4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Порядок организации и проведения
лабораторной диагностики Крымской
геморрагической лихорадки для лабораторий
территориального, регионального и
федерального уровней

Методические указания

МУК 4.2.3007-12

Москва 2012

1. Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.Б. Ежлова, Н.Д. Пакскина, В.Ю. Смоленский): Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора (А.Н. Куличенко, О.В. Малецкая, Н.Ф. Василенко, Н.Г. Варфоломеева, Л.В. Ермаков, Д.М. Бамматов, И.В. Ковальчук, Е.А. Горобец, Л.С. Волынкина, А.Н. Бейер); Федеральным бюджетным учреждением науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» (В.С. Петров, А.П. Агафонов. В.Н. Михеев, А.Н. Сергеев); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» Роспотребнадзора (С.А. Щербакова, И.Н. Шарова, А.В. Топорков, В.В. Кутырев); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора (Э.А. Москвитина, Н.Л. Пичурина, Л.М. Веркина, С.О. Водопьянов, А.Б. Мазрухо); Федеральным казенным учреждением здравоохранения «Противочумный центр» Роспотребнадзора (С.М. Иванова, Ю.Н. Хомяков, В.Е. Безсмертный); Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии» Роспотребнадзора (В.Г. Сенникова, В.В. Мордвинова).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 28.03.2012 и введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Порядок организации и проведения лабораторной
диагностики Крымской геморрагической лихорадки
для лабораторий территориального, регионального и
федерального уровней

Методические указания

1. Область применения

1. Настоящие методические указания определяют порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней, формы и методы их взаимодействия, номенклатуру и объем исследования, требования к лабораториям, специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований, материально-техническому обеспечению исследований, к биологической безопасности проведения работ.

2. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор в Российской Федерации, специалистов противочумных учреждений, органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации в области охраны здоровья граждан и медицинских организаций.

2. Перечень сокращений

Аг - антиген;

Ат - антитело;

Вирус ККГЛ - вирус Крымской-Конго геморрагической лихорадки;

ИФА - иммуноферментный анализ;

КГЛ - Крымская геморрагическая лихорадка;

КРС - крупный рогатый скот;

МО - медицинские организации

МРС - мелкий рогатый скот;

МУ - методические указания;

МУК - методические указания по контролю;

МФА - метод флуоресцентного анализа;

ООИ - особо опасные инфекции;

ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией;

ПЦР - полимеразная цепная реакция:

ПЧС - противочумная станция;

ПЧЦ - Противочумный центр;

РНК - рибонуклеиновая кислота;

СанПиН - санитарные правила и нормы;

СП - санитарные правила;

ЦПЭ - цитопатический эффект;

IgG - иммуноглобулины класса G;

IgM - иммуноглобулины класса М.

3. Общие положения

3.1. Характеристика болезни и возбудителя Крымской геморрагической лихорадки

Крымская геморрагическая лихорадка (КГЛ) (Crimean haemorrhagic fever) - арбовирусная трансмиссивная природно-очаговая инфекционная болезнь, вызываемая вирусом Крымской-Конго геморрагической лихорадки (вирусом ККГЛ) семейства Bunyaviridae рода Nairovirus. Вирус ККГЛ обладает вазотропностью, поражает эндотелий капилляров, вследствие чего наступает нарушение водного и белкового обмена и возникают воспалительно-токсические процессы в паренхиматозных органах. По степени тяжести выделяют: тяжелые, среднетяжелые, легкие и инаппарантные (субклинические) формы болезни. Тяжелые и среднетяжелые формы могут протекать с геморрагическим синдромом и без геморрагического синдрома.

Болезнь кодируется как А98.0 - Крымская геморрагическая лихорадка в соответствии с «Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем» (Десятый пересмотр. Женева, 2003. МКБ-10). По принятой в Российской Федерации классификации патогенных биологических агентов вирус ККГЛ относится к микроорганизмам II группы патогенности.

Основным резервуаром и переносчиком вируса ККГЛ являются иксодовые клещи рода Hyalomma. В природных очагах КГЛ вирус изолирован из клещей Hyalomma marginatum marginatum, H. anatolicum, Dermacentor marginatus, Rhipicephalus rossicus, R. bursa, Boophilus annulatus, Ixodes ricinus и др.

Основными прокормителями имаго клещей в хозяйственных условиях являются крупный (КРС) и мелкий рогатый скот (МРС), а также зайцы, ежи, а преимагинальных фаз клещей - птицы семейства врановых (грачи, вороны, сороки) и куриных (куропатки, индейки).

