Государственное санитарно-эпидемиологическое
нормирование
Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение
остаточных количеств
пестицидов в сельскохозяйственном
сырье, пищевых продуктах и
объектах окружающей среды
Сборник
методических указаний
по методам контроля
МУК
4.1.2907-11; 4.1.2923
- 4.1.2925-11;
4.1.2938-11
Москва • 2011
1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений Россельхозакадемии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 2.06.2011 № 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
5. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
|
УТВЕРЖДАЮ Руководитель
Федеральной службы Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г. Дата введения: с момента утверждения |
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств изопротурона и
дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе
зерновых культур методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии
Методические указания
МУК 4.1.2924-11
Настоящий документ устанавливает методику измерения массовых концентраций изопротурона в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01мг/дм3, в зерне в диапазоне 0,005 - 0,1 мг/кг, в почве - 0,01 - 0,1 мг/кг, дифлюфеникана в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/дм3, в зерне и почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, изопротурона и дифлюфеникана в соломе зерновых в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.
Действующее вещество 1: изопротурон.
3-(4-изопропил)-1,1-диметилмочевина (IUPAC).
Брутто формула: C12H18N2О.
Молекулярная масса: 206,3.
Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический порошок.
Температура плавления: 158 °С.
Давление пара 3,15∙10- мРа (20 °С).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: Kow lgP = 2,5 (20 °С).
Растворимость в воде (мг/дм3, 22 °С): 65.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 20 °С) в метаноле - 75, дихлорметане - 63, ацетоне - 38, бензоле - 5, ксилоле - 4, н-гексане - 0,2.
Очень стабилен к воздействию света, кислот и щелочей. Гидролизуется при нагревании в концентрированной щелочи.
Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная токсичность LD50 - 1826 - 2417 мг/кг (крысы), 3350 мг/кг (мыши). При подкожном введении LD50 для крыс более 2000 мг/кг. Ингаляционная токсичность для крыс LС50 превышает 1,95 мг/дм3 (период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
Область применения: селективный системный гербицид, адсорбируемый корнями и листьями растений. Используется для контроля до и после появления однолетних трав и многолетних широколиственных сорняков на озимых и яровых посевах пшеницы, ржи и ячменя с нормой расхода 1,0 - 1,5 кг/га.
В России для изопротурона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,006 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,8 мг/м3; ОДК в воде водоемов - 0,09 мг/дм3; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,01 мг/кг.
Действующее вещество 2: дифлюфеникан.
2',4' - дифтор-2(α, α, α-трифтор-м-толилокси)никотинанилид (IUPAC).
Брутто формула: C19H11F5N2О2.
Молекулярная масса: 394,3.
Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический порошок.
Температура плавления: 159 - 161 °С.
Давление пара 4,25∙10-3 мРа (25 °С).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: Kow lgP = 4,9 (20 °С).
Растворимость в воде (мг/дм3, 25 °С): < 0,05.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 20 °С) в ацетоне и диметилформамиде - 100, ацетофеноне и циклогексаноне - 50, изофороне - 35, ксилоле - 20, циклогексане - 2, керосине - менее 10.
На воздухе стабилен вплоть до температуры плавления. При 22 °С очень стабилен в водных растворах при рН 5, 7 и 9. Достаточно устойчив к фотолизу.
Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная токсичность LD50 более 2000 мг/кг (крысы), более 1000 мг/кг (мыши), более 5000 мг/кг (кролики). Ингаляционная токсичность для крыс LC50 более 2,34 мг/дм3 (период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
Область применения: гербицид, используемый для постобработки осенних посевов с целью контроля трав и широколистных сорняков. Обычно применяется в комбинации с изопротуроном или другими гербицидами хлебных злаков. Норма расхода 125 - 250 г/га.
В России для дифлюфеникана установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,6 мг/м3; ОДУ в воде водоемов - 0,15 мг/дм3; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,05 мг/кг.
