Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ
И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторных
исследований на иерсиниозы
на территориальном, региональном и
федеральном уровнях
Методические указания
МУК 4.2.3019-12
Москва 2012
1. Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б. Ежлова, Ю.В. Демина, Н.В. Шеенков); Федеральным бюджетным учреждением науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера» Роспотребнадзора (Г.Я. Ценева, Е.А. Воскресенская, Г.И. Кокорина. Е.А. Богумильчик); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока» Роспотребнадзора (М.В. Чеснокова, С.В. Балахонов, В.Т. Климов, К.А. Тирских, М.Б. Черепанова); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения «Центр гигиены и эпидемиологии в Новосибирской области» (Т.В. Каримова. О.В. Якунина).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 18 июня 2012 г.
3. Введены в действие с момента утверждения.
4. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г. Онищенко 18 июня 2012 г. Дата введения: с момента утверждения |
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторных
исследований
на иерсиниозы на территориальном, региональном и
федеральном уровнях
Методические
указания
МУК 4.2.3019-12
1.1. Настоящие методические указания (далее - МУ) определяют организацию и порядок проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях территориального, регионального и федерального уровней.
1.2. МУ предназначены для специалистов органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы медицинскими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы и формы собственности.
В настоящих методических указаниях использованы ссылки и положения следующих нормативных и методических документов:
2.1. Федеральный закон от 03.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2.2. Постановление Правительства Российской Федерации от 16.04.2012 № 317 «О лицензировании деятельности в области использования возбудителей инфекционных заболеваний человека и животных (за исключением случая, если указанная деятельность осуществляется в медицинских целях) и генно-инженерно-модифицированных организмов III - IV степени потенциальной опасности, осуществляемой в замкнутых системах».
2.3. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 № 11 «О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера».
2.4. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 7.07.2009 № 415н «Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения».
2.5. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.03.2008 № 88 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней».
2.6. СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».
2.7. СП 1.3.1318-03 «Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I - IV групп патогенности (опасности), генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами».
2.8. СП 1.3.2322-08 «Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».
2.9. СП 1.3.2518-09 «Санитарно-эпидемиологические правила «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней. Дополнения и изменения № 1 к СП 1.3.2322-08».
2.10. МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности».
2.11. МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред».
2.12. МУ 3.1.2438-09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза».
2.13. МУК 4.2.2746-10 «Порядок применения молекулярно-генетических методов при обследовании очагов острых инфекций с групповой заболеваемостью».
2.14. СП 3.1.7.2615-10 «Профилактика иерсиниозов».
БХ - бульон Хоттингера
ЗФР - забуференный физиологический раствор
ИФА - иммуноферментный анализ
ЛПО - лечебно-профилактические организации
МО - медицинские организации
ОРА - ориентировочная реакция агглютинации
ПУС - полиуглеводная среда
ПК - пептонно-калиевая среда
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РА - реакция агглютинации
РНГА - реакция непрямой гемагглютинации
СанПиН - санитарные правила и нормы
СБТС - среда с бромтимоловым синим
СП - санитарно-эпидемиологические правила
УСС - универсальный скошенный столбик
Yersinia pseudotuberculosis (возбудитель псевдотуберкулеза) и Yersinia enterocolitica (возбудитель кишечного иерсиниоза) - энтеропатогенные иерсинии, относимые к возбудителям зооантропонозных инфекций. Заражение Y. pseudotuberculosis происходит через инфицированные продукты питания (преимущественно овощи), Y. enterocolitica - чаще при употреблении в пищу молочных и мясных продуктов.
Иерсиниозы широко распространены в мире. В ряде стран Европы кишечный иерсиниоз занимает третье место по заболеваемости среди кишечных инфекций, после кампилобактериоза и сальмонеллеза. Заболеваемость псевдотуберкулезом в Российской Федерации регистрируется практически повсеместно, преимущественно в виде вспышек, кишечным иерсиниозом - в виде спорадических случаев.
Характеристика иерсиний
Род Yersinia включает группу грамотрицательных, не образующих спор, палочковидных (кокки или овоиды) факультативно-анаэробных микроорганизмов, относящихся к семейству Enterobacteriaceae. Среди 17 видов, входящих в род Yersinia, три отнесены к патогенным для человека и животных - возбудитель чумы Y. pestis, возбудитель псевдотуберкулеза Y. pseudotuberculosis и 11 представителей вида Y. enterocolitica патогенных биотипов 1В и 2-5.
Y. enterocolitica биотипа 1А относят к непатогенным, однако они могут быть возбудителями оппортунистических инфекций. Также непатогенными являются 13 видов иерсинии: Y. aldovae, Y. bercovieri, Y. frederiksenii, Y. intermedia, Y. kristensenii, Y. mollaretii, Y. rohdei, Y. ruckeri, Y. aleksiciae, Y. similis, Y. massiliensis, Y. nurmii, Y. pekkanenii, Y. entomophaga.
Основные биохимические свойства Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica и некоторых других представителей Enterobacteriaceae, которые используются в практической работе при первичном изучении выделенных культур, представлены в табл. 1 и 2.
По О-антигену известен 21 серотип Y. pseudotuberculosis. Среди Y. enterocolitica различают 6 биотипов и 30 серотипов, из них 9 наиболее часто ассоциируются с заболеваниями человека: 0:3; 0:4; 0:5,27; 0:9; 0:8; 0:13; 0:18; 0:20; 0:21 (табл. 3).
Антигенное родство (по О-антигену) Y. pseudotuberculosis и большинства серотипов Y. enterocolitica выражено слабо. Значительное сходство по антигенной структуре выявлено у Y. pseudotuberculosis серотипа 0:1 и Y. enterocolitica «американских» серотипов 0:8; 0:18 и 0:21.
Таблица 1
Основные дифференциальные признаки Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica и других представителей семейства Enterobacteriaceae
Y. pseudotuberculosis |
Y. enterocolitica |
Shigella spp. |
Salmonella spp. |
Escherichia spp. |
Proteus spp. |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
|
Рост на универсальном скошенном столбике (УСС) |
Окраска столбика среды |
Малиновый |
Желтый, по уколу черно-бурая полоска |
Желтый |
Желтый или черный + газ |
Желтый + газ |
Малиновый |
Окраска скошенной поверхности среды |
Малиновая |
Желтая |
Красная |
Красная |
Желтая |
Желтая или малиновая, верх черный |
|
Рост на трехсахарном агаре с мочевиной (среде И.С. Олькеницкого) |
Окраска столбика среды |
Малиновый (через 20 ч Желтый) |
Малиновый (через 20 ч Желтый) |
Желтый |
Желтый или черный + газ |
Желтый + газ |
Малиновый или черный |
Окраска скошенной поверхности среды |
Малиновая |
Малиновая |
Красная |
Красная |
Желтая |
Малиновая |
|
Рост на трехсахарном агаре с мочевиной (среде Ресселя I) |
Окраска столбика среды |
Малиновый со дна пробирки |
Малиновый со дна пробирки |
Желтый/зелёный |
Желтый, + газ |
Желтый, + газ |
Малиновый, + газ |
Окраска скошенной поверхности среды |
Сиреневая |
Сиреневая |
Сиреневая |
Сиреневая |
Желтый/ зелёный |
Сиреневая |
|
Рост на трехсахарном агаре с сахарозой и маннитом (среде Ресселя II) |
Окраска столбика среды |
Желтый |
Желтый, газ |
Желтый/Красный |
Желтый, почернение по уколу |
Желтый, +/- газ |
Желтый/Красный, почернение по уколу |
Окраска скошенной поверхности среды |
Малиновая |
Желтая |
Желтая |
Желтая/Красная |
Желтая/Красная |
Желтая/Красная |
|
Ферментация углеводов |
Сахароза |
- |
+ |
- |
- |
x |
x |
Рамноза |
+ |
- |
-/+ |
+ |
+/- |
-/+ |
|
Раффиноза |
-/+ |
- |
-/+ |
- |
x |
-/+ |
|
Маннит |
+ |
+ |
+/- |
+ |
+ |
-/+ |
|
Сорбит |
- |
+ |
-/+ |
+ |
+/- |
- |
|
Наличие орнитиндекарбоксилазы |
- |
+ |
-/+ |
+ |
x |
-/+ |
|
Утилизация цитрата |
- |
- |
- |
+/- |
- |
x |
|
Дезаминирование фенилапанина |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
|
Реакция Фогес- Проскауэра (37 ± 1) °С |
- |
- |
- |
- |
- |
-/+ |
|
Примечание: «+» - положительная реакция; «-» - отрицательная реакция: «+/-» - большинство штаммов позитивно, но некоторые негативно: «-/+» - большинство культур негативно, некоторые штаммы позитивны: «х» - разные реакции |
Таблица 2
Основные биохимические свойства бактерий рода Yersinia (26 ± 2) °С
Y. pestis |
Y. pseudotuberculosis |
Y. enterocolitica |
Y. frederiksenii |
Y. intermedia |
Y. kristensenii |
Y. ruckeri |
Y. aldovae |
Y. rohdei |
Y. mollaretti |
Y. bercovieri |
Y. aleksiciae |
Y. similis |
|||||||
Биотипы |
|||||||||||||||||||
I |
II |
III |
IV |
V |
|||||||||||||||
1А |
1В |
||||||||||||||||||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
13 |
14 |
15 |
16 |
17 |
18 |
19 |
|
Гидролиз мочевины |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
[+] |
[+] |
[+] |
- |
[+] |
B |
[-] |
В |
+ |
+ |
|
Образование индола |
- |
- |
+ |
+ |
В |
- |
- |
- |
+ |
+ |
В |
- |
- |
- |
- |
+ |
- |
||
Подвижность (22 ± 2) °С |
(22 ± 2) °С |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
В |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
(37 ± 1) °С |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
||
Реакция Фогеса-Проскауэра |
(26 ± 2) °С |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
(37 ± 1) °С |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
Фенилаланиндезаминаза |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
Орнитиндекарбоксилаза |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
В |
+ |
+ |
+ |
+ |
В |
[-] |
[+] |
[+] |
+ |
- |
|
Лизиндекарбоксилаза |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
В |
- |
- |
- |
- |
+ |
- |
|
Липаза (Твин-80) |
- |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
В |
В |
В |
В |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
|
Цитрат Симмонса |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
В |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
|
Гидролиз эскулина |
В |
+ |
[+] |
- |
- |
- |
- |
- |
[+] |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
[-] |
- |
+ |
|
Образование кислоты из: |
|||||||||||||||||||
D-ксилозы |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
В |
+ |
+ |
[+] |
- |
В |
В |
В |
+ |
+ |
+ |
|
мальтозы |
[+] |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
В |
+ |
+ |
+ |
|
мелибиозы |
[-] |
В |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
[+] |
- |
- |
- |
В |
- |
- |
- |
- |
|
L-рамнозы |
- |
В |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
|
рафинозы |
- |
[-] |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
В |
В |
- |
- |
- |
В |
- |
- |
- |
- |
|
салицина |
В |
[-] |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
[-] |
- |
- |
- |
[-] |
[-] |
- |
- |
|
сахарозы |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
В |
+ |
+ |
- |
- |
[-] |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
|
D-сорбитола |
В |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
В |
В |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
|
трегалозы |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
[+] |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
«+» - положительная реакция у 90 % и более штаммов; «[+]» - положительная реакция у 76 - 89 % штаммов; «В» - положительная реакция у 26 - 75 % штаммов: «[-]» - положительная реакция у 11 - 25 % штаммов: «-» - отрицательная реакция у 90 % и более штаммов |
Таблица 3
Био- и серотипы Y. enterocolitica и их связь с патогенностью
Биотип |
Серотип |
|
есть |
1В |
О:8; О:4; О:13а; О:18; О:20; О:21; |
2 |
О:9; О:5,27; |
|
3 |
О:1,23; О:5,27; |
|
4 |
О:3; |
|
5 |
О:2,3 |
|
нет |
1А |
О:5; О:6,30; О:6.31; О:7,8; О:10; О:13,7; О:14; О:16; О:19,8; О:22; О:36; О:41,42; О:41,43; О:46; О:63; О:64; О:65; О:66; О:72 |
Температурный фактор является одним из важнейших определяющих изменчивость микробов и устойчивость их во внешней среде. Оптимальная температура для жизнедеятельности иерсиний - 28 - 30 °С, однако они могут, хотя и гораздо медленнее, размножаться при температуре 4 - 1 °С.