Основным механизмом передачи вируса ККГЛ является трансмиссивный с реализацией инокуляционного (при укусе зараженными клещами) или контаминационного путей передачи. В отдельных случаях заражение человека может происходить при контактном механизме передачи возбудителя КГЛ. При контакте с кровью и биологическими выделениями, содержащими кровь (мокрота, испражнения) больного, заражаются члены семьи, медицинские работники, больные и др. Гемоконтактный путь передачи инфекции также может реализовываться при убое и разделке крупного и мелкого рогатого скота, снятии шкурок и разделке туш зайцев и т.п. Возможен аспирационный механизм заражения с воздушно-капельным и воздушно-пылевым путями передачи возбудителя при авариях в условиях лабораторий и при оказании помощи больным КГЛ с поражением легких.

Вирус ККГЛ имеет сферическую форму (диаметр вириона 80 - 120 нм) и внешнюю липопротеидную оболочку. РНК вируса сегментирована и состоит из малого (S), среднего (М) и большого (L) сегментов, кодирующих нуклеокапсидный белок (N), оболочечные гликопротеины (G1 и G2) и белки полимеразного комплекса соответственно.

Малый и большой сегменты РНК высоко консервативны, и их нуклеотидные последовательности используются как для разработки тест-систем, выявляющих РНК вируса ККГЛ в пробах различного происхождения, так и для филогенетического анализа. Средний сегмент РНК вариабелен, даже в одной генетической группе наблюдаются значительные различия в нуклеотидной последовательности у различных штаммов вируса ККГЛ.

Вирус малоустойчив в окружающей среде. При кипячении инактивируется моментально, при температуре 60 °С разрушается в течение 30 мин, при 37 °С - через 20 ч, при 45 °С - через 2 ч. Лиофилизированная культура сохраняется до двух лет. Вирус чувствителен к ультрафиолетовому облучению. По отношению к дезинфицирующим веществам вирус ККГЛ обладает обычной для вирусов чувствительностью.

3.2. Лабораторная диагностика КГЛ

Лабораторная диагностика КГЛ включает проведение:

· диагностических исследований клинического материала от людей с подозрением на заболевание КГЛ, умерших с подозрением на заболевание КГЛ и от лихорадки неясного генеза на эндемичных по КГЛ территориях;

· лабораторных исследований полевого материала, собранного в природных биотопах КГЛ (клещи, мышевидные грызуны, птицы семейства врановых, сыворотка крови сельскохозяйственных животных) для изучения циркуляции вируса ККГЛ на данной территории.

Для лабораторной диагностики КГЛ и выделения вируса ККГЛ используют молекулярно-генетический метод (ПЦР), иммуноферментный анализ (ИФА), вирусологический метод.

Для лабораторной диагностики заболевания у людей используют ПЦР и ИФА. Лабораторные исследования проводят на территориальном уровне (лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации), региональном уровне (Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности (ПЧС, ПЧЦ, НИИ Роспотребнадзора) и Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней (НИИ Роспотребнадзора, ПЧЦ, ПЧС).

При необходимости изучения вируса ККГЛ, циркулирующего на данной территории, и появлении заболеваний КГЛ с атипичной клинической картиной проводят вирусологические исследования в учреждениях федерального уровня.

К учреждениям федерального уровня относятся Референс-центр по мониторингу за возбудителем КГЛ, Национальный центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора.

Для проведения лабораторных исследований полевого материала используют аналогичный алгоритм.

4. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального уровня

4.1. Действия специалистов медицинских организаций при подозрении на выявление больного Крымской геморрагической лихорадкой

4.1.1. Требования к лабораториям медицинских организаций, осуществляющих забор, хранение, транспортирование и передачу биологического материала, подозрительного на наличие возбудителя Крымской геморрагической лихорадки

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории МО должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов.

Учет, хранение, передача и транспортирование биологического материала, подозрительного на наличие возбудителя Крымской геморрагической лихорадки, должны осуществляться в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по безопасности работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности).

Утилизация отходов должна осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами по обращению с медицинскими отходами.

Проведение работ на всех этапах: отбор проб, их хранение, транспортировка и передача, взаимодействие с учреждениями Роспотребнадзора должны соответствовать требованиям действующих нормативных и распорядительных документов.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Лаборатория медицинской организации должна иметь пакет рабочих экземпляров нормативно-методической документации и инструкций, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Инструкции должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники обязаны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным или зараженным

возбудителями инфекционных болезней III - IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.

Порядок организации внутреннего контроля качества работы лабораторий

Контроль качества работы в лабораториях лечебно-профилактических учреждений реализуется через следующие контрольные процедуры:

· контроль качества отбора материала на исследование;

· контроль качества транспортировки материала;

· контроль качества оформления сопроводительной документации;

· контроль стерильности лабораторной посуды, дистиллированной воды;

· контроль качества работы паровых и суховоздушных стерилизаторов;

· контроль работы бактерицидных ламп;

· контроль температурного режима работы холодильников;

· контроль температурного режима работы термостатов;

· проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Правила ведения документации

Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют ежедневно в соответствии с требованиями действующих методических документов.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для отбора проб

Для отбора материала на Крымскую геморрагическую лихорадку в лабораториях МО должен быть в наличии комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей для исследования на особо опасные инфекционные болезни).

