты растворяется в 1 л воды, 243 г кислоты в 100 мл эфира, 130 г кислоты в 100 мл этилового спирта, хорошо растворяется в ацетоне, четыреххлористом углероде и бензоле.

Применяется для борьбы с двудольными сорняками в посевах зерновых культур.

Препарат среднетоксичен для крыс и мышей ЛД₅₀ 350 - 560 мг/кг.

Принцип метода

Метод основан на экстракции 2,4-Д из гидролизованной пробы органическим растворителем с последующим определением в виде метилового эфира 2,4-Д с помощью газожидкостной хроматографии или в виде кислоты методом тонкослойной хроматографии. С помощью предлагаемого метода можно определить 2,4-Д, находящуюся в анализируемой пробе как в свободном, так и в связанном состоянии в виде конъюгатов с эндогенными веществами растений. Количественное определение 2,4-Д проводится методом внутреннего стандарта, который добавляется к пробе перед проведением гидролиза. В качестве внутреннего стандарта используется 2,4,5-трихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-5-Т). Чувствительность метода газожидкостной хроматографии составляет: в воде - 0,002 мг/л, в почве - 0,01 мг/кг, в траве - 0,02 мг/кг, в сене - 0,1 мг/кг, в зерне - 0,02 мг/кг, в молоке 0,04 мг/кг, в сливочном масле - 0,1 мг/кг, - в мясе (говядина) - 0,08 мг/кг. Чувствительность определения методом тонкослойной хроматографии составляет: (в виде 2,4-Д) - в воде - 0,04 мг/л, в почве - 0,2 мг/кг, в траве - 0,06 мг/кг, в сене - 0,4 мг/кг, в зерне - 0,3 мг/кг, в молоке - 0,4 мг/л, в сливочном масле - 0,8 мг/кг, в мясе (говядина) - 0,6 мг/кг; в виде метилового эфира 2,4-Д - в виде - 0,01 мг/л, в почве - 0,05 мг/кг, в траве - 0,08 мг/кг, в сене - 0,1 мг/кг, в зерне - 0,08 мг/кг, в молоке - 0,1 мг/л, в сливочном масле - 0,2 мг/кг, в мясе (говядина) - 0,15 мг/кг. Процент определения методом тонкослойной хроматографии составляет: в воде +90 - 95 %, в почве - 70 - 80 %, в траве - 60 %, в сене - 60 %, в молоке - 80 %, в сливочном масле - 70 %, в мясе - 75 %, в зерне - 60 %.

Минимально детектируемое количество метилового эфира 2,4-Д с помощью детектора постоянной скорости рекомбинации 2 нг, линейный динамический диапазон детектирования не менее 70 мг. Минимально открываемое количество 2,4-Д на тонкослойных хроматограммах 1 мкг.

Реактивы и растворы

Азот особой чистоты, МРТ7 6-02-375-66

Азотно-кислое серебро, хч

Аммиак, 25-ный водный раствор

Ацетон, хч

Бикарбонат натрия, 3 %-ный водный раствор

Н-гексан, хч, (перегнанный)

Н-гептан, хч

Гидроортофосфат натрия, хч, 5 %-ный водный раствор

Диметилсульфат, 5 %-ный (%%-объемные) раствор в абсолютном метиловом спирте

Диэтиловый эфир (перегнанный)

Кальций серно-кислый, хч, прокаленный при 160 °С в течение 6 часов

Метиловый спирт, абсолютный

Муравьиная кислота, хч

Насыщенный водный раствор хлористого натрия

Петролейный эфир (Т. кип. 40 - 60 °С)

Проявляющий реактив: в мерную колбу на 100 мл помещают 0,5 г азотно-кислого серебра, 5 мл дистиллированной воды, 7 мл аммиака (25 %-ный водный раствор) и доводят до метки ацетоном