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
Метрологические параметры
Диапазон измерений, массовая концентрация |
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr, % |
Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время», «оператор» в одной лаборатории), σRл, % |
Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR, % |
Показатель точности* (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95) ±δ, % |
Изопротурон |
||||
Вода, мг/дм3 |
|
|
|
|
от 0,001 до 0,01 вкл. |
7 |
8 |
10 |
19 |
Почва, мг/кг |
|
|
|
|
от 0,01 до 0,1 вкл. |
9 |
11 |
13 |
25 |
Зерно, мг/кг |
|
|
|
|
от 0,005 до 0,05 вкл. |
8 |
9 |
11 |
22 |
св. 0,05 до 0,1 вкл. |
6,5 |
7 |
9 |
18 |
Солома, мг/кг |
|
|
|
|
от 0,02 до 0,1 вкл. |
6,5 |
7 |
9 |
18 |
св. 0,1 до 0,2 вкл. |
5 |
6 |
7 |
14 |
Дифлюфеникан |
||||
Вода, мг/дм3 |
|
|
|
|
от 0,001 до 0,01 вкл. |
6 |
7 |
8 |
16 |
Почва, мг/кг |
|
|
|
|
от 0,01 до 0,1 вкл. |
7,5 |
9 |
11 |
21 |
Зерно, мг/кг |
|
|
|
|
от 0,01 до 0,1 вкл. |
7,5 |
9 |
11 |
21 |
Солома, мг/кг |
|
|
|
|
от 0,02 до 0,1 вкл. |
7,2 |
8 |
10 |
20 |
св. 0,1 до 0,2 вкл. |
6 |
7 |
8 |
16 |
*) соответствует расширенной неопределенности Uотн. при коэффициенте охвата k = 2 |
Полнота извлечения изопротурона и дифлюфеникана,
стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата
для n = 20, Р = 0,95
Аналит |
Анализируемый объект |
Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) |
Среднее значение определения, % |
Стандартное отклонение, S |
Доверительный интервал среднего результата, ± % |
Изопротурон |
Вода |
0,001 |
0,001 - 0,01 |
91,8 |
8,2 |
3,8 |
Почва |
0,01 |
0,01 - 0,1 |
89,2 |
13,0 |
6,1 |
|
Зерно |
0,005 |
0,005 - 0,1 |
90,5 |
10,5 |
4,9 |
|
Солома |
0,02 |
0,02 - 0,2 |
95,9 |
6,8 |
3,2 |
|
Дифлюфеникан |
Вода |
0,001 |
0,001 - 0,01 |
89,1 |
2,3 |
1,1 |
Почва |
0,01 |
0,01 - 0,1 |
84,9 |
9,9 |
4,7 |
|
Зерно |
0,01 |
0,01 - 0,1 |
88,5 |
9,4 |
4,4 |
|
Солома |
0,02 |
0,02 - 0,2 |
82,1 |
8,3 |
3,9 |
Методика основана на определении изопротурона и дифлюфеникана методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после их экстракции из образцов смесью ацетона с водой и очистки экстракта методом последовательной твердофазной экстракции на патронах Диапак С16 и Силикагель 60.