Для проведения работ персонал лабораторий должен быть обеспечен спецодеждой и средствами индивидуальной защиты.

4.1.2. Номенклатура и объем исследований

В МО производят забор клинического материала от лиц с подозрением на КГЛ и секционного материала при летальном исходе.

В МО не проводят диагностические исследования материала от больных с подозрением на КГЛ.

4.1.3. Порядок работы при отборе клинического материала для исследования на Крымскую геморрагическую лихорадку в медицинских организациях

Отбор проб материала от людей (трупов) с подозрением на КГЛ осуществляет медицинский персонал с соблюдением требований противоэпидемического режима (во избежание внутрибольничного заражения) в соответствии с требованиями действующих санитарных правил по безопасности работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности).

В случае летального исхода при наличии анамнеза, клинических данных и результатов лабораторных исследований, подтверждающих КГЛ, труп с учетом высокого риска заражения персонала вскрытию не подлежит.

При наличии анамнестических и клинических признаков КГЛ без подтверждения диагноза лабораторными исследованиями труп подлежит патологоанатомическому вскрытию с применением средств индивидуальной защиты (противочумный костюм I типа, дополненный фартуком, второй парой резиновых перчаток и нарукавниками) и соблюдением мер личной безопасности в соответствии с требованиями действующих методических указаний по организации и проведению первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевание карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими международное значение. Забор секционного материала при вскрытии умерших от КГЛ, а также лиц с подозрением на данную инфекцию (умерших от лихорадки неясного генеза в эндемичных по КГЛ территориях) проводит патологоанатом или судмедэксперт в присутствии специалиста по особо опасным инфекциям, с соблюдением регламентированных требований биологической безопасности при работе с патогенными биологическими агентами I - II групп. Секционный материал отбирают для исследования методом ПЦР, в случае необходимости - для вирусологического исследования.

Материалом для исследования на наличие вируса ККГЛ является: цельная кровь, образцы сыворотки и плазмы крови, сгусток крови, секционный материал (печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг).

Для ПЦР-исследований материал от больных (кровь) забирают в ранние сроки от начала заболевания (до 7 дня), в период вирусемии. Для серологического исследования кровь отбирают дважды - на 5 - 7 день и на 10 - 14 день от начала заболевания, в случае необходимости забор крови может быть осуществлен и в более поздние сроки.

Отбор и упаковку проб клинического материала для лабораторного исследования на КГЛ осуществляют согласно действующим методическим указаниям по организации и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки.

Забор проб для молекулярно-генетического исследования осуществляют в соответствии с действующими методическими указаниями по организации работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности и методическими рекомендациями по забору, транспортированию, хранению клинического материала для ПЦР-диагностики.

Хранят сыворотку крови при температуре от 2 до 8 °С не более 3 суток, при температуре не выше минус 16 °С - в течение 1 месяца, при температуре не выше минус 68 °С - в течение 1 года. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. При замораживании клинического материала его транспортирование должно проводиться также в замороженном состоянии.

4.1.4. Оформление направления на исследование

На каждую отправляемую в лабораторию пробу от больного КГЛ или с подозрением на эту инфекцию заполняют направление в соответствии с прилож. 5. На пробы секционного материала (от умершего от КГЛ или с подозрением на эту инфекцию) заполняют направление в соответствии с прилож. 6. Направляемую пробу (пробы) сопровождают письмом на имя руководителя учреждения, в котором указывают вид направляемого материала, количество образцов и цель исследования; письмо подписывает руководитель направившего учреждения.

4.1.5. Порядок взаимодействия медицинских организаций с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных случаях КГЛ направляют в установленном порядке в соответствии с действующими нормативными документами.

Материал направляют в специализированные лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации. В случае отсутствия в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации лабораторий, осуществляющих исследования на КГЛ, а также при необходимости подтверждения диагноза клинический материал доставляют в Региональный центр по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности или Центр индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней в установленном порядке. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими санитарными правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности (опасности).

4.1.6. Транспортирование крови, сывороток крови и секционного материала в специализированную лабораторию регионального или федерального уровня

Транспортирование проб клинического материала для лабораторного исследования на КГЛ осуществляют согласно действующим методическим указаниям по организации и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки.

Материал с направлением доставляют специально выделенным транспортом в сопровождении медицинского работника.

Если материал для исследований может быть доставлен в лабораторию в течение 2 - 4 ч, то его транспортируют в термосе с сухим льдом или термоконтейнере с хладоагентами. Если время доставки материала превышает 4 ч, его замораживают и доставляют в термоконтейнерах с сухим льдом. Биологический материал от больных (трупа) с подозрением на КГЛ отправляют в специализированную лабораторию не позднее 24 ч.