Силикагель КСК

Соляная кислота, хч, концентрированная

Соляная кислота, 6н водный раствор

Соляная кислота, 2н водный раствор

Соляная кислота (1:1), водный раствор

Стандартный раствор 2,4-Д в метаноле с содержанием 100 мкг/мл

Стандартный раствор 2,4,5-Т в метаноле с содержанием 2,5 мкг/мл

Стандартный раствор метиловых эфиров 2,4-Д (10 мкг/мл) и 2,4,5-Т (2,5 мкг/мл) в метаноле

Стандартный раствор метилового эфира 2,4-Д в н-гексане с концентрацией 100 мкг/мл

Сульфат натрия безводный, хч

Фосфорно-вольфрамовая кислота, хч, 40 %-ный водный раствор

Хлористый натрий, хч

Эфирный раствор диазометана

Получение диазометана

Получение диазометана осуществляют из нитрозометилмочевины. Для получения нитрозометилмочевины во взвешенную литровую круглодонную колбу помещают 200 г 24 %-ного водного раствора метиламина (метиламин используется либо в виде водного раствора, либо в виде хлоргидрата) и добавляют при охлаждении 155 мл концентрированной соляной кислоты до кислой реакции (индикатор метилрот). Затем приливают такое количество воды, чтобы вес содержимого колбы достиг 500 г и прибавляют 300 г мочевины. Затем содержимое колбы осторожно кипятят с обратным холодильником 2 часа 45 минут и энергично 15 минут. Раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры, растворяют в нем 110 г 95 %-ного азотисто-кислого натрия и охлаждают до 0 °С. В 3-литровом стакане готовят смесь 600 г льда и 100 г концентрированной серной кислоты, охлаждают содержимое стакана смесью льда и соли. В этот стакан при перемешивании приливают содержимое колбы (холодный раствор метилмочевины и нитрита натрия) с такой скоростью, чтобы температура не поднималась выше 0 °С. Получение нитрозометилмочевины проходит по следующим реакциям:

CH₂NH₂·НСl + H₂N-CO-NH₂ → CH₃-NH-CO-NH₂ + NH₄Cl

СН₃-NH-CO-NH₂ + HNO₂ → CH₃-N(NO)-CO-NH₂ + Н₂O

Нитрозометилмочевина всплывает на поверхность в виде мелких кристаллов, которые немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера и хорошо отсасывают под вакуумом. Затем кристаллы на фильтре размешивают до образования пасты с 50 мл холодной дистиллированной воды, отсасывают и сушат в вакуум-эксикаторе. Выход нитрозометилмочевины 66 - 72 % (105 - 115 г) от теоретического.

Полученную таким образом нитрозометилмочевину можно хранить в холодильнике длительное время. При температуре выше 20 °С ее не следует хранить более 1 часа. При температуре 30 °С нитрозометилмочевина может разложиться без взрыва, но с выделением газообразных продуктов.

Получение диазометана из нитрозометилмочевины проходит по следующей реакции:

CH₃-N(NO)-CO-NH₂ + KOH → CH₂N₂ + KCNO + 2Н₂O

В круглодонную колбу на 100 мл помещают 3 мл 50 %-ного водного раствора едкого калия и 10 мл диэтилового эфира. Смесь охлаждают до 5 °С, после чего при взбалтывании прибавляют 1 г нитрозометилмочевины, колбу присоединяют к холодильнику, нижний конец которого снабжен аллонжем с отводом, проходящим через резиновую пробку и погруженным в слой эфира на дне приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.

Реакционную колбу помещают на водяную баню, нагретую до 50 °С. Эфирный раствор в колбе доводят до кипения. Время от времени содержимое колбы перемешивают. Отгонку прекращают после получения первых капель бесцветного дистиллята.

Ни в коем случае не следует отгонять весь эфир!

Приборы и посуда

Газовый хроматограф с детектором по захвату электронов

(Цвет-5, Цвет-106 и т.п.)