Достаточно долго иерсинии выживают на различных продуктах питания и даже могут на них размножаться (например, на овощах, особенно приготовленных в виде салатов). В молоке сохраняются до 18 суток, в сливочном масле - до 145 суток, на хлебе, кондитерских изделиях - от 16 до 24 суток. Иерсинии чувствительны к высокой температуре: при 100 °С погибают в течение нескольких секунд, однако при температуре 50 - 60 °С способны выживать до 20 - 30 мин, переносят большие (до 10 %) концентрации раствора натрия хлорида, особенно при низких температурах. На микробы губительно действует прямая солнечная радиация, чувствительны иерсинии и к высыханию. Во влажной среде и невысокой температуре (14 - 18 °С) выживают длительно. Кислотность среды (при уровнях рН 3,6 - 4,0) также губительна для иерсиний. В дезинфицирующих растворах в стандартных разведениях микробы Yersinia погибают в течение 5 - 10 мин. Раствор перманганата калия в концентрации 0,5 - 0,3 % вызывает гибель бактерий через 3 мин.
Патогенные Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica обладают широким набором факторов патогенности, детерминируемых хромосомными и плазмидными генами.
Способность Y. pseudotuberculosis к адгезии и инвазии в клетки эпителия кишечника зависит от экспрессии хромосомного inv-гена, кодирующего синтез белка наружной мембраны инвазина с молекулярной массой 108 кДа. Диссеминация микроба в организме хозяина связана с функционированием группы хромосомных генов, ответственных за ассимиляцию ионов железа («остров высокой патогенности», HPI). Штаммы Y. pseudotuberculosis, содержащие HPI, редко выделяются в России (3,9 %), в основном они циркулируют в Европе, Австралии, Северной Америке.
Важным фактором патогенности Y. pseudotuberculosis является синтез суперантигена (YPM), ответственного за поликлональную активацию Т-лимфоцитов и гиперпродукцию провоспалительных цитокинов. Клинически это выражается развитием синдрома токсического шока. У 98 % штаммов этого вида, выделенных от больных в России, Японии, Корее, обнаруживается суперантиген, вызывающий системное поражение органов и тканей.
Патогенные Y. enterocolitica также имеют факторы патогенности, обеспечивающие им адгезивные и инвазивные свойства (ген ail).
Гены НРI не выявляются у непатогенных Y. enterocolitica биотипа 1А и у низкопатогенных штаммов биотипов 2-5, но они определяются у всех высокопатогенных штаммов биотипа 1B. Энтеротоксигенность Y. enterocolitica биотипов 1В и 2-5 связана с экспрессией хромосомного гена ystA. У непатогенных представителей биотипа 1А обнаружен ген ystB.
Плазмидой вирулентности иерсиний pYV 42 - 48 MDa обладают все штаммы Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica 1В, 2-5 биотипов. Основная функция плазмиды pYV - нейтрализация факторов иммунитета макроорганизма.
Плазмида с молекулярной массой 82 MDa (pVM) обнаружена только у Y. pseudotuberculosis 1 серотипа. Штаммы, имеющие плазмиду pVM, вызывают более тяжелое течение псевдотуберкулеза.
5.1.1. Требования к лабораториям, осуществляющим исследования на иерсиниозы
Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов
Лаборатории, которые осуществляют исследования на иерсиниозы, должны иметь разрешительные документы на этот вид деятельности согласно действующему законодательству.
Проведение исследований на всех этапах: взятие проб, их хранение, доставка в лабораторию, регистрация, порядок исследования, выдача результатов должны соответствовать требованиям действующих нормативных и методических документов.
Обеззараживание отходов должно осуществляться в соответствии с действующими нормативными и методическими документами по обращению с медицинскими отходами.
Требования к специалистам и вспомогательному персоналу, участвующим в выполнении исследований на иерсиниозы
Исследования на иерсиниозы могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским образованием, имеющие допуск к работе с ПБА III - IV групп патогенности на основании приказа руководителя учреждения, окончившие курсы по специальности «Бактериология», знающие правила работы с ПБА III - IV группы патогенности. Специалисты должны проходить профессиональную переподготовку не реже одного раза в пять лет. Лица, имеющие высшее (среднее) медицинское образование должны иметь сертификат специалиста («Бактериология»/«Лабораторное дело»).
Инженерно-технический персонал, дезинфекторы и санитарки проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями.
Необходимый уровень подготовки специалистов лабораторий представлен в прилож. 1.
Требования к знаниям и умениям специалистов лабораторий приведены в прилож. 2.
Требования к обеспечению безопасности работы персонала
Каждая бактериологическая лаборатория должна иметь пакет нормативно-методической документации и инструкций, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.
Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным возбудителями инфекционных болезней III - IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими нормативными документами.
Порядок организации внутреннего и внешнего контроля качества лабораторных исследований
Контроль качества исследований на иерсиниозы в лабораториях включает:
· контроль качества питательных сред, диагностических препаратов и тест-систем, дезинфицирующих средств и химических реактивов;
· своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования;
· контроль качества стерилизации лабораторной посуды;
· контроль работы паровых и суховоздушных стерилизаторов;
· контроль температурного режима работы холодильников и термостатов;
· контроль работы бактерицидных ламп;
· проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности;
· проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроля смывов с поверхностей и оборудования.
Результаты контроля фиксируют в специальных журналах, формулярах или других учётных документах.
Внешний контроль качества лабораторных исследований включает:
· участие в межлабораторных сличительных испытаниях (МСИ);
· участие в Федеральной системе внешней оценки качества (ФСВОК);
· приобретение шифрованных образцов для идентификации иерсиний.
Правила ведения документации
Ведение лабораторной документации, включая состояние регистрационных и рабочих журналов, осуществляют ежедневно в соответствии с требованиями действующих нормативных и методических документов.
Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения исследований на иерсиниозы
Для проведения исследований на иерсиниозы в лабораториях должны быть в наличии:
· питательные среды, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 3 к МУ);
· диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 4 к МУ);
· химические реактивы (прилож. 5 к МУ);
· приборы и оборудование (прилож. 6 к МУ);
5.1.2. Номенклатура и объем исследований
В лабораториях МО проводят:
· диагностические исследования материала от госпитализированных в стационар и амбулаторных больных с целью дифференциальной диагностики и установления этиологии заболевания при спорадической и вспышечной заболеваемости;
· исследования патолого-анатомического материала.
В лабораториях МО проводят исследования материала в следующем объеме:
1) посев на среды накопления, «холодовое обогащение» с периодическими высевами на дифференциально-диагностические среды, отсев характерных по морфологическим свойствам колоний иерсиний на ПУС;
2) идентификация и дифференциация выделенных культур до вида по морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам, в том числе с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» и др.) при наличии оборудования и тест-систем;
3) выявление антител в парных сыворотках (РА, РНГА, ИФА);
4) экспрессные методы исследования (ПЦР) - при наличии оборудования.
5.1.3. Порядок лабораторных исследований на иерсиниозы
5.1.3.1. Правила отбора и транспортирования проб клинического материала
При проведении бактериологического анализа на иерсиниозы исследуется клинический материал: испражнения, моча, кровь, мазки из зева, операционный или секционный материал: аппендицикулярные отростки, мезентериальные лимфоузлы и патологически измененные органы и ткани, сгустки крови, желчь, содержимое кишечника.
Материал от больного (подозрительного на заболевание) отбирает медицинский персонал МО немедленно при выявлении больного (подозрительного на заболевание) до начала лечения антибиотиками.
При совместном использовании бактериологического и ПЦР методов отбор материала осуществляется в одноразовую посуду.
Правша отбора материала от больных (подозрительных на заболевание):
· испражнения* берут на протяжении всего периода заболевания в количестве 0,5 - 1,0 г стерильной ложечкой из судна и помещают в стерильный широкогорлый флакон с 5,0 - 10,0 мл среды накопления;
______________
* Высеваемость иерсиний наиболее высока в первые 3 - 5 дней болезни и до назначения антибиотиков, результаты бактериологического исследовании улучшаются, если взятие материала производится 3-кратно в течение первой недели болезни (госпитализации).
· мочу исследуют в первые 7 дней болезни, берут 20 - 30 мл средней порции утренней мочи в стерильную посуду. Осадок после центрифугирования помещают в 5,0 мл среды накопления;
· смыв из зева берут в первые 3 дня болезни натощак с задней стенки глотки и корня языка тампоном, смоченном в физиологическом растворе и помещают в 5,0 мл среды накопления;
· кровь исследуют в течение болезни на высоте лихорадки, весь лихорадочный период и в период рецидива болезни. Кровь забирают натощак в количестве 5 - 10 мл из локтевой вены с соблюдением правил асептики, выдерживают при комнатной температуре в наклонном положении (под углом 30 - 45°) до образования сгустка (30 - 40 мин), после чего сгусток отделяют от стенки, сыворотку переносят в пробирку для серологических реакций, а сгусток помещают в 5,0 мл среды накопления.