4.2. Порядок работы при проведении лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации
(в муниципальном образовании, городе, административном районе)

Специалисты филиалов ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в муниципальном образовании в субъекте Российской Федерации по эпидпоказаниям могут привлекаться специалистами ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации для сбора полевого материала (иксодовых клещей, птиц и грызунов, проб крови крупного и мелкого рогатого скота).

Сбор и транспортирование полевого материала проводятся согласно п. 4.3.3.1.

4.3. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации

4.3.1. Требования к лабораториям ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, осуществляющим исследования на Крымскую геморрагическую лихорадку

Лабораторные исследования на КГЛ могут проводить лаборатории особо опасных инфекций, ПЦР-исследований, вирусологические лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации.

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов

Лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, осуществляющие лабораторные исследования на КГЛ, должны соответствовать требованиям действующих нормативных документов и иметь санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами II - IV групп патогенности (опасности) в соответствии с действующими Санитарными правилами о порядке выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных болезней человека I - IV групп патогенности (опасности), генноинженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами.

Учет, хранение, передача и транспортирование подозрительного материала на КГЛ, деконтаминация и утилизация отходов должны осуществляться в соответствии с действующими санитарными правилами.

Транспортирование материала проводится в условиях «холодовой цепи».

Требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ

Исследования на КГЛ могут выполнять специалисты не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим образованием, окончившие курсы профессиональной переподготовки по специальности «Вирусология» и/или «Бактериология» с основами безопасной работы с патогенными биологическими агентами (ПБА) I - II групп, не имеющие противопоказаний к лечению специфическими препаратами и имеющие допуск к работе с ПБА II - IV групп на основании приказа руководителя учреждения.

Инженерно-технический персонал и дезинфекторы проходят специальную подготовку по месту работы в соответствии с должностными обязанностями.

Специалисты, осуществляющие деятельность, связанную с использованием возбудителей инфекционных болезней, должны повышать квалификацию не реже одного раза в пять лет.

Необходимый уровень подготовки специалистов с высшим медицинским (биологическим) образованием и средним медицинским образованием представлен в прилож. 1.

Требования к обеспечению безопасности работы персонала

Каждая лаборатория должна иметь пакет документов, определяющих режим безопасной работы сотрудников с учетом характера работ, особенностей технологии, свойств микроорганизмов. Документы должны быть согласованы с комиссией по контролю соблюдения требований биологической безопасности, специалистами по охране труда, противопожарным мероприятиям и утверждены руководителем учреждения. Результаты проверок знаний правил техники безопасности персонала при проведении работ фиксируются в специальном журнале.

Все сотрудники должны выполнять требования по обеспечению безопасности работы с материалом, подозрительным и зараженным возбудителями инфекционных болезней II - IV групп патогенности (опасности), в соответствии с действующими нормативными документами.

Порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований.

Контроль качества диагностических исследований на КГЛ в лабораториях ФБУЗ включает:

· проведение контроля качества диагностических препаратов и тест-систем, дезинфицирующих средств, химических реактивов;

· проведение своевременной поверки средств измерений, аттестации испытательного оборудования;

· контроль качества стерильности лабораторной посуды, дистиллированной воды;

· контроль качества работы паровых и суховоздушных стерилизаторов;

· контроль температурного режима холодильников;

· контроль температурного режима термостатов;

· контроль работы бактерицидных облучателей;

· проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности, давления;

· проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, контроль качества дезинфекции, контроль смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Правила ведения документации

Ведение лабораторной документации, включая регистрационные и рабочие журналы, осуществляют в соответствии с требованиями действующих нормативно-методических документов.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ

Для проведения диагностических исследований на КГЛ в лабораториях должны быть в наличии:

· диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке (прилож. 2);

· приборы, оборудование (прилож. 3);

· расходные и дезинфицирующие материалы (прилож. 4);

· комплект медицинский (укладка универсальная для забора материала от людей и из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни);

· рабочая и защитная одежда, тип защитной одежды зависит от характера выполняемой работы.

4.3.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации проводят:

· сбор полевого материала (иксодовые клещи, органы птиц и грызунов (головной мозг, печень), пробы крови крупного и мелкого рогатого скота - по эпидпоказаниям;

· исследование полевого материала и сывороток крови крупного и мелкого рогатого скота;

· исследование материала от больных и умерших с подозрением на КГЛ иммуносерологическими и молекулярно-генетическими методами, согласно действующим методическим указаниям по лабораторной диагностике КГЛ.

4.3.3. Порядок диагностических исследований на КГЛ в лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации

Забор клинического материала от больных и умерших с подозрением на КГЛ осуществляют в соответствии с п. 4.1.3.

4.3.3.1. Сбор и транспортирование полевого материала

Сбор материала и его транспортирование осуществляют зоогруппы ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации с соблюдением правил безопасности работы с материалом, подозрительным на зараженность возбудителями I - II групп патогенности.