Гомогенизатор (измельчитель тканей)

Колбы двухгорлые, круглодонные на 500 и 250 мл

Делительная воронка на 500 мл

Колба Бунзена на 500 мл

Воронка Бюхнера, диаметр 15 см

Грушевидные колбы на 100 мл

Ротационный испаритель ИР-1

Источник УФ-света

Водяная баня

Центрифужные пробирки

Контактный термометр на 100 °С

Мерные колбы на 5, 10 и 100 мл

Вакуумный водоструйный насос

Холодильник Либиха

Камера хроматографическая

Микропипетки

Медицинский шприц на 1 мл

Стеклянные пластинки 9×12

Сито капроновое 100 меш

Пульверизатор стеклянный

Электромешалка

Ход анализа

Газожидкостная хроматография

Вода. Пробу воды (250 - 1000 мл) помещают в делительную воронку, подкисляют соляной кислотой до рН ~ 3, прибавляют 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (100, 50 и 50 мл). Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку и экстрагируют 3 %-ным водным раствором бикарбоната натрия (или 5 %-ным водным раствором гидроортофосфата натрия) (3×50 мл). Объединенный водный раствор промывают двумя порциями петролейного эфира (или гексана) (по 50 мл), отбрасывают этот эфир (гексан), а водный раствор подкисляют соляной кислотой до рН ~ 3 и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром (3×50 мл). Объединенный эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 15 - 30 минут при периодическом встряхивании и удаляют растворитель на ротационном испарителе в грушевидной колбе на 100 мл, причем последние порции растворителя удаляют током сухого воздуха. Сухой остаток в колбе метилируют, используя диметилсульфат или диазометан.

Метилирование диметилсульфатом. К сухому остатку в колбе приливают 3 мл %-ного раствора диметилсульфата в абсолютном метиловом спирте, тщательно ополаскивают стенки колбы, прибавляют 1 г безводного сульфата натрия, присоединяют обратный холодильник и помещают на водяную баню (Т - 55 °С) на 10 минут. После окончания реакции метилирования содержимое колбы охлаждают под водопроводной водой, приливают 3 мл насыщенного раствора хлористого натрия, 1 мл н-гексана, энергично встряхивают в течение 2-х минут и после расслоения фаз вводят в хроматограф 3 мкл гексанового слоя.

Метилирование диазометаном. К сухому остатку в колбе приливают эфирный раствор диазометана до появления желтоватой окраски (при этом встряхивая содержимое колбы) и оставляют на 10 минут. Затем диэтиловый эфир удаляют током сухого воздуха, а остаток растворяют в 0,5 - 1,0 мл н-гексана и вводят в хроматограф 1 - 5 мкл раствора.

Условия хроматографирования (хроматограф Цвет-106): стеклянная спиральная колонка (длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненная хроматоном N, 0,16 - 0,20, силанизированным ДМХС, с 5 % SE-30; скорость газа-носителя (азот особой чистоты) через колонку - 50 мл/мин, скорость продувочного газа (азот особой чистоты) через детектор -150 мл/мин; температура термостата колонок - 170 °С, температура испарителя - 220 °С, температура термостата детектора 220 °С; шкала электрометра 20·10^-12, а скорость диаграммной ленты потенциометра 240 мм/час. Относительное время удерживания метилового эфира 2,4-Д в этих условиях: - 0,57. Абсолютное время удерживания - 4 м. 10 сек, Хроматографирование одной пробы проводят дважды. Измеряют на хроматограммах высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т, вычисляют среднее значение отношений этих высот из параллельных определений и по уравнению калибровочного графика находят содержание 2,4-Д в воде. Для построения калибровочного графика к пробам воды прибавляют 5, 10, 15, 20 мкг 2,4-Д (в виде раствора в метиловом спирте), 1 мл стандартного раствора 2,4-5Т с содержанием 2,5 мкг/мл и далее поступают так, как это описано выше. Измеряют на хроматограммах высоты пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т, вычисляют среднее значение отношения этих высот из параллельных определений, строят график зависимости отношения высот хроматографических пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т от содержания 2,4-Д в воде (мг/л). Полученный калибровочный график обрабатывают по методу наименьших квадратов и получают уравнение калибровочной прямой в виде

у = А + Вх, где

у - соотношение высот хроматографических пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т

X - содержание 2,4-Д в воде, мг/л

А и В - коэффициенты, которые получают при обработке калибровочного графика по методу наименьших квадратов.