Правила отбора операционного или секционного материала:
· Аппендикулярный отросток. Стерильно ножницами измельчают 1,0 - 2,0 г пробы и помещают в 5,0 - 10,0 мл среды накопления.
· Мезентериальные лимфоузлы, другие органы и ткани. Стерильно ножницами измельчают 1,0 - 2,0 г пробы и помещают в 5,0 - 10,0 мл среды накопления.
· Желчь. В 5,0 мл среды накопления помещают 0,5 - 1,0 мл.
· Содержимое кишечника. В 5,0 мл среды накопления помещают 0,5 - 1,0 мл.
· Сгусток крови. Стерильно измельчают 0,5 - 1,0 мл пробы и помещают в 5,0 мл среды накопления.
Пробы этикетируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией, заполняют бланк направления и помещают в контейнер для транспортирования биологического материала на исследование.
Транспортирование материала в лабораторию осуществляется при температуре (4 - 12) °С в течение двух часов после взятия.
I этап исследования
(пробоподготовка и посев нативного материала)
Проводят «холодовое обогащение» исследуемого материала: внесенный в среду ПК, в ЗФР или 1 %-ю пептонную воду (среды накопления) материал помещают в холодильник (6 ± 2) °С и выдерживают в нем до первого положительного высева на 2 - 3, 5 - 7 или 10 - 15 сутки.
Постановка ускоренных методов исследования нативного материала: ПЦР или ИФА для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза 1 серотипа*. При получении положительного результата выдают предварительный положительный ответ.
______________
* Производственный выпуск «Тест-системы иммуноферментной для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза 1 серотипа» будет осуществляться в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера с 2012 г.
II этап исследования
(на 2 - 3 сутки
от начала исследования)
Проводят высев со сред накопления (2 - 3 сутки «холодового обогащения») на плотные дифференциально-диагностические среды (СБТС, Эндо) или другие коммерческие дифференциальные среды для диагностики иерсиниозов, разрешенные к применению на территории Российской Федерации (среда Мак-Конки и др.) - петлей из верхней трети слоя среды (но не с поверхности!), не взбалтывая пробирки (!).
Для инактивации посторонней микрофлоры перед каждым высевом на плотную питательную среду проводят щелочную обработку материала 0,72 %-м раствором гидроксида калия в 0,5 %-м растворе хлорида натрия (30 - 60 с) или 5 %-м раствором тринатрий фосфата. Посевы инкубируют при (26 ± 2) °С 48 ч (на среде СБТС) или (на среде Эндо) 24 ч (не более 30 ч!).
Ускоренные методы исследования материала из сред накопления (2 - 3-й сутки «холодового обогащения»): ПЦР или ИФА для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза 1 серотипа. При получении положительного результата выдают подтверждение предварительного положительного ответа и продолжают бактериологическое исследование пробы до выделения культуры. При отрицательных результатах ПЦР на этапах I - II дальнейшее бактериологическое исследование пробы прекращают.
III этап исследования
(4 - 5-е сутки от начала исследования)
Просмотр посевов на дифференциально-диагностических средах, засеянных на этапе II исследования, и учет морфологии колоний.
Проводят отбор характерных для Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica колоний на дифференциальную среду с мочевиной (среду Олькеницкого, УСС или среды Ресселя I и II)* и той же колонии - на скошенные столбики (или сектора) МПА (АХ) для накопления бактериальной массы. Посевы инкубируют на средах Олькеницкого, УСС, Ресселя I при (37 ± 1) °С, на МПА (АХ), среде Ресселя II - при (26 ± 2) °С. При наличии сложности отбора колонии на две среды возможен первичный отбор колоний на среды с мочевиной с последующим пересевом уреазоположительных культур на МПА (АХ), среду Рессель II.
______________
* Прописи сред и способ приготовления представлены в прилож. 8.
IV этап исследования
(5 - 6-е сутки от начала исследования)
Проводят идентификацию и дифференциацию уреазоположительных культур из пробирки (или чашки) с МПА, засеянных на этапе II исследования (2 - 3 сутки «холодового обогащения»):
· микроскопия мазка, окрашенного по Граму;
· тест на цитохромоксидазу;
· ферментативная активность на средах Гисса** (26 ± 2) °С: маннитол, сахароза, рамноза, раффиноза, сорбитол, мелибиоза, салицин, ксилоза;
______________
** При использовании сред Ресселя I и II проводят постановку следующих биохимических тестов - сахароза, рамноза, раффиноза, салицин, ксилоза, сорбит, индол.
· реакция Фогеса-Проскауэра (среда Кларка) при (20 ± 2) °С и (37 ± 1) °С;
· декарбоксилирование орнитина (среда Биргера-Крушинской) при (37 ± 1) °С;
· утилизация цитрата (среда Симмонса) при (37 ± 1) °С;
· дезаминирование фенилаланина (агар с фенилаланином) при (37 ± 1) °С;
· образование индола (0,3 % полужидкий агар) при (20 ± 2) °С и (37 ± 1) °С;
· проба с псевдотуберкулезным фагом (агар Хоттингера, МПА) при (26 ± 2) °С;
· постановка ОРА на стекле с псевдотуберкулезной и иерсиниозной сыворотками - культуры с МПА (АХ), среды Ресселя II;
· идентификация возбудителя с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» или аналоги) - при наличии оборудования и тест-систем.
V этап исследования
(5 - 7-е сутки от начала исследования)
Проводят высев со сред накопления (5 - 7-е сутки «холодового обогащения») на плотные дифференциально-диагностические среды после предварительной щелочной обработки.
Проводят учет результатов биохимической идентификации и дифференциации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, проведенных на IV этапе исследования (2 - 3-й сутки «холодового обогащения»), определяют биотип Y. enterocolitica.
Проводят реакцию агглютинации на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям.
Выдача окончательного положительного ответа.
VI этап исследования
(7 - 8-е сутки от начала исследования)
Просмотр посевов на дифференциально-диагностических средах, засеянных на V этапе исследования (5 - 7-е сутки «холодового обогащения»).
Проводят отбор характерных для Y. pseudotuberculosis и Y. Enterocolitica колоний на дифференциальную среду с мочевиной (среду Олькеницкого, УСС или среды Ресселя I и II) и МПА (АХ).
VII этап исследования
(8 - 10-е сутки от начала исследования)
Проводят идентификацию и дифференциацию уреазоположительных культур, засеянных на VI этапе исследования (5 - 7-е сутки «холодового обогащения») по тестам, предусмотренным на IV этапе исследования.
VIII этап исследования
(9 - 11-е сутки от начала исследования)
Проводят учет результатов биохимической идентификации и дифференциации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, проведенных на VII этапе исследования (5 - 7-е сутки «холодового обогащения»), определяют биотип Y. enterocolitica.
Проводят реакцию агглютинации на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям.
Выдача окончательного положительного ответа.
IX этап исследования
(10-е сутки от начала исследования)
Проводят высев со сред накопления на дифференциально-диагностические среды после предварительной щелочной обработки (10-е сутки «холодового обогащения»).
X этап исследования
(12-е сутки от начала исследования)
Просмотр посевов на дифференциально-диагностических средах, засеянных на IX-м этапе исследования (10-е сутки «холодового обогащения»), отбор характерных для Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica колоний на дифференциальную среду с мочевиной (среду Олькеницкого, УСС или среды Ресселя I и II) и агар МПА (АХ).
XI этап исследования
(13-е сутки от начала исследования)
Проводят идентификацию и дифференциацию уреазоположительного изолята, засеянного на Х-м этапе исследования (10-е сутки «холодового обогащения»), по набору биохимических тестов, предусмотренных на IV-м этапе исследования.
XII этап исследования
(14-е сутки от начала исследования)
Проводят учет результатов биохимической идентификации и дифференциации Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, проведенных на XI-м этапе исследования (10-е сутки «холодового обогащения»);
Выдача окончательного положительного ответа.
Передача выделенной культуры для дальнейшей идентификации в специализированную лабораторию возможна на любом этапе исследования.
5.1.3.2. Полимеразная цепная реакция
Для выявления ДНК иерсиний используют наборы для ПЦР, зарегистрированные в установленном порядке. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению. Материал для исследования отбирается в одноразовую пробирку (или контейнер) в соответствии с п. 5.1.3.1 в среду накопления ЗФР (рН 7,2 - 7,4).
Наиболее информативным для ПЦР являются испражнения и кровь в период лихорадки. Материал забирается немедленно при выявлении больного и до назначения антибиотиков (!).
Исследование проб проводят в первые сутки их получения и на 2 - 3 сутки после «холодового обогащения» в ЗФР. Непосредственно перед исследованием проводят пробоподготовку материала, используя набор для выделения ДНК.
При использовании этих методов при пробоподготовке получают препарат суммарной ДНК всех содержащихся в пробе микроорганизмов, что может вызвать ингибирование ПЦР и снижение ее чувствительности. Разработан способ подготовки проб, основанный на использовании щелочной обработки материала, при котором большая часть индигенной микрофлоры погибает и удаляется как супернатант при центрифугировании, а относительно устойчивые к щелочи иерсинии выживают (патент от 27.07.2000 № 2153671):
1. Исследуемый материал (нативный) центрифугируют при 500 - 1000 об./мин 1,5 - 2,0 мин для осаждения грубых частиц или отстаивают 2 - 3 ч при комнатной температуре.
2. Переносят 0,2 - 0,5 мл верхней фазы (в том числе, после «холодового обогащения» в течение 2 - 3 суток) в лунки полистиролового планшета для серологических реакций и смешивают с 0,72 % КОН в таком же объеме.
3. После 30 - 60 с экспозиции проводят посев материала на дифференциально-диагностические среды и сразу же в лунки планшета добавляют 0,2 - 0,5 мл БХ для прекращения действия щелочи как селективного агента.
4. Материал из лунки переносят в пробирку типа «Эппендорф» и центрифугируют на микроцентрифуге при 10000 - 12000 об./мин 3 - 5 мин.
5. Надосадочную жидкость удаляют, осадок дважды промывают дистиллированной водой путем центрифугирования.
6. К осадку добавляют 20 мкл деионизованной воды, прогревают 10 мин при 100 °С, центрифугируют при 12000 об./мин 2 мин. Для ПЦР используют 1 - 3 мкл надосадочной жидкости.