Идентификация изопротурона и дифлуфеникана проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |
|
Весы аналитические BЛA-200 |
|
Весы технические ВЛКТ-500 |
|
Колбы мерные на 10, 100, 1000 см3 |
|
Микродозаторы Ленпипет переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3, вид климатического исполнения УХЛЧ.2 |
|
Пипетки градуированные |
|
Цилиндры мерные на 50, 100, 500 и 1000 см3 |
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Ацетон, чда |
|
Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ» или хч |
ТУ 6-09-3534-87 |
Вода дистиллированная |
ГОСТ 6709-79 |
Гексан, хч |
ТУ 2631-003-05807999-989 |
Дифлюфеникан с содержанием основного вещества 99,5 % (Sigma-Aldrich) |
|
Изопротурон с содержанием основного вещества 99,0 % (Sigma-Aldrich) |
|
Этилацетат, хч |
Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100×2,1) мм, 1,7 мкм (Waters) |
|
Бидистиллятор |
|
Баня ультразвуковая «Сапфир», УЗВ-1,3 |
|
Вакуумный манипулятор для работы с патронами для твердофазной экстракции (Waters, кат. № WAT 200677) |
|
Воронка Бюхнера |
ГОСТ 0147 |
Воронки лабораторные В-75-110 |
|
Колба Бунзена |
ГОСТ 5614-75 |
Колбы круглодонные на шлифах КШ50 14/23 ТС |
ГОСТ 10384-72 |
Колбы круглодонные на шлифах КШ250 29/32 ТС |
ГОСТ 10384-72 |
Колбы плоскодонные на шлифах КШ 250 29/32 ТС |
|
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ |
ТУ 1-01-0593-79 |
Патроны Диапак С16 (БиоХимМак), 0,4 г |
ТУ 4215-002-05451931-94 |
Патроны, заполненные силикагелем 60 (Merck), 0,5 г |
|
Ротационный вакуумный испаритель BuchI R 205 (Швейцария) |
|
Фильтры бумажные «красная лента» |
ТУ 6.091678-86 |
Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.
4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7.1. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Acquity ВЕН С18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.
7.2. Приготовление растворов
7.2.1. 0,005 Мраствор ортофосфорной кислоты: (0,5 ± 0,01) г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в биднстиллированной воде и доводят объем до метки.
7.2.2. Для приготовления подвижной фазы 1 смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60 по объему, используя мерные цилиндры.
7.2.3. Для приготовления подвижной фазы 2 смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35 по объему, используя мерные цилиндры.
7.2.4. Приготовление элюентов для твердофазной экстракции.
Элюент 1. В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 5 см3 этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 2. В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 20 см3 этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 3. В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
7.3. Приготовление основных и градуировочных растворов
7.3.1. Основные растворы 1 и 2 с концентрацией 0,5 мг/см3: точные навески изопротурона и дифлуфеникана (50 ± 0,5) мг помещают в мерные колбы вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объемы до метки тем же растворителем.
Градуировочные растворы изопротурона и дифлуфеникана с концентрациями 0,05, 0,1, 0,2, 0,5, 0,75 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления основных растворов 1 и 2 по объему, используя соответственно подвижные фазы 1 и 2.
7.3.2. Раствор № 1 с концентрацией изопротурона 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см основного раствора 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.3. Раствор № 2 с концентрацией изопротурона 0,75 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 7,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.4. Раствор № 3 с концентрацией изопротурона 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.5. Раствор № 4 с концентрацией изопротурона 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.6. Раствор № 5 с концентрацией изопротурона 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.7. Раствор № 6 с концентрацией изопротурона 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 0,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.8. Раствор № 7 с концентрацией дифлюфеникана 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора 2 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.9. Раствор № 8 с концентрацией дифлюфеникана 0,75 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 7,5 см3 раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.10. Раствор № 9 с концентрацией дифлюфеникана 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5,0 см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.11. Раствор № 10 с концентрацией дифлюфеникана 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 2,0 см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.12. Раствор № 11 с концентрацией дифлюфеникана 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1,0 см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
Основные растворы 1 и 2 можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
При изучении полноты определения изопротурона и дифлуфеникана в почве, зерне и соломе зерновых используют ацетонитрильные растворы веществ. Растворы с концентрациями аналитов 1,0 и 10,0 мкг/см3 готовят из основных растворов 1 и 2 с концентрациями изопротурона и дифлюфеникана 0,5 мг/см3 методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
7.4. Построение градуировочного графика
Для установления градуировочных характеристик (площадь пика - концентрация изопротурона или дифлуфеникана в растворах) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочных растворах.
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочные коэффициенты (K) в уравнении линейной регрессии:
C = KS, где
S - площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
С - аттестованное значение массовой концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочном растворе в мг/см3,
СК - результат контрольного измерения массовой концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочном растворе в мг/см3,
λконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (λконтр. = 10 % при Р = 0,95).