С целью повышения надежности идентификации 2,4-Д для анализа проб целесообразно использовать колонки с неподвижными фазами различной полярности (например, SE-30 и ХЕ-60, SE-30 и OV-17). Условия хроматографирования при использовании фенилметилсиликона 0 - 17 следующее: стеклянная спиральная колонка (длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм), заполненная хроматоном N 0,16 - 0,20 мм, силанизированным ДМСХ, с 5 % OV-17; скорость тока газа-носителя (азот особой чистоты) через колонку 50 мл/мин, скорость тока продувочного газа (азот особой чистоты) через детектор - 150 мл/мин; температура испарителя - 220 °С, температура термостата колонок - 200 °С, температура термостата детектора 220 °С, шкала электрометра 20·10^-12, а скорость движения диаграммной ленты, потенциометра 240 мм/час. Относительное время удерживания метилового эфира 2,4-Д в этих условиях - 0,63. Абсолютное время удерживания - 6 мин. 48 сек.

Трава, сено, солома, зерно. Навеску травы (50 г) гомогенизируют в 150 мл дистиллированной воды, гомогенат количественно переносят в круглодонную колбу на 1 мл и приливают 38 мл концентрированной соляной кислоты. Навеску измельченного зерна (50 г), соломы или сена (по 10 г) помещают в круглодонную колбу на 1 л и приливают 150 мл 2н водного раствора соляной кислоты. К подготовленным образцам добавляют по 1 мл стандартного раствора 2,4-5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл, перемешивают, к колбе присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 час. После охлаждения гидролизат фильтруют через бумажный фильтр на воронке Бюхнера, промывают осадок на фильтре без перемешивания тремя порциями (по 30 мл) 2н водного раствора соляной кислоты. К фильтрату добавляют 40 %-ный водный раствор фосфорно-вольфрамовой кислоты до 2 %-ной концентрации и фильтруют через бумажный фильтр на воронке Бюхнера. Осадок на фильтре трижды промывают 2н водным раствором соляной кислоты порциями по 30 мл. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (общий объем эфира равен объему фильтрата). Эфирный экстракт промывают небольшими количествами (15 - 20 мл) дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод и затем экстрагируют тремя порциями (по 50 мл) 5 %-ного водного раствора гидроортофосфата натрия (или раствора бикарбоната натрия). Водные экстракты объединяют, подкисляют концентрированной соляной кислотой до рН-I и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (75 + 50 + 50 мл). Объединенный эфирный экстракт после промывания небольшими (15 - 20 мл) порциями дистиллированной воды до нейтральной реакции промывных вод сушат над безводным сульфатом натрия (5 - 10 г) в течение 15 - 30 минут при периодическом встряхивании и растворитель удаляют на роторном испарителе в грушевидной колбе на 100 мл; последние порции растворителя удаляют током сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл ацетона и раствор наносят в виде полосы на стеклянную пластинку (5×20 см) с тонким слоем (0,4 мм) силикагеля КСК и дважды хроматографируют в системе растворителей - петролейный эфир (или гексан) - диэтиловый эфир - муравьиная кислота (50:50:2). Затем снимают силикагель с пластинки в виде 1 см зоны Rf 2,4-Д (0,5 - 0,6*) и количественно переносят в коническую колбу с притертой пробкой на 50 мл. Смачивают силикагель в колбе 1 мл дистиллированной воды, приливают 4 - 5 мм ацетона, встряхивают 1 - 2 мин и фильтруют через бумажный фильтр. Обработку силикагеля ацетоном проводят еще трижды. Объединенный ацетоновый экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, удаляют растворитель на роторном испарителе, затем проводят метилирование образца и газохроматографическое определение 2,4-Д так, как это описано выше.

Для построения калибровочного графика в пробы травы, зерна, сена или соломы вносят 10, 15, 20 и 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в метиловом спирте, 1 мл стандартного раствор 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и далее поступают так, как это описано выше.