5.1.3.3. Иммунологические методы выявления специфических антигенов
Для выявления антигенов иерсинии используют тест-систему иммуноферментную для выявления антигенов иерсинии псевдотуберкулеза I серотипа.
Материал для исследования, сроки и правила его взятия аналогичны п. 5.1.3.1.
Исследование проб проводят в первые сутки их получения и затем на 3 - 5-е сутки после «холодового обогащения» в среде ПК. Непосредственно перед исследованием материал инактивируют 30 мин при (56 ± 1) °С, центрифугируют при 3000 об./мин и берут для исследования надосадочную жидкость. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению.
5.1.3.4. Серологическое исследование на иерсиниозы
Для исследования требуется две пробы крови, взятые в разные периоды заболевания (парные сыворотки!): 1-я неделя начала заболевания и конец 2-й, начало 3-й недели болезни.
Серологическая диагностика основывается на появлении или нарастании титра антител в течение болезни. Достоверным считается 2 - 4-кратное и выше нарастание титра антител при исследовании парных сывороток.
Реакция агглютинации (РА). Для постановки РА используют стандартные иерсиниозные антигены распространенных серотипов, представляющие собой 10 млрд. взвесь иерсиний эталонных штаммов в S-форме, убитых формалином и суспендированных в 0,9 %-м растворе хлорида натрия. Перед постановкой микробную взвесь разводят в 10 раз до рабочей концентрации 1 млрд./мл. Реакцию ставят методом равных объемов (0,5 мл сыворотки + 0,5 мл взвеси). Диагностический титр - 1:160.
Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Для постановки РНГА используют коммерческие эритроцитарные диагностикумы к Y. pseudotuberculosis I серотипа и Y. enterocolitica серотипов 0:3 и 0:9, представляющие собой полисахаридные антигены иерсиний, фиксированные на поверхности формалинизированных бараньих эритроцитов. Методика постановки и учета РНГА приведена в инструкции по применению. При постановке РНГА с псевдотуберкулезным диагностикумом диагностический титр равен 1:100, кишечноиерсиниозными - 1:200.
Для повышения диагностической эффективности РНГА и исключения ложноположительных результатов рекомендуется соблюдать следующие правила при постановке:
1. Непосредственно перед постановкой РНГА чистые полистироловые пластины ополаскивают дистиллированной водой, а затем высушивают.
2. Накануне постановки РНГА эритроцитарный диагностикум разводят 10 мл ЗФР (рН 7,2) и помещают в холодильник на ночь (для регидратации эритроцитов). Диагностикум, используемый сразу после разведения, часто дает нечеткий результат.
3. Исследуемые сыворотки крови, разведенные ЗФР в соотношении 1:25, необходимо прогреть при 56 °С в течение 30 мин для устранения неспецифических гемагглютининов, которые могут содержаться в сыворотках крови людей.
4. Поскольку некоторые сыворотки крови человека содержат антитела к эритроцитам барана (последние используются для конструирования коммерческого диагностикума), рекомендуется предварительно перед использованием провести адсорбцию каждой сыворотки 50 %-й взвесью бараньих эритроцитов (0,1 мл на 1 мл сыворотки) в течение ночи при температуре холодильника.
Иммуноферментный анализ (ИФА). Для постановки ИФА используют тест-системы «Иерсиниоз-ИФА-IgA», «Иерсиниоз-ИФА-IgM», «Иерсиниоз-ИФА-IgG», предназначенные для выявления антител классов А, М и G к возбудителям кишечного иерсиниоза и псевдотуберкулеза. Постановку и учет реакции осуществляют в соответствии с инструкцией по применению.
5.1.4. Регистрация и оформление результатов исследования
Данные о проведении исследований (испытаний) регистрируются в учётной документации, включающей:
· направления на проведение исследований;
· журналы регистрации образцов, поступивших на исследование;
· журналы регистрации результатов исследований.
Результаты каждого исследования (испытания) оформляются по унифицированным формам.
5.2.1. Требования к лабораториям филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации, осуществляющим исследования на иерсиниозы
Согласно п. 5.1.1.
5.2.2. Номенклатура и объем исследований
Микробиологические лаборатории филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации при проведении эпидемиологического надзора в соответствии с требованиями СП 3.1.2615-10 «Профилактика иерсиниозов» осуществляют в плановом порядке:
· исследование проб с эпидемически значимых объектов («объекты риска»): смывы с оборудования, инвентаря, овощей, пищевых продуктов в овощехранилищах, мясо- и молокоперерабатывающих предприятиях, объектах торговли продуктами растительного происхождения, пищеблоках объектов общественного питания, общеобразовательных учреждениях, детских и медицинских организациях;
· исследования продуктов животноводства, птицеводства, плодоовощной продукции в разрезе Программы производственного контроля (по согласованию);
· лабораторные исследования материала от больных (подозрительных на заболевание) - осуществляются по согласованию.
По эпидпоказаниям исследованию подлежат:
· материал от людей, находящихся в одинаковых с больными условиях по риску заражения, в эпидемических очагах при проведении эпидемиологического расследования и санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий;
· в эпидемических очагах иерсиниозов или при неблагополучной эпидемиологической ситуации:
° смывы с овощей, фруктов и других продуктов, не подвергающихся термической обработке;
° смывы с поверхности оборудования, инвентаря и тары в овощехранилищах, пищеблоках организованных коллективов, домашних очагах;
° остатки подозреваемых пищевых продуктов (салаты, сок домашнего приготовления, фляжное молоко, творог домашнего приготовления, сырое свиное мясо, субпродукты и т.д.);
° экскременты домашних и сельскохозяйственных животных, смывы с их подстилок;
° помет мелких млекопитающих;
° вода открытых водоемов и из ёмкостей для хранения.
В лабораториях филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации проводят диагностические исследования материала в следующем объеме:
1) посев на среды накопления, «холодовое обогащение» с периодическими высевами на дифференциально-диагностические среды, отсев характерных по морфологическим свойствам колоний иерсиний на ПУС;
2) идентификация и дифференциация выделенных культур до вида возбудителя по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам:
3) выявление антител в парных сыворотках (РНГА, ИФА).
5.2.3. Порядок лабораторных исследований на иерсиниозы в филиалах (отделениях) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании (городе, административном районе) в субъекте Российской Федерации
5.2.3.1. Правила отбора и транспортирования проб из объектов окружающей среды
Отбор проб и доставку осуществляют специалисты, владеющие методами отбора проб из объектов окружающей среды филиалов (отделений) ФБУЗ «ЦГиЭ».
· Пищевые продукты. В стерильную емкость помещают 25 г каждого продукта.
· Овощи. Одним влажным стерильным тампоном делают смыв не менее чем 10 экз. каждого вида овощей на границе здоровой и загнивающей части, помещают тампон в 5,0 - 10,0 мл среды накопления.
· Смывы с оборудования, инвентаря, тары. Одним влажным тампоном производят смыв с одноименных поверхностей площадью 100 см2 каждая, тампон помещают в 5,0 - 10,0 мл среды накопления.
· Вода из емкостей для хранения и открытых водоемов. В стерильные флаконы забирают 1 - 2 л воды.
· Помет. Собирают стерильной палочкой 1 - 2 г и помещают в 5,0 мл среды накопления.
Пробы маркируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией, заполняют бланк-направление и помещают в контейнер для транспортирования материала для исследования. Транспортирование осуществляют при температуре 4 - 12 °С в течение двух часов после забора.
5.2.3.2. Правила отбора и транспортирования проб от больных (подозрительных на заболевание) и лиц, находящихся с ними в одинаковых условиях по риску заражения.
Материал от больных (подозрительных на заболевание) и лиц, находящихся с ними в одинаковых условиях по риску заражения, забирает медицинский персонал МО немедленно при выявлении больного, до начала лечения антибиотиками.
Пробы маркируют, обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором, упаковывают в полиэтиленовый пакет с застежкой-молнией и вместе с бланком-направлением транспортируют при 4 - 12 °С в лабораторию МО или филиал (отделение) ФБУЗ «ЦГиЭ» (по договоренности) в течение двух часов после забора.
Взятие материала осуществляют согласно п. 5.1.3.1.
5.2.3.3. Порядок проведения лабораторного исследования на иерсиниозы объектов окружающей среды и материала от людей.
Исследование проб объектов окружающей среды, исследование клинического материала на иерсиниозы, видопринадлежность выделенных культур осуществляют в соответствии с п. 5.1.3.
5.2.4. Регистрация и оформление результатов исследования
Регистрация результатов анализа производится по учетным формам филиалов (отделений) ФБУЗ «ЦГиЭ» согласно п. 5.1.4.
5.2.5. Порядок передачи информации и выделенных культур лабораториями филиалов (отделений) ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
Информация о выделенных штаммах Y. pseudotuberculosis и У. enterocolitica в лабораториях филиалов (отделений) ФБУЗ «ЦГиЭ» от людей и объектов окружающей среды передается в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации.
Культуры Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica направляются в лаборатории ФБУЗ «ЦГиЭ» в субъекте Российской Федерации. Передача и транспортирование осуществляются в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру в одном экземпляре (прилож. 7 к МУ), сопроводительное письмо, акт передачи живых культур.
5.3.1. Требования к лабораториям ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
Согласно п. 5.1.1.
5.3.2. Номенклатура и объем исследований
Микробиологические лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации проводят в плановом порядке:
· исследования проб с эпидемиологически значимых объектов «объектов риска» (смывы с оборудования, инвентаря, овощей, пищевых продуктов в овощехранилищах, мясо- и молокоперерабатывающих предприятиях, объектах торговли продуктами растительного происхождения, пищеблоках объектов общественного питания, общеобразовательных учреждениях, детских и медицинских организациях);
· исследования продуктов животноводства, птицеводства, плодоовощной продукции в разрезе Программы производственного контроля (по согласованию);
· исследования материала от больных (подозрительных на заболевание) (по согласованию);
· подтверждение и идентификацию культур иерсиний, выделенных лабораториями МО и филиалами (отделениями) ФБУЗ «ЦГиЭ» по морфологическим, культурально-биохимическим и серологическим свойствам.