Рекомендуется использовать для забора материала комплект медицинский (укладку универсальную для забора материала из объектов окружающей среды для исследования на особо опасные инфекционные болезни).

В сельскохозяйственных комплексах объектами наблюдения являются КРС, МРС, индейки и клещи на разных фазах развития, собранные с животных. В природных биотопах проводят отстрел врановых птиц, отлов мелких диких млекопитающих с целью получения от них материала для лабораторного исследования на наличие антител к вирусу ККГЛ, антигена или РНК этого возбудителя. Кроме того, с животных и птиц собирают клещей для последующего исследования.

Отбор, упаковку и транспортирование проб полевого материала для лабораторного исследования на КГЛ осуществляют согласно действующим методическим указаниям по организации и проведению профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки.

4.3.3.2. Оформление направления на исследование

На пробы полевого материала заполняют направление (прилож. 9) в двух экземплярах, один - вкладывают в контейнер с пробами, второй - доставляет нарочный. Направляемые пробы сопровождают письмом на имя руководителя учреждения, в котором указывают вид направляемого материала и цель его исследования; письмо подписывает руководитель направившего учреждения.

4.3.3.3. Методы исследования полевого и клинического материала на КГЛ включают специфическую индикацию возбудителя в исследуемом материале (выявление РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР, обнаружение вирусного антигена и специфических антител класса М (IgM) и класса G (IgG) иммуноферментным методом).

Порядок исследования материала включает:

I этап

· прием, сортировку и регистрацию проб;

· первичную обработку проб и подготовку их к исследованию;

· постановку ПЦР и ИФА.

II этап

5 - 6 ч от начала исследования - учет результатов ИФА;

8 - 12 ч от начала исследования - учет результатов ПЦР;

· выдача ответа специфической индикации на основании результатов ИФА и ПЦР.

4.3.3.4. Регистрация и оформление результатов исследования

Регистрацию результатов анализа в лабораториях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» производят по учетным формам и оформляют в соответствии с прилож. 7, 8.

4.3.3.5. Порядок взаимодействия лабораторий ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации с учреждениями Роспотребнадзора

Информацию о выявленных положительных пробах передают в соответствии с действующей нормативной документацией и направляют в Референс-центр по мониторингу за Крымской геморрагической лихорадкой.

При необходимости изоляции штаммов вируса ККГЛ (по эпидпоказаниям) положительные на КГЛ пробы от людей, из объектов окружающей среды передают в установленном порядке в Референс-центр по мониторингу за возбудителем КГЛ для выделения штаммов и идентификации возбудителя. Срок доставки - 5 суток. Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности. Прилагаются сопроводительное письмо, акт упаковки и акт передачи.

5. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий регионального уровня

5.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

5.1.1. Требования к лабораториям Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней

Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Лаборатории Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней должны иметь санитарно-эпидемиологическое заключение о возможности проведения работ с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности).

Наличие регламентирующих работу документов, требования к учету, хранению, передаче и транспортированию положительных проб на КГЛ, утилизации отходов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований, правила ведения документации, требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследовании на КГЛ аналогичны п. 4.3.1.

5.1.2. Номенклатура и объем исследований аналогичны п. 4.3.2.

5.1.3. Порядок диагностических исследований на Крымскую геморрагическую лихорадку в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней аналогичны п. 4.3.3.

5.1.4. Оформление результатов исследования

Регистрацию результатов анализа в лабораториях Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней производят в учетных формах рабочей документации. Результаты исследования выдают на соответствующем бланке учреждения.

5.1.5. Порядок взаимодействия лабораторий Региональных центров по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центров индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней с учреждениями Роспотребнадзора аналогичны п. 4.3.3.5.

6. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий федерального уровня

6.1. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для Референс-центра но мониторингу за возбудителем КГЛ

6.1.1. Требования к лабораториям Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов для лабораторий Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ, требования к учету, хранению, передаче и транспортированию положительных проб на КГЛ, утилизации отходов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, правила ведения документации аналогичны п. 5.1.1.

Порядок организации внутреннего контроля качества лабораторных исследований

Контроль качества диагностических исследований на КГЛ в лабораториях Референс-центра по мониторингу за КГЛ включает:

· контроль качества культур клеток, питательных сред, растворов для культур клеток, диагностических препаратов и тест-систем, выделенных штаммов, антибактериальных препаратов, дистиллированной воды, дезинфицирующих средств, химических реактивов;

· своевременную поверку средств измерений, аттестацию испытательного оборудования;

· контроль стерильности лабораторной посуды;

· контроль качества работы паровых и суховоздушных стерилизаторов:

· контроль температурного режима работы холодильников и термостатов;

· контроль работы бактерицидных ламп;

· проверку состояния воздуха производственных помещений и боксов, температурного режима, влажности;

· проверку санитарного состояния помещений, включая условия уборки, дезинфекции, контроля смывов с поверхностей и оборудования.