_____________

* Подвижность (Rf) стандарта - хч 2,4-Д в указанной системе растворитель определяют после обработки хроматограммы проявляющим реактивом.

Почва. Сухая почва: 100 г почвы, растертой и просеянной через сито с размером отверстий 1 мм, помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой на 500 мл, приливают 25 - 35 мл дистиллированной воды, 5 мл концентрированной соляной кислоты, 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл, тщательно перемешивают, прибавляют 150 мл ацетона и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час. Затем растворитель отфильтровывают под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр и почву на фильтре трижды промывают ацетоном (3×2,0 мл). Затем ацетон удаляют на роторном испарителе, остаток из колбы переносят 100 мл дистиллированной воды в делительную воронку, экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (75, 50 и 50 мл) и далее поступают так, как это описано при определении 2,4-Д в воде. Для построения калибровочного графика в пробы почвы вносят 10, 15, 20 и 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в метиловом, спирте, 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл и далее поступают так, как это описано выше.

Влажная почва. 100 - 200 г влажной почвы помещают в коническую колбу с притертой пробкой на 500 мл, приливают 5 - 10 мл концентрированной соляной кислотой, 150 - 300 мл ацетона, тщательно перемешивают, помещают на аппарат для встряхивания на 1 час и далее поступают так, как описано выше.

Молоко. В пробу молока (25 - 50 мл) вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл, прибавляют концентрированную соляную кислоту (44 - 88 мл), помещают в круглодонную колбу на 250 мл, присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 час для гидролиза. После охлаждения в колбу приливают 15 мл 40 %-ного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, тщательно встряхивают, 100 мл дистиллированной воды и содержимое фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 2н водным раствором соляной кислоты, фильтрат экстрагируют диэтиловым эфиром (3×50 мм) и далее поступают так, как это описано, выше.

Для построения калибровочного графика в пробы молока (25 - 50 мл) вносят 2, 5, 10, 20 мкг 2,4-Д (в виде раствора в метиловом спирте), 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т содержанием 2,5 мкг/мл, концентрированную соляную кислоту (44 - 88 мл) и далее поступают так, как описано выше.

Сливочное масло. 25 г масла растворяют в 100 н-гексана, вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл, помещают в двухгорную кругло донную колбу на 500 мл, приливают 100 мл 6н соляной кислоты, присоединяют обратный холодильник и помещают на кипящую водяную баню на 1 час, перемешивая содержимое колбы с помощью электромешалки. После охлаждения содержимого колбы слои разделяют в делительной воронке и водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (2×50 мл). Гексановый слой экстрагируют 100 мл 6н соляной кислоты; затем водный слой экстрагируют диэтиловым эфиром (2×50 мл) и этот экстракт объединяют с первоначальным эфирным экстрактом. Затем из объединенного эфирного экстракта 2,4-Д извлекают 0,4н водным раствором бикарбоната натрия и далее поступают так, как описано при определении в молоке.

Для построения калибровочного графика в пробы масла (25 г), растворенные в 100 мл н-гексана, вносят 1 мл стандартного раствора 2,5,5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл, 10, 15, 20, 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в метиловом спирте и далее поступают так, как это описано выше.

Мясо. 25 - 50 г мяса измельчают с помощью мясорубки, помещают в двухгорлую круглодонную колбу на 500 мл, вносят 1 мл стандартного раствора 2,4-5-Т с концентрацией 2,5 мкг/мл, приливают 6н соляную кислоту (100 - 200 мл), присоединяют обратный холодильник и помещают на водяную баню (Т = 100 °С) на 1 час, перемешивая содержимое колбы с помощью электромешалки. После охлаждения в колбу приливают 15 мл 40 %-ного водного раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, 100 мл дистиллированной воды и содержимое колбы фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера. Остаток на фильтре промывают 2н водным раствором соляной кислоты, фильтрат экстрагируют диэтиловым эфиром (3×50 мл) и далее поступают так, как это описано выше.