По эпидпоказаниям исследованию подлежат:
· материал от людей, находящихся в одинаковых с больными условиях по риску заражения, в эпидемических очагах при проведении санитарно-противоэпидемических мероприятий;
· смывы с овощей, фруктов и других продуктов, не подвергающихся термической обработке;
· смывы с поверхности оборудования, инвентаря и тары в овощехранилищах, пищеблоках организованных коллективов, домашних очагах;
· остатки подозреваемых пищевых продуктов (салаты, сок домашнего приготовления, фляжное молоко, творог домашнего приготовления, сырое свиное мясо, субпродукты и т.д.);
· экскременты домашних и сельскохозяйственных животных, смывы с их подстилок;
· помет мелких млекопитающих;
· вода открытых водоемов и из ёмкостей для хранения;
· исследование проб, собранных в ходе эпизоотологического обследования (тонкий кишечник мелких млекопитающих и птиц, брыжейка и мезентеральные лимфоузлы, гнезда грызунов, почва).
В лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации проводят исследования материала в следующем объеме:
1) посев на среды накопления, «холодовое обогащение» с периодическими высевами на дифференциально-диагностические среды, отсев характерных для иерсиний колоний на ПУС с одновременным выполнением экспресс-методов диагностики иерсиниозов (ПЦР, Real-time ПЦР);
2) идентификация и дифференциация выделенных культур до вида по морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам, в том числе с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» или аналоги) при наличии оборудования и тест-систем;
3) индикация и идентификация культур иерсиний с использованием ПЦР, Real-time ПЦР;
4) выявление антител в парных сыворотках (РНГА, ИФА, РА).
5.3.3. Порядок лабораторных исследований на иерсиниозы в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
5.3.3.1. Правила отбора и транспортирования проб из объектов окружающей среды.
Отбор и транспортирование материала осуществляют согласно п. 5.2.3.1.
5.3.3.2. Правила отбора и транспортирования клинического материала. Отбор и транспортирование материала осуществляют согласно пп. 5.1.3.1 и 5.2.3.2.
5.3.3.3. Правила отбора проб материала от животных, собранных при обследовании природных или антропоургических очагов иерсиниозов.
Материал, собранный в ходе обследования природных и антропургических очагов, должен быть свежим, поэтому органы животных следует забирать в максимально короткие сроки или соблюдать низкотемпературный режим для транспортировки и хранения полевого материала. Лабораторному исследованию подвергают: тонкий кишечник мелких млекопитающих, птиц, сельскохозяйственных и домашних животных, субстрат гнезд грызунов:
· Тонкий кишечник. 1,0 - 2,0 г в месте перехода тонкой кишки в толстую с содержимым забирают стерильно и помещают в 5,0 мл среды накопления.
· Брыжейка, мезентеральные лимфоузлы. 1,0 - 2,0 г стерильно измельчают, 1 мл суспензии помещают в 5,0 мл среды накопления.
· Гнезда грызунов. Субстраты гнезд (примерно 10 г каждого) растирают в ступке пестиком с фосфатно-буферным раствором, 1,5 мл взвеси вносят в 15,0 мл среды накопления.
5.3.3.4. Порядок проведения лабораторного исследования на иерсиниозы объектов окружающей среды, материала от людей, полевого материала, выделенных культур.
Исследование материала от людей с диагностической целью и по эпидпоказаниям, проб из объектов окружающей среды по эпидпоказаниям проводят в соответствии с п. 5.1.3. При осуществлении планового эпизоотологического мониторинга за природными очагами иерсиниозов высевы со сред накопления рекомендуется проводить до 21 суток.
Идентификация выделенной культуры проводится по следующим тестам:
· характерная морфология колоний;
· типичные биохимические свойства;
· чувствительность к псевдотуберкулезному фагу;
· серологическое типирование с использованием диагностических сывороток к Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica;
· биотипирование Y. enterocolitica по набору тестов (ферментация салицина, липазная активность, образование индола, ферментация ксилозы, нитратредуктазная активность, реакция Фогес-Проскауэра);
· определение вирулентности иерсиний по фенотипическим признакам (тест на аутоагглютинацию, определение кальцийзависимости роста иерсиний);
· РА на стекле с сывороткой к вирулентным иерсиниям.
5.3.4. Регистрация и оформление результатов исследования
Регистрация результатов анализа производится по учетным формам ФБУЗ «ЦГиЭ» согласно п. 5.1.4.
5.3.5. Порядок передачи информации и выделенных культур лабораториями ФБУЗ «Центр гигиены эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности
Информация о выделенных или идентифицированных культурах Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica передается в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности.
Культуры иерсиний, выделенных от людей, мелких млекопитающих и объектов окружающей среды, и идентифицированные в лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации передаются в установленном порядке в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов II - IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру, сопроводительное письмо и акт передачи патогенных биологических агентов III - IV групп за пределы организации.
6.1.1. Требования к лабораториям Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II - IV групп патогенности
Согласно п. 5.1.1.
6.1.2. Номенклатура и объем исследования
Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней II - IV групп патогенности проводят:
· верификацию культур иерсиний и их расширенную идентификацию;
· диагностические исследования материала от больных и объектов окружающей среды - в случае отсутствия диагностических возможностей на местах, трудности дифференциальной диагностики, наличия тяжелых и атипичных форм инфекции и т.д.;
· исследование проб, собранных в ходе эпизоотологического обследования природных и антропургических очагов иерсиниозов;
· контроль качества питательных сред.
Лаборатории Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II - IV групп патогенности проводят исследования в следующем объеме:
· идентификация культур, доставленных (определение биотипа, серотипа возбудителя, определение вирулентности культуры по фенотипическим признакам);
· индикация и идентификация культур иерсиний при использовании ПЦР, Real-time ПЦР;
· посев на среды накопления с одновременным выполнением экспресс-методов диагностики (ПЦР, Real-time ПЦР);
· высев со сред накопления на дифференциально-диагностические среды, отсев подозрительных колоний для последующей родовой и видовой дифференциации;
· идентификация возбудителя с использованием полу- или автоматизированных систем идентификации («Vitek-2», «Mini API», «Микроб-2», «Микроб-Автомат» или аналоги) при наличии оборудования.
6.1.3. Организация и обеспечение исследований на иерсиниозы в лабораториях Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II - IV групп патогенности
Порядок исследований клинического материала, проб из объектов окружающей среды, грызунов, птиц, материала от сельскохозяйственных и домашних животных проводят в соответствии с п. 5.1.3.
К подтверждающим тестам относительно Y. pseudotuberculosis/Y. enterocolitica относятся:
· характерная морфология колоний;
· типичные биохимические свойства;
· чувствительность к псевдотуберкулезному бактериофагу;
· серологическое типирование с использованием диагностических сывороток к Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis;
· биотипирование Y. enterocolitica по набору тестов (ферментация салицина, ксилозы, образование индола, редукция нитратов, реакция Фогес-Проскауэра);
· тест на аутоагглютинацию, определение кальций зависимости роста иерсиний, определение температурозависимой морфологии колоний; РА на стекле для выявления вирулентных иерсиний с СВИ;
· определение чувствительности к антибиотикам дискодиффузионным методом;
· определение видоспецифических ДНК-мишений методом ПЦР.
6.1.4. Регистрация и оформление результатов исследования
Регистрация результатов исследования оформляется согласно п. 5.1.4.
6.1.5. Порядок передачи информации и выделенных культур лабораториями Региональных центров по мониторингу возбудителей инфекционных и паразитарных болезней II - IV групп патогенности в Референс-центры
Информация о выделенных и идентифицированных культурах Y. pseudotuberculosis и патогенных Y. enterocolitica передается в Референс-центр по мониторингу за возбудителями иерсиниозов (ФБУН «Санкт-Петербургский НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» Роспотребнадзора) и Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекций (ФКУЗ «Иркутский НИПЧИ Сибири и Дальнего Востока» Роспотребнадзора).
При невозможности проведения диагностических исследований для установления причинно-следственной связи при работе в эпидемическом очаге, верификации и расширенной идентификации культур в Региональном центре по мониторингу за возбудителями II - IV групп патогенности лабораторные исследования (пп. 6.1.2 и 6.1.3) проводятся в других Региональных центрах по мониторингу за возбудителями II - IV групп патогенности по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам (Региональные опорные базы-консультантов). Лаборатории данных центров должны соответствовать требованиям, изложенным в п. 5.1.1.
Культуры Y. pseudotuberculosis и патогенных Y. enterocolitica от людей, грызунов и объектов окружающей среды, идентифицированные в лабораториях ФБУЗ «ЦГиЭ» в субъекте РФ, Региональных центрах по мониторингу возбудителей II - IV групп патогенности и в Региональных опорных базах - консультантов в федеральных округах передаются в установленном порядке в Референс-центр по иерсиниозам, а для территорий Сибирского и Дальневосточного федеральных округов - в Референс-центр по природно-очаговым инфекционным болезням.
Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов II - IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру (прилож. 7 к МУ), сопроводительное письмо и акт передачи патогенных биологических агентов III - IV групп за пределы организации.
Согласно п. 5.1.1.
Диагностические лаборатории Референс-центров проводят:
· расширенную идентификацию и изучение биологических, биохимических, молекулярно-генетических характеристик иерсиний, в том числе культур с атипичными свойствами;
· проводят генотипирование иерсиний современными методами;
· проводят исследования клинического материала, проб из объектов окружающей среды и проб полевого материала - на договорной основе;
· оказывают консультативно-методическую помощь по проведению лабораторных исследований на иерсиниозы организациям Роспотребнадзора и здравоохранения в субъектах Российской Федерации;
· обеспечивают повышение профессиональной подготовки специалистов лабораторного звена организаций Роспотребнадзора и здравоохранения при наличии соответствующих разрешительных документов;
· направляют в Государственные коллекции штаммы иерсиний в установленном порядке;
· организуют работы по внешнему контролю качества лабораторных исследований и мониторинга за иерсиниями по согласованию с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
Материалом для исследования служат культуры иерсиний, в том числе культуры с атипичными свойствами, выделенные в лабораториях территориального (муниципального) и регионального уровней; клинический материал, сыворотка крови больных иерсиниозами и подозрительных на инфекцию лиц, пробы из объектов окружающей среды и полевой материал по эпидпоказаниям и на договорной основе.
При исследовании культур возбудителей иерсиниозов, в том числе культур с атипичными свойствами, используют биологические и современные высокотехнологичные методы бактериологического, иммуносерологического и молекулярно-генетического анализа, а также современные серологические методы исследования сывороток крови больных иерсиниозами и подозрительных на эти инфекции, обследуемых по эпидпоказаниям.
Порядок исследования клинического материала, проб из объектов окружающей среды, мелких млекопитающих на иерсиниозы соответствуют п. 5.1.3.