Результаты контроля фиксируют в специальных журналах.

Требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ

Для проведения диагностических исследований на КГЛ в лабораториях должны быть в наличии:

· диагностические препараты, тест-системы, зарегистрированные в установленном порядке и экспериментальные серии (прилож. 2);

· приборы, оборудование (прилож. 3);

· расходные и дезинфицирующие материалы (прилож. 4).

· культуры клеток, зарегистрированные в установленном порядке, питательные среды и растворы для культур клеток, рекомендуемые антибиотики (прилож. 10).

6.1.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории Референс-центра по мониторингу за КГЛ проводят:

· исследование материала иммунологическими и молекулярно-генетическими методами от больных и умерших с подозрением на КГЛ;

· выделение вируса;

· полную идентификацию и изучение биологических, молекулярно-генетических, биохимических свойств штаммов возбудителя КГЛ, в том числе с атипичными свойствами;

· генетическое типирование и секвенирование РНК штаммов возбудителя КГЛ, а также анализ геномов штаммов вируса;

· исследование клинического (секционного) и полевого материала по эпидемиологическим показаниям с учетом сложившейся эпизоотологической и эпидемиологической обстановки.

6.1.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности при мониторинге за возбудителем Крымской геморрагической лихорадки

Материалом для исследования служат клинический и полевой материал, штаммы возбудителя КГЛ, в том числе штаммы с атипичными свойствами.

При исследовании клинического, полевого материала и штаммов возбудителя КГЛ, в том числе с атипичными свойствами, используют весь комплекс современных высокотехнологичных методов вирусологического, иммуносерологического и молекулярно-генетического анализа, включая применение экспериментально-лабораторных серий препаратов.

Порядок исследования клинического и полевого материала на КГЛ

Для выделения вируса и выявления маркеров возбудителя от больных людей берут кровь (до 5-х сут. от начала клинических проявлений заболевания при посеве на культуры клеток и до 7-х сут. - при заражении новорождённых белых мышей при проведении вирусологического исследований и на 10 - 14-й день - для серологического исследования при выявлении IgM). От умерших для исследования берут пробы легких, печени, селезенки, почек и мозг (головной и спинной).

Специфическая индикация возбудителя КГЛ осуществляется:

· иммуноферментным анализом: для выявления антигена вируса исследуют сыворотку крови, а также суспензии органов;

· полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией: выявление РНК возбудителя КГЛ.

Выделение и идентификация возбудителя КГЛ:

· культивирование вируса ККГЛ в перевиваемых клетках линий Vero-E6, SW-13 и др. Вирус ККГЛ культивируется в перевиваемых клетках Vero-Е6 без цитопатического эффекта, на перевиваемой культуре клеток аденокарциномы человека SW-13 вирус ККГЛ вызывает цитопатический эффект (ЦПЭ), проявляющийся в виде разрежения монослоя и отслаивания клеток от поверхности. Вирусный антиген накапливается в цитоплазме клеток;

· исследование монослоя зараженных клеток с помощью МФА через 24 - 48 (72) ч. Вирусный антиген выявляется в цитоплазме клеток в виде светящихся мельчайших зернышек и гранул различной величины, сливающихся в диффузную массу;

· заражение белых мышей-сосунков в головной мозг. Инкубационный период при первичном заражении составляет 5 - 12 дней. Через 24 и 48 ч часть мышей забивают и из мозга готовят мазки-отпечатки для МФА и суспензии - для РНГА. При получении отрицательных результатов исследования этого материала за оставшимися мышами наблюдают еще трое суток, после чего подвергают их мозг такому же исследованию. Модель новорождённых белых мышей более чувствительна, чем культура клеток.

Выявление антител к вирусу ККГЛ в сыворотке (плазме) крови человека.

Серодиагностику заболевания осуществляют с помощью ИФА (выявление IgM и IgG к вирусу ККГЛ). Титр IgG определяют одновременно в парных сыворотках крови.

6.1.4. Порядок взаимодействия лабораторий Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ с Национальным центром верификации диагностической деятельности и Национальным центром, осуществляющим функцию государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора

Выделенные штаммы вируса ККГЛ передают в соответствии с действующими нормативными документами в Национальный центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функцию государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора.

Передачу и транспортирование осуществляют в соответствии с действующими СП по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности.

6.2. Порядок и организация лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора

6.2.1. Требования к лабораториям Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора

Лаборатории Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора должны быть аккредитованы на техническую компетентность в установленном порядке в соответствии с действующей законодательной базой Российской Федерации.

Наличие разрешительных и регламентирующих работу документов, требования к специалистам и персоналу, участвующим в выполнении исследований на КГЛ, требования к обеспечению безопасности работы персонала, порядок организации внутреннего контроля лабораторных исследований, правила ведения документации и требования к материальным ресурсам, необходимым для выполнения диагностических исследований на КГЛ, аналогичны п. 5.1.1.