Для построения калибровочного графика в пробы мяса вносят 1 мл стандартного раствора 2,4,5-Т с содержанием 2,5 мкг/мл, 10, 15, 20; 25 мкг 2,4-Д в виде раствора в метиловом спирте и далее поступают так, как это описано выше.

Тонкослойная хроматография

При количественном определении содержания 2,4-Д методом тонкослойной хроматографии подготовка образца и очистка экстракта проводятся таким же образом, как при анализе гербицида газохроматографическим методом, за исключением того, что 2,4,5-Т в пробы не вносится,

Полученный после очистки объединенный эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают растворитель на ротарционном испарителе в грушевидной колбе на 100 мл до небольшого объема (1 - 2 мл). Упаренный экстракт количественно наносят на хроматографическую пластинку (9×12 см) с тонким слоем силикагеля КСК, закрепленного гипсом, с помощью капилляра или медицинского шприца на 1 мл. Затем на хроматографическую пластинку наносят 2,5 и 10 мкг 2,4-Д в виде раствора в ацетоне и проводят хроматографирование в системе растворителей петролейный эфир (или н-гексан)-диэтиловый эфир-муравьиная кислота (50:50:2). После окончания процесса хроматографирования пластинку извлекают из хроматографической камеры и сушат на воздухе в вытяжном шкафу. Для обнаружения зоны локализации 2,4-Д пластинку обрабатывают раствором азотно-кислого серебра в смеси дистиллированной воды, аммиака и ацетона, сушат и облучают УФ-светом в течение 10 - 15 минут. При наличии в пробе 2,4-Д на пластинке появляется серо-черное пятно на белом фоне с величиной Rf 0,5. Количественное определение 2,4-Д проводят путем визуального сравнения размера и интенсивности окраски пятен стандарта с пятном пробы. Минимально детектируемое количество 2,4-Д на хроматографической пластинке 1 мкг. Перед проведением серийных анализов необходимо определить открываемостъ метода, т.е. процент возврата 2,4-Д из контрольных проб, к которым предварительно были добавлены различные количества гербицида.

Для повышения надежности идентификации 2,4-Д, особенно при анализе проб с неизвестными обстоятельствами загрязнения, целесообразно после проведения газохроматографического определения содержания гербицида оставшуюся часть пробы анализировать с помощью тонкослойной хроматографии. Для этого гексановый экстракт наносят на хроматографическую пластинку (9×12) с тонким слоем силикагеля КСК, рядом наносят 2 - 10 мкг метилового раствора 2,4-Д в виде раствора в н-гексане и хроматографируют в системе растворителей н-гептан-ацетон (9:3). Далее поступают так, как это описано выше. Величина Rf метилового эфира 2,4-Д 0,46 - 0,47.

Сочетание величины времени удерживания и величины Rf метилового эфира 2,4-Д в сравнении с этими же показателями, полученными для стандартного соединения, позволяет более надежно проводить определение остаточных количеств 2,4-Д в анализируемых образцах.

Расчет результатов анализа

Для определения содержания 2,4-Д в пробах методом газожидкостной хроматографии используют следующую формулу

X - содержание 2,4-Д в пробе, мг/л или мг/кг;

y - отношение высот хроматографических пиков метиловых эфиров 2,4-Д и 2,4,5-Т

А и В - коэффициенты, которые получают при обработке калибровочных графиков по методу наименьших квадратов.

Для определения содержания 2,4-Д в пробе методом тонкослойной хроматографии применяют следующую формулу

Д - содержание 2,4-Д в пробе, мг/л или мг/кг;

А - количество 2,4-Д в пробе, найденное визуальным сравнением со стандартом, мг;

а - объем или вес пробы, мл или г;

R - процент определения (открываемость), найденный предварительно, %.

Для определения содержания в пробе натриевой, диметилдиэтил или триэтанол-аминных солей 2,4-Д полученный результат необходимо соответственно умножить на 1,1, 1,46 и 1,67.

СОДЕРЖАНИЕ