7.5. Подготовка патронов для твердофазной экстракции
Диапак С16: Непосредственно перед употреблением в два последовательно соединенных патрона вносят сначала 1 см3 ацетонитрила, а затем 1 см3 воды.
Патрон Силикагель 60: Непосредственно перед употреблением через патрон пропускают 2 см3 гексана.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
9.1. Определение изопротурона и дифлюфеникана в воде водоемов
Две аликвоты воды по 50 см3 пропускают отдельно через патроны Диапак С16. Фильтраты отбрасывают. Через каждый патрон пропускают 3 см3 ацетонитрила. Элюаты 1 и 2 собирают по отдельности и упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток 1 растворяют в 0,5 см3 подвижной фазы 1, а сухой остаток 2 - в 0,5 см подвижной фазы 2. Первый раствор (10 мм3) вводят в жидкостный хроматограф для определения изопротурона в соответствующих условиях хроматографирования (см. п. 9.3). Второй раствор хроматографируют в условиях соответствующих анализу дифлюфеникана.
9.2. Определение изопротурона и дифлюфеникана в почве, зерне и соломе зерновых
По (20 ± 0,1) г почвы или измельченного на лабораторной мельнице зерна или (5 ± 0,1) г нарезанной ножом соломы помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, прибавляют 10 см3 воды и, спустя 2 - 3 мин, 40 см3 ацетона. Экстрагируют на ультразвуковой бане в течение 10 мин. Массу фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» на воронке Бюхнера. Экстракцию повторяют, используя в качестве экстрагента 50 см3 смеси ацетона и воды в соотношении 4:1. Объединенный экстракт упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона. Водный остаток (около 20 см3) фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» и пропускают через два, соединенных последовательно и откон-диционированных по п. 7.5 патрона Диапак С16. Фильтрат отбрасывают. Изопротурон и дифлюфеникан элюируют 4 см3 ацетона. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С, сухой остаток растворяют в 2,0 см3 гексана и количественно переносят в патрон Силикагель 60, откондиционированный гексаном по п. 7.5. Фильтрат отбрасывают. Патрон промывают двумя порциями по 2 см3 гексана и 2 см3 элюента 1. Промывки отбрасывают. Дифлюфеникан элюируют 5 см3 элюента 2 и собирают элюат 1 в отдельную колбу. Патрон промывают 2 см3 элюента 3. Промывку отбрасывают. Изопротурон элюируют 5 см3 элюента 3, собирая отдельно элюат 2. Элюаты 1 и 2 упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С. Сухие остатки изопротурона в зерне и соломе растворяют в 1 см3 подвижной фазы 1, а в почве - в 2 см3 подвижной фазы 1. Сухие остатки дифлюфеникана в почве и зерне растворяют в 2 см3 подвижной фазы 2, а остаток дифлюфеникана в соломе в 1 см3 подвижной фазы 2.
9.3. Условия хроматографирования
Ультраэффективный жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2,1×100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 ± 1) °С.
Изопротурон: Подвижная фаза 1: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 240 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания изопротурона (4,2 ± 0,1) мин.
Дифлюфеникан: Подвижная фаза 2: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 285 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания дифлюфеникана (4,7 ± 0,1) мин.
Линейные диапазоны детектирования изопротурона и дифлюфеникана сохраняются в интервале концентраций 0,01 - 1,0 мкг/см3.
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание изопротурона и дифлюфеникана в воде (X, мг/дм3), в почве, зерне и соломе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
где Sx - площадь пика изопротурона или дифлюфеникана на хроматограмме испытуемого образца, AU∙сек (AU);
K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
Р - навеска анализируемого образца, г; (воды, см3);
f - полнота извлечения изопротурона или дифлуфеникана, приведенная в табл. 2, (%).
Содержание остаточных количеств изопротурона или дифлюфеникана в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор изопротурона или дифлюфеникана с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой 1 или 2, соответственно.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
где X1 и Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r - значение предела повторяемости (r = 2,8σr).
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде: (Х ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг.
где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание аналита менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
содержание изопротурона в зерне менее 0,005 мг/