Идентификация поступивших культур осуществляется по полной схеме:
· характерная морфология колоний;
· изучение биохимических свойств на расширенной биохимической панели, определение биотипа Y. enterocolitica;
· постановка развернутой реакции агглютинации с иерсиниозными агглютинирующими сыворотками (к Y. enterocolitica серотипов 0:3; 0:5,27; 0:8; 0:9 и др.; к Y. pseudotuberculosis серотипов 0:1, 0:3);
· определение детерминант патогенности в ПЦР (гены «острова высокой патогенности» НРI; «острова патогенности» YAPI; гены адгезии - инвазии inv, ail, гены энтеротоксинов ystA, ystB, гены плазмиды вирулентности иерсиний);
· определение чувствительности к антибиотикам (диско-диффузионным методом, методом разведений в агаре и бульоне);
· определение плазмидного спектра выделенных штаммов;
· определение серо- генотипа ПЦР (в случае отсутствия диагностических сывороток);
· электрофорез в пульсирующем поле (PFGE) - определение пульсотипа;
· мультилокусный вариабельный анализ (MLVA);
· определение вирулентности Y. pseudotuberculosis (определение LD50 при пероральном заражении белых мышей с помощью зонда; постановка кератоконъюнктивальной пробы на морских свинках).
При идентификации культур иерсиний с атипичными свойствами используют дополнительные биохимические, серологические, иммунологические и другие методы для подтверждения принадлежности культур к роду Yersinia и известным видам:
· расширенная панель биохимических тестов;
· ПЦР с использованием дополнительных специфических праймеров;
· постановка иммуносерологических реакций с использованием моноклональных антител.
Окончанием идентификации должно быть составление молекулярного профиля возбудителя.
Информация об идентифицированных культурах иерсиний направляется в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам. Оригинальные штаммы иерсиний, идентифицированные в бактериологических лабораториях Референс-центров, передаются в Государственную коллекцию штаммов микроорганизмов Национального центра верификации диагностической деятельности ФКУЗ «РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора.
Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности. Прилагается паспорт на культуру в одном экземпляре, сопроводительное письмо, акт передачи патогенных биологических агентов III - IV групп за пределы организации.
Подготовка кадров по лабораторным исследованиям иерсиниозов
№ п/п |
Перечень бактериологических лабораторий с учетом уровней |
Уровни подготовки |
|||||||
Профессиональная переподготовка по специальности «Бактериология» («Лабораторное дело») (не менее 500 ч) |
Повышение квалификации каждые 5 лет (не менее 144 ч) |
Сертификационный цикл |
Другие виды подготовки (тематические семинары, рабочие места в лабораториях Референс-центрах (по согласованию) |
||||||
врачи, биологи |
лаборанты |
врачи, биологи |
лаборанты |
врачи |
лаборанты |
врачи, биологи |
лаборанты |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
Территориальный уровень |
|||||||||
1 |
ЛПО |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+* |
+* |
2 |
Филиалы (отделения) ФБУЗ ЦГиЭ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+* |
+* |
3 |
ФБУЗ ЦГиЭ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+* |
+* |
Региональный уровень |
|||||||||
1 |
Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
2 |
Опорные базы - консультантов, сотрудничающие по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
Федеральный уровень |
|||||||||
1 |
Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных болезней |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
Референс-центр по мониторингу за иерсиниозами |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
|
+ - обязательный уровень подготовки: - не требуется подготовка для такого уровня; * - подготовка для такого уровня рекомендуется, но не является обязательной |
Требования к профессиональным навыкам специалистов, осуществляющих лабораторные исследования иерсиниозов
1. Требования к знаниям и умениям специалистов МО, выполняющих исследования на иерсиниозы
1.1. Врачи-бактериологи, врачи-лаборанты ПЦР-лаборатории должны знать:
· основные положения клинико-эпидемиологических проявлений иерсиниозов и характеристику иерсиний, особенности лабораторного обследования больного в соответствии с клиническими формами заболеваний;
· нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
· порядок доставки, приёма, регистрации клинического материала;
· порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка клинического материала);
· этапы лабораторного исследования;
· методы лабораторного исследования;
· морфологические, культуральные, серологические, биохимические, вирулентные, молекулярно-биологические свойства иерсиний;
· порядок работы на лабораторном оборудовании;
· порядок выдачи результатов лабораторного исследования;
· порядок, сроки передачи культур иерсиний в специализированную лабораторию для дальнейшего изучения;
· требования биологической безопасности при передаче ПБА.
1.2. Врачи-бактериологи должны уметь:
· проводить отбор типичных для иерсиний колоний с питательных сред;
· проводить пересев колоний на полиуглеводные среды;
· проводить биотипирование выделенных культур Y. enterocolitica;
· проводить с выделенными культурами Y. enterocolitica РА с сывороткой к вирулентным иерсиниям;
· проводить учёт полученных морфологических, культуральных, серологических, биохимических, вирулентных свойств исследуемого микроорганизма;
· проводить учёт серологического исследования крови;
· выдавать ответ по результатам исследований;
· готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
· вести необходимую документацию.
1.3. Врачи-лаборанты ПЦР-лаборатории должны уметь:
· готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
· проводить выделение нуклеиновых кислот, амплификацию, учёт результатов;
· проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
· выдавать ответ по результатам исследований;
· вести необходимую документацию.
1.4. Лаборанты-бактериологи должны знать:
· нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на заражённость возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
· порядок доставки, приёма, регистрации клинического материала:
· порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка клинического материала);
· этапы лабораторного исследования;
· методы лабораторного исследования;
· порядок работы на лабораторном оборудовании.
1.5. Лаборанты-бактериологи должны уметь:
· принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований доставки клинического материала;
· проводить подготовку диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовку клинического материала;
· выполнять первичные посевы клинического материала, пересевы со сред обогащения, проведение биохимических тестов;
· выполнять постановку серологических реакций (РА, ИФА, РНГА);
· готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать посевы, биологические отходы;
· готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
· готовить рабочие места врача и лаборанта, после окончания работ проводить обеззараживание;
· вести необходимую документацию.
1.6. Лаборанты ПЦР-лаборатории должны уметь:
· принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований забора, доставки клинического материала;
· готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
· проводить пробоподготовку клинического материала;
· проводить выделение нуклеиновых кислот;
· проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
· готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать биологические отходы.
2. Требования к знаниям и умениям специалистов филиалов (отделения*) ФБУЗ ЦГиЭ, выполняющих исследования на иерсиниозы
2.1. Врачи-бактериологи должны знать:
· основные положения эпидемиологического надзора за иерсиниозами, в том числе контингент обследуемых, клинические формы заболеваний, виды исследуемых проб из объектов окружающей среды;
· нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на заражённость возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
· порядок доставки, приема, регистрации клинического материала, проб из объектов окружающей среды;
· порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка материала);
· этапы лабораторного исследования;
· методы лабораторного исследования;
· морфологические, культуральные, серологические, биохимические, вирулентные свойства иерсиний;
· порядок работы на лабораторном оборудовании;
· порядок выдачи результатов лабораторного исследования;
· порядок, сроки передачи культур иерсиний в специализированную лабораторию для дальнейшего изучения;
· требования биологической безопасности при передаче ПБА в другую организацию.
2.2. Врачи-бактериологи должны уметь:
· проводить отбор типичных для иерсиний колоний с питательных сред;
· проводить пересев колоний на полиуглеводные среды;
· проводить биотипирование выделенных культур Y. enterocolitica;
· проводить с выделенными культурами Y. enterocolitica PA с сывороткой к вирулентным иерсиниям;
· проводить учёт полученных морфологических, культуральных, серологических, биохимических свойств и маркеров вирулентности исследуемого микроорганизма;
· проводить учёт серологического исследования крови;
· выдавать ответ по результатам исследований;
· готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
· вести необходимую документацию.
2.3. Лаборанты должны знать:
· нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на заражённость возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
· порядок доставки, приёма, регистрации клинического материала, проб из внешней среды;
· порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование;
· этапы лабораторного исследования;
· методы лабораторного исследования;
· порядок работы на лабораторном оборудовании.
2.4. Лаборанты должны уметь:
· принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований доставки клинического материала;
· проводить подготовку диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовку исследуемого материала;
· выполнять первичные посевы клинического материала, пересевы со сред обогащения, проведение биохимических тестов, тестов на маркеры вирулентности иерсиний - аутоагглютинации, кальцийзависимости;
· выполнять постановку серологических реакций (РА, ИФА, РНГА);
· готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать посевы, биологические отходы;
· готовить рабочие места врача и лаборанта, после окончания работ проводить обеззараживание;
· готовить культуры, материал для передачи в специализированную лабораторию;
· вести необходимую документацию.
3. Требования к знаниям и умениям специалистов региональных центров по мониторингу за возбудителями (II - IV групп патогенности), ФБУЗ ЦГиЭ, выполняющих исследования на иерсиниозы
3.1. Врачи-бактериологи должны знать:
· основные положения эпидемиологического надзора за иерсиниозами, в том числе контингенты обследуемых, клинические формы заболеваний, виды исследуемых проб от людей, из объектов окружающей среды;
· порядок организации и обеспечения консультативной и практической помощи лабораториям ЛПУ, филиалов (отделения) ФБУЗ ЦГиЭ, ФБУЗ ЦГиЭ территориального уровня;
· нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на заражённость возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
· порядок доставки, приёма, регистрации клинического материала, проб из внешней среды;
· порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование (подготовка диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовка материала):
· этапы лабораторного исследования;
· методы лабораторного исследования;
· морфологические, культуральные, серологические, биохимические, вирулентные, молекулярно-биологические свойства иерсиний;
· порядок работы на лабораторном оборудовании;
· порядок выдачи результатов лабораторного исследования;
· порядок, сроки передачи культур иерсиний в Референс-центр по иерсиниозам для дальнейшего изучения;
· требования биологической безопасности при передаче ПБА в другую организацию.
3.2. Врачи-бактериологи должны уметь:
· проводить отбор типичных для иерсиний колоний с питательных сред;
· проводить посев на полиуглеводные среды;
· проводить типирование выделенных культур Y. enterocolitica на наличие маркеров вирулентности:
· проводить с выделенными культурами Y. enterocolitica РА с сывороткой к вирулентным иерсиниям;
· проводить серологическое типирование культур иерсиний;
· проводить учёт полученных морфологических, культуральных, серологических, биохимических свойств и маркеров вирулентности исследуемого микроорганизма;
· проводить учёт серологического исследования крови;
· выдавать ответ по результатам исследований;
· готовить культуры, материал для передачи в лаборатории Регионального центра по мониторингу за возбудителями I - II группы патогенности. Референс-центр по иерсиниозам;
· вести необходимую документацию.