6.2.2. Номенклатура и объем исследований

Лаборатории Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора проводят:

· изоляцию штаммов вируса ККГЛ из проб материала, полученных из Референс-центра по мониторингу за возбудителем КГЛ;

· верификацию результатов диагностики КГЛ;

· диагностические исследования материала от больных КГЛ и умерших от этой болезни - по эпидпоказаниям;

· осуществляют хранение коллекционных штаммов вируса ККГЛ, охраноспособное и авторское депонирование.

6.2.3. Организация и обеспечение диагностической деятельности

Порядок исследования клинического и полевого материала на КГЛ соответствует п. 6.1.3.

Дополнительно проводят:

· полногеномное секвенирование;

· хранение коллекционных штаммов, охраноспособное и авторское депонирование;

· на основании результатов расширенной характеристики штаммов вируса ККГЛ составляют паспорта на штаммы, хранящиеся в Национальном центре, осуществляющем функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора.

6.2.4. Порядок взаимодействия Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора с учреждениями Роспотребнадзора

Национальный Центр верификации диагностической деятельности и Национальный центр, осуществляющий функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора направляет результаты проведенных исследований в Региональные центры по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности, Центры индикации и диагностики возбудителей опасных инфекционных болезней, Референс-центр по мониторингу за возбудителем КГЛ.

7. Нормативные ссылки

7.1. Федеральный закон от 03.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

7.2. Федеральный закон от 04.05.2011 № 99-ФЗ «О лицензировании отдельных видов деятельности».

7.3. Постановление Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 № 31 «Об утверждении положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний».

7.4. Постановление Правительства Российской Федерации от 29.10.2007 № 720 «О внесении изменений в пункт 5 Положения о лицензировании деятельности, связанной с использованием возбудителей инфекционных заболеваний, утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 22.01.2007 № 31».

7.5. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 07.07.2009 № 415н «Об утверждении квалификационных требований к специалистам с высшим и послевузовским медицинским и фармацевтическим образованием в сфере здравоохранения» (Зарегистрирован в Минюсте РФ 09.07.2009 № 14292).

7.6. Приказ Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 17.03.2008 № 88 «О мерах по совершенствованию мониторинга за возбудителями инфекционных и паразитарных болезней».

7.7. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко от 01.04.2005 № 12 «Об эпидемиологической обстановке по Крымской геморрагической лихорадке в Южном федеральном округе и мерах по ее профилактике».

7.8. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г. Онищенко от 02.04.2007 № 17 «О мерах по совершенствованию профилактики Крымской геморрагической лихорадки в Южном федеральном округе».

7.9. Постановление Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 24.02.2009 № 11 «О представлении внеочередных донесений о чрезвычайных ситуациях в области общественного здравоохранения санитарно-эпидемиологического характера» (Зарегистрировано в Минюсте РФ 10.04.2009 № 13745).

7.10. СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности» (Утв. постановлением Госкомсанэпиднадзора РФ от 28.08.1995 № 14).

7.11. СП 3.5.3.1129-02 «Санитарно-эпидемиологические требования к проведению дератизации».

7.12. СП 1.3.1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)» (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 15.04.2003 № 42 «О введении в действие санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03». Зарегистрировано в Минюсте РФ 10.05.2003 № 4545).

7.13. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней» (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2008 № 4 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.2322-08». Зарегистрировано в Минюсте РФ 21.02.2008 № 11197).

7.14. СП 3.4.2318-08 «Санитарная охрана территории Российской Федерации» (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 22.01.2008 № 3 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.4.2318-08». Зарегистрировано в Минюсте РФ 03.04.2008 № 11459).

7.15. СП 1.3.2518-09 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Дополнения и изменения 1 к СП 1.3.2322-08» (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 02.06.2009 № 42. Зарегистрировано в Минюсте РФ 8.07.2009 № 14280).

7.16. СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность».

7.17. СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» (Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 09.12.2010 № 163. Зарегистрировано в Минюсте РФ 17.02.2011 № 19871).

7.18. МУ 287-113 от 30.12.1998 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».

7.19. МУ 3.1.1027-01 «Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих-переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций».

7.20. МУ 3.1.1029-01 «Отлов, учет и прогноз численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах инфекций».

7.21. МУ 3.4.2552-09 «Организация и проведение первичных противоэпидемических мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания инфекционными болезнями, вызывающими чрезвычайные ситуации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения».

7.22. МУ 3.4.1030-01 «Организация, обеспечение и оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий в случае завоза или возникновения особо опасных инфекций, контагиозных вирусных геморрагических лихорадок, инфекционных болезней неясной этиологии, представляющих опасность для населения Российской Федерации и международного сообщения».

7.23. МУ 4.2.2039-05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории».