3.3. Врачи ПЦР-лаборатории должны уметь:
· готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
· проводить выделение нуклеиновых кислот, амплификацию, учёт результатов;
· проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
· выдавать ответ по результатам исследований;
· вести необходимую документацию.
3.4. Лаборанты должны знать:
· нормативные документы, регламентирующие проведение исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при работе с материалом, подозрительным на заражённость возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок сбора, хранения, обеззараживания, утилизации биологических отходов;
· порядок доставки, приёма, регистрации клинического материала;
· порядок проведения работ, обеспечивающих лабораторное исследование;
· этапы лабораторного исследования;
· методы лабораторного исследования.
3.5. Лаборанты-бактериологи должны уметь:
· принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований забора, доставки клинического материала;
· проводить подготовку диагностических препаратов, химических реактивов, расходных материалов, лабораторной посуды, сред, пробоподготовку клинического материала;
· выполнять первичные посевы клинического материала, пересевы со сред обогащения, проведение биохимических тестов, тестов на маркеры вирулентности иерсиний - аутоагглютинации, кальцийзависимости;
· выполнять постановку серологических реакций (РА, ИФА, РНГА);
· готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать посевы, биологические отходы;
· готовить рабочие места врача и лаборанта, после окончания работ проводить обеззараживание;
· вести необходимую документацию.
3.6. Лаборанты ПЦР-лаборатории должны уметь:
· принимать, регистрировать клинический материал, оценивать соблюдение требований забора, доставки клинического материала;
· готовить рабочее место для проведения ПЦР-исследования;
· проводить пробоподготовку клинического материала;
· проводить обеззараживание рабочего места после окончания работ;
· готовить дезинфицирующие средства, обеззараживать биологические отходы.
4. Требования к знаниям и умениям специалистов МО, ФБУЗ ЦГиЭ (филиалов, отделения филиалов), осуществляющих отбор клинического материала, проб объектов окружающей среды для исследования на иерсиниозы
4.1. Специалисты должны знать:
· основные положения эпидемиологического надзора за иерсиниозами, в том числе контингенты обследуемых, клинические формы заболеваний, виды исследуемых проб от людей, из объектов окружающей среды;
· нормативные документы, регламентирующие забор материала, проб для исследований на иерсиниозы;
· требования биологической безопасности при заборе, доставке материала, подозрительного на заражённость возбудителями III - IV групп патогенности;
· порядок доставки клинического материала, проб из внешней среды:
· порядок заполнения сопроводительной документации.
4.2. Специалисты должны уметь:
· проводить отбор проб от людей, из объектов окружающей среды;
· заполнять сопроводительную документацию;
· доставлять клинический материал, пробы из внешней среды в лабораторию в соответствии с требованиями.
Питательные среды, используемые для проведения лабораторных исследований на иерсиниозы
№ п/п |
Наименование питательных сред |
Территориальный уровень |
Региональный уровень |
Федеральный уровень |
||||
МО |
Филиалы (отделения) ФБУЗ «ЦГиЭ» |
ФБУЗ «ЦГиЭ» |
Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности |
Опорные базы - консультантов, сотрудничающие по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам |
Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных заболеваний |
Референс-центр по мониторингу за иерсиниозами |
||
1 |
2 |
3 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
1 |
Мясопептонный бульон рН 7,6 - 7,8 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
2 |
Бульон Хоттингера |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
3 |
Мясопептонный агар |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
4 |
Агар Хоттингера |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
5 |
Фосфатно-буферный раствор РН 7,6 - 7,8 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
6 |
Пептонно-калиевая среда рН 7,6 - 7,8 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
7 |
Транспортная среда Кузнецова рН 7,2 - 7,4 |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
8 |
Питательная среда для определения чувствительности к антибактериальным препаратам (АГВ) |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
9 |
Среда Эндо** |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
10 |
Среда с бромтимоловым синим (СБТС)** |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
11 |
Полужидкий агар (0,2 - 0,4 %) для определения подвижности |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
12 |
Среда Мак Конки** |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
13 |
Бульон Кларка |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
14 |
УСС (универсальный скошенный столбик)*** |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
15 |
Трехсахарный агар с мочевиной (среда Олькеницкого)*** |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
16 |
Трехсахарный агар с мочевиной (среда Ресселя I)*,*** |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/-- |
+/- |
+/- |
17 |
Трехсахарный агар с сахарозой и маннитом (среда Ресселя II)*,*** |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
18 |
Среда с мочевиной для определения уреазы |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
19 |
Среда для определения гидролиза эскулина |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
20 |
Среда с орнитином для определения орнитиндекарбоксилазы |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
21 |
Среда с фенилаланином |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
22 |
Среда с лизином для определения лизиндекарбоксилазы |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
23 |
Среда для определения липазы |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
24 |
Среда для определения индолобразования |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
25 |
Среда Симмонса для определения способности утилизировать цитрат |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
Среды Гисса для определения ферментации углеводов |
||||||||
26 |
Среда Гисса с сахарозой |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
27 |
Среда Гисса с рамнозой |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
28 |
Среда Гисса с раффинозой |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
29 |
Среда Гисса с трегалозой |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
30 |
Среда Гисса с сорбитом |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
31 |
Среда Гисса с ксилозой |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
32 |
Среда Гисса с салицином |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
33 |
Среда Гисса с маннитом |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
34 |
Среда Гисса с сорбозой |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
35 |
Среда Гисса с мальтозой |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
36 |
Среда Гисса с мелибиозой |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ - обязательное использование данных сред. +/- - использование данных сред рекомендовано, но не является обязательным. - - не используются. * Возможно применение данных сред при наличии в лабораториях ингредиентов для приготовления. ** Используется любая из предложенных сред или другие среды для выращивания иерсиний коммерческого изготовления, разрешённые к применению на территории Российской Федерации. *** Используется любая из предложенных полиуглеводных сред или другие дифференциальные иерсиниозные среды, в том числе коммерческого изготовления, разрешённые к применению на территории Российской Федерации |
Диагностические препараты, тест-системы, используемые для проведения лабораторных исследований на иерсиниозы
№ п/п |
Наименование диагностических препаратов, тест-систем, биологических препаратов |
Территориальный уровень |
Региональный уровень |
Федеральный уровень |
||||
МО |
Филиалы (отделения) ФБУЗ «ЦГиЭ» |
ФБУЗ «ЦГиЭ» |
Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности |
Опорные базы - консультантов, сотрудничающие по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам |
Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных заболеваний |
Референс-центр по мониторингу за иерсиниозами |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
1 |
Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие псевдотуберкулезные адсорбированные лошадиные, лиофилизат для диагностических целей |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
2 |
Фаг диагностический псевдотуберкулезный сухой, лиофилизат для диагностических целей |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
3 |
Тест-система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний I серотипа* |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
4 |
Диагностикум псевдотуберкулезный эритроцитариый антигенный сухой |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
5 |
Диагностикум эритроцитарный кишечно-иерсиниозный 0:9 антигенный сухой |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
6 |
Диагностикум эритроцитарный кишечно-иерсиниозный 0:3 антигенный сухой |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
7 |
Диагностические сыворотки псевдотуберкулезные моновалентные (содержат антитела к О-антигенам возбудителей псевдотуберкулеза сероваров I или III) |
+/- |
- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
8 |
Тест-системы для выявления ДНК Yersinia pseudotuberculosis |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
9 |
Тест-системы для выявления ДНК Yersinia enterocolitica |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
10 |
Набор для подготовки проб (выделение ДНК) |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
11 |
ПЦР-тест-системы для выявления генов вирулентности Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
12 |
Диагностические системы, энтеротесты для идентификации энтеробактерий |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ - обязательное использование данных тест-систем. +/- - использование данных тест-систем рекомендовано, но не является обязательным. - - не используются. * Возможно применение данных тест-систем при наличии лабораторного оборудования. Используется любая из предложенных тест-систем или другие тест-системы коммерческого изготовления, разрешённые к применению на территории Российской Федерации |
Химические реактивы, используемые для проведения лабораторных исследований на иерсиниозы
№ п/п |
Наименование химических реактивов |
Территориальный уровень |
Региональный уровень |
Федеральный уровень |
||||
МО |
Филиалы (отделения) ФБУЗ «ЦГиЭ» |
ФБУЗ «ЦГиЭ» |
Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности |
Опорные базы - консультантов, сотрудничающие по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам |
Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных заболеваний |
Референс-центр по мониторингу за иерсиниозами |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
1 |
Андредо |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
2 |
Бриллиантовый зеленый |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
3 |
Бромтимоловый синий |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
4 |
Генциан-виолет |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
5 |
Конго красный |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
6 |
Метиленовый синий |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
7 |
Феноловый красный |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
8 |
Фуксин |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
9 |
Сахароза |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
10 |
Рамноза |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
11 |
Раффиноза |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
12 |
Сорбит |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
13 |
Ксилоза |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
14 |
Сорбоза |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
15 |
Фукоза |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
16 |
Мальтоза |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
17 |
Мелибиоза |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
18 |
Крахмал |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
19 |
Маннит |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
20 |
Глюкоза |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
21 |
Лактоза |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
22 |
Салицин |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
23 |
Эскулин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
24 |
Трегалоза |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
25 |
Орнитин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
26 |
Цистин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
27 |
Фенилаланин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
28 |
α-нафтол |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
29 |
Диметилпарафенилендиамин (тетраметилпарафенилендиамин, оксалат) |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
30 |
Тиосульфат натрия |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
31 |
Йод кристаллический |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
32 |
Сернисто-кислый натрий |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
33 |
Хлористый натрий |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
34 |
Калия гидрофосфат |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
35 |
Тринатрий фосфат* |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
36 |
Хлористый натрий |
+ |
+ |
+ |
||||
37 |
Гидроокись калия* |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
38 |
Молибденово-кислый аммоний |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
39 |
Углекислый натрий безводный |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
40 |
Железо-аммонийные квасцы |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
41 |
Мочевина |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
42 |
Танин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
43 |
Леворин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
44 |
Грамицидин |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
45 |
Желчь |
+/- |
+/- |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
46 |
Масло вазелиновое |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
47 |
Масло иммерсионное |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
48 |
Масло иммерсионное нефлуоресцирующее |
+/- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
49 |
Спирт этиловый |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
50 |
Глицерин |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
51 |
Хлорамин или другие дезинфектанты, активные в отношении иерсиний, разрешённые к применению на территории РФ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
52 |
ДП-2Т |
+/- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ - обязательное использование данных средств. +/- - использование данных средств рекомендовано, но не является обязательным. - - не используются |
Приборы и оборудование, используемые для проведения лабораторных исследований на иерсиниозы
№ п/п |
Наименование оборудования, СИ |
Территориальный уровень |
Региональный уровень |
Федеральный уровень |
||||
МО |
Филиалы (отделения) ФБУЗ «ЦГиЭ» |
ФБУЗ «ЦГиЭ» |
Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности |
Опорные базы - консультантов, сотрудничающие по согласованию с Референс-центром по иерсиниозам |
Референс-центр по мониторингу за возбудителями природно-очаговых инфекционных болезней |
Референс-центр по мониторингу за иерсиниозами |
||
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
1 |
Весы электронные. Диапазон измерений до 600 г, класс точности или погрешность: ± 10 мг |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
2 |
Весы электронные. Диапазон измерений до 400 г, класс точности или погрешность: ± 10 мг |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
3 |
рН-метр. Диапазон измерений: 0 - 14 рН, погрешность: ± 0,002 рН |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
4 |
Дозатор пипеточный 1-канальный. Диапазон измерений: 25 мкл точность 1,5 %, 50 мкл точность 1,0 % |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
5 |
Дозатор пипеточный 1-канальный. Диапазон измерений: 0,5 - 10 мкл ССП ± (10,0 - 2,5) % СКО 7,0 - 3.0 %, 2 - 20 мкл СКО 6 - 3 % ССП ± 8 - 2 %. 10 - 100 мкл ССП ± 2,5 - 1,5 % СКО 3,0 - 2,0 %. 100 - 1000 мкл ССП ± 1,5 - 1,0 % СКО 2,0 - 1,0 % |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
6 |
Термостат электрический суховоздушный. Основные технические характеристики: 28 - 55 °С ± 1 °С |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
7 |
Термостат электрический суховоздушный с охлаждением. Основные технические характеристики: 5 - 60 °С ± 1,5 °С или 5 - 70 °С ± 0,5 °С |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
8 |
Шкаф сушильный стерилизационный. Основные технические характеристики: 50 - 350 °С |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
9 |
Стерилизатор паровой. Основные технические характеристики: 2,2 кгс/см2 или 3,0 кгс/см2 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
10 |
Центрифуга. Основные технические характеристики: N: не менее 3000 об./мин |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
11 |
Аппарат для свертывания и инактивирования сыворотки. Основные технические характеристики: 50 - 90 °С ± 0,5 °С |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
12 |
Микроскоп стереоскопический с увеличением: ×3,3 - 100 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
13 |
Микроскоп световой с увеличением: ×3,3 - 100 |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
14 |
Микроскоп люминесцентный с увеличением: ×3,3 - 100 |
+/- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
15 |
Холодильник. Основные технические характеристики: t° до +10 °С |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
16 |
Морозильная камера. Основные технические характеристики: t° не менее - 18 - 20 °С |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
17 |
Иммуноферментный анализатор |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
18 |
Автоматический идентификатор |
+/- |
- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
19 |
Бокс абактериальной воздушной среды «Ламинар-С» класса II А |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
20 |
УФО-бокс |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
21 |
Микроцентрифуга. Основные технические характеристики: N: не менее 12000 об./мин |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
22 |
Вортекс-встряхиватель. Основные технические характеристики: не менее 2000 об./мин |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
23 |
Медицинский отсасыватель. Основные технические характеристики: 0,17 кгс/см2 |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
24 |
Твердотельный термостат. Основные технические характеристики: до 100 °С ± 1 °С |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
25 |
Экстрактор нуклеиновых кислот |
+/- |
- |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
26 |
Амплификатор. Основные технические характеристики: 4 - 99 °С ± 0,2 °С |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
27 |
Термоциклер с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени |
+ |
+/- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
28 |
Аквадистиллятор. Основные технические характеристики: 25 дм3/ч ± 10 % |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
29 |
Шейкер. Основные технические характеристики: 0 - 800 об./мин max нагрузка 2 кг |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
30 |
Аппарат для фильтрации |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
31 |
Плита электрическая |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ - обязательное использование данных средств. +/- - использование данных средств рекомендовано, но не является обязательным. - - не используются |
ПАСПОРТ
штамма бактерий рода Yersinia (для лабораторий территориального и регионального
уровней)
1. Видовое название штамма __________________________________________________ 2. Лабораторный номер штамма _______________________________________________ 3. Особое обозначение штамма (серотип, биотип) ________________________________ 4. Источник выделения штамма: 4.1. Ф.И.О., возраст, № истории болезни, год, МО, окончательный диагноз (основное заболевание, течение, осложнения) ____________________________________________ ___________________________________________________________________________ 4.2. Вид животного __________________________________________________________ 4.3. Объект окружающей среды или продукт питания _____________________________ 5. Субстрат, из которого выделен штамм ________________________________________ 6. Дата выделения ___________________________________________________________ 7. Место выделения штамма (область, район, населенный пункт) ___________________ ___________________________________________________________________________ 8. Метод выделения _________________________________________________________ 9. Ф.И.О. лица, идентифицировавшего штамм ___________________________________ 10. Культурально-морфологические и другие свойства штамма (рост на плотных, жидких питательных средах и пр.) _____________________________________________ ___________________________________________________________________________ 11. Биохимическая активность штамма: |
Тест |
Реакция |
Образование кислоты из: |
Реакция |
Гидролиз мочевины |
Глюкозы |
||
Образование H2S |
Лактозы |
||
Фенилаланиндезаминаза |
Маннитола |
||
Орнитиндекарбоксилаза |
Сахарозы |
||
Лизиндекарбоксилаза |
Рамнозы |
||
Реакция Фогес-Проскауэра (26 ± 2) °С |
Раффинозы |
||
Реакция Фогес-Проскауэра (37 ± 1) °С |
Мелибиозы |
||
Липаза (Твин 80) |
Ксилозы |
||
Образование индола |
Салицина |
||
Подвижность (26 ± 2) °С |
Сорбитола |
||
Подвижность (37 ± 1) °С |
Мальтозы |
||
Гидролиз эскулина |
Нитратредуктазная активность |
12. Тесты патогенности:
Наличие способности к аутоагглютинации |
|
Наличие кальцийзависимости |
13. Другие тесты
Серологический вариант |
|
Биотип |
14. Дата последней проверки свойств штамма ___________________________________ 15. Условия хранения и транспортирования _____________________________________ 16. Дата отправки штамма, координаты отправителя (адрес, электронная почта, тел./факс) __________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ |
Состав и прописи питательных сред для первичного выделения культур
Трехсахарный агар с мочевиной (Рессель I)
Состав:
№ п/п |
Ингредиенты |
Количество |
1 |
Сухой питательный агар |
25,0 г |
2 |
Глюкоза |
1,0 - 1,5 г |
3 |
Лактоза |
7,0 - 10,0 г |
4 |
Мочевина |
3,0 г |
5 |
Кальций хлористый |
2,0 г |
6 |
Феноловый красный, 1 %-й водный р-р |
2,0 мл |
7 |
Метиленовый синий |
1,0 мл |
8 |
Вода дистиллированная |
1 л |
Приготовление
Твердые ингредиенты помещают в дистиллированную воду в любой последовательности. После того, как растворится агар, смесь нагревают до кипения, добавляют индикаторы - феноловый красный и метиленовый синий. рН 7,0 - 7,2 (в горячем виде среда грязно-зеленого цвета), разливают по пробиркам (5 - 6 мл в каждую) и стерилизуют автоклавированием 15 мин под давлением 0,5 атм.
Свежестерилизованная среда приобретает желтый или желто-оранжевый цвет в результате восстановления (обесцвечивание) метиленового синего при автоклавировании.
Осторожным встряхиванием (!) каждой пробирки в наклонном положении вновь придают еще горячей среде её исходную грязно-серую окраску. Это происходит за счет окисления метиленового синего кислородом воздуха.
Среду скашивают, оставляя столбик высотой 2 см и косую поверхность 4 - 5 см. Застывшая среда должна в течение 2 - 3 дней «дозреть», т.е. приобрести однотонную сиреневато-светло-коричневую окраску, что свидетельствует об окислении, т.е. о восстановлении цветности метиленового синего по всей глубине среды. Посев культуры осуществляют штрихами по скошенной поверхности и уколом в столбик среды.
Трехсахарный агар с сахарозой и маннитом (Рессель II)
Состав:
№ п/п |
Ингредиенты |
Количество |
1 |
Дистиллированная вода |
1 л |
2 |
Сухой питательный агар |
25,0 г |
3 |
Сухой пептон (Семипалатинский) |
10,0 г |
4 |
Сахароза |
8,0 - 10,0 г |
5 |
Маннит |
0,8 - 1,0 г |
6 |
Цистин |
0,4 г |
7 |
Тиосульфат натрия (гипосульфит) |
0,3 г |
8 |
Железоаммониевые квасцы |
0.4 г |
9 |
Феноловый красный. 1 %-й водный р-р |
3,5 - 4,0 мл |
10 |
Крахмал |
2,0 г |
Приготовление
Ингредиенты вводят в следующем порядке: в холодной воде растворить квасцы, затем добавить крахмал и сухой питательный агар, дать им хорошо раствориться, после чего внести остальные компоненты.
Среду доводят до кипения, устанавливают рН 7,2 - 7,4, разливают в пробирки по 7 - 8 мл, автоклавируют при 0,5 - 0,7 атм. 15 - 20 мин, после чего скашивают. Цвет среды розово-красный.
Универсальный скошенный столбик
Состав:
№ п/п |
Ингредиенты |
Количество |
1 |
Агар сухой питательный |
3,5 г |
2 |
Лактоза |
0,4 г |
3 |
Глюкоза |
0,08 г |
4 |
Крахмал растворимый |
0,05 г |
5 |
Сахароза |
1,5 г |
6 |
Мочевина |
0,25 г |
7 |
Уксусно-кислый свинец |
0,03 г |
8 |
Тиосульфат натрия |
0,03 г |
9 |
Цистин |
0,003 г |
10 |
Феноловый красный, 1 %-й водный р-р |
2,5 мл |
11 |
Дистиллированная вода |
100 мл |
Приготовление
Ингредиенты вносить в любом порядке. Количество питательного агара, вносимого в среду, зависит от его серии. Если на этикетке указано, что на 100 мл воды его надо брать 5 г, то в среду добавляют 3,5 г, если на этикетке имеется рекомендация 3,5 г на 100 мл, то добавляют 2,5 г. Среду кипятить в течение 10 - 15 мин, разливать в стерильные пробирки по 5 мл, автоклавировать при 0,5 атм. 15 мин, после чего скашивать. Цвет среды абрикосовый.