7.24. МУ 1.3.2569-09 «Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I - IV групп патогенности».

7.25. МУ 3.1.1.2488-09 «Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки».

7.26. Методические рекомендации «Забор, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики». М., 2006.

Приложение 1

Требования к профессиональным навыкам специалистов, осуществляющих лабораторную диагностику Крымской геморрагической лихорадки

1. Требования к профессиональным навыкам лаборантов, осуществляющих лабораторную диагностику Крымской геморрагической лихорадки:

1.1. Лаборант лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, лаборатории Регионального центра по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центра индикации и диагностики возбудителей особо опасных инфекционных болезней должен владеть навыками:

· подготовки рабочего места;

· приготовления дезинфицирующих и буферных растворов;

· подготовки лабораторной посуды, реактивов;

· забора, транспортирования и регистрации инфекционного клинического материала;

· подготовки клинических и полевых проб для лабораторных исследований;

· проведения текущей дезинфекции;

· ведения рабочих журналов в соответствии с действующими нормативными документами.

1.2. Лаборант лаборатории Референс-центра по мониторингу за возбудителем Крымской геморрагической лихорадки и лаборатории Национального Центра верификации диагностической деятельности в дополнение к перечню в п. 1.1 должен владеть навыками:

· обработки и хранения клинических и полевых проб;

· обработки и консервирования вирусов;

· заражения и вскрытия лабораторных животных с целью выделения вирусов;

· организации передачи и пересылки клинических проб и инфекционных материалов в соответствующие лаборатории (центры).

2. Требования к профессиональным навыкам врачей-вирусологов (научных сотрудников), осуществляющих лабораторную диагностику Крымской геморрагической лихорадки:

2.1. Врач лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации, лаборатории Регионального центра по мониторингу за возбудителями инфекционных болезней I - II групп патогенности и Центра индикации и диагностики возбудителей особо опасных инфекционных болезней должен владеть навыками:

· организации работы среднего и младшего медперсонала лаборатории;

· оформления первичной медицинской документации, учетной и отчетной документации;

· статистического анализа и основных показателей деятельности врача-вирусолога;

· информационно-разъяснительной работы;

· определения объема информации, необходимого для проведения вирусологического обследования;

· оценки клинических и эпидемиологических данных;

· забора, транспортирования инфекционного клинического материала;

· подготовки клинических и полевых проб для лабораторных исследований;

· определения условий обработки, хранения материала, степени пригодности к исследованию и т.д.;

· постановки иммунологических методов (ИФА, МФА);

· постановки ПЦР с электрофоретической регистрацией результата и в формате «реального времени».

2.2. Врач-вирусолог (научный сотрудник) лаборатории Референс-центра по мониторингу за возбудителем Крымской геморрагической лихорадки и вирусологической лаборатории Национального центра верификации диагностической деятельности и Национального центра, осуществляющего функции государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций, риккетсиозов, Роспотребнадзора в дополнение к перечню в п. 2.1 должен владеть навыками:

· хранения и консервирования вирусов;

· заражения и вскрытия лабораторных животных с целью выделения вирусов (белые мыши, куриные эмбрионы, кролики, крысы, морские свинки);

· иммунизации животных, получения иммунных сывороток и асцитов;

· забора крови у животных: приготовления сыворотки, плазмы и взвеси эритроцитов и лейкоцитов;

· работы с культурами клеток, получения первичных культур клеток, пересева перевиваемых и первичных культур клеток;

· выделения вирусов при заражении первичных и перевиваемых культур клеток, животных, куриных эмбрионов;

· титрования вирусов на животных, в куриных эмбрионах, в культуре клеток;

· реакции нейтрализации вирусов на животных, куриных эмбрионах, культуре клеток, подсчета ЛД50 по Риду и Менчу или другими статистическими методами обработки результатов наблюдений;

· постановки иммунологических методов (ИФА, МФА);

· постановки ПЦР с электрофоретической регистрацией результата и в формате «реального времени».

Приложение 2
(справочное)

Диагностические препараты, тест-системы, используемые при проведении лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки

Приложение 3

Приборы и оборудование, используемые при проведении лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки

Приложение 4

Расходные и дезинфицирующие материалы, используемые при проведении лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки

Приложение 5

НАПРАВЛЕНИЕ на исследование крови, сыворотки крови для выявления РНК вируса ККГЛ; антител IgM, IgG; антигена вируса ККГЛ; выделения вируса ККГЛ

Приложение 6

НАПРАВЛЕНИЕ на исследование секционного материала

Приложение 7

Результат серологических исследований на КГЛ

Приложение 8

Результат выявления РНК вируса ККГЛ методом ОТ-ПЦР

Приложение 9

Направление на исследование полевого материала

Приложение 10

Перевиваемые клеточные культуры, питательные среды и растворы для культур клеток, рекомендуемые антибиотики для использования в культурах клеток при проведении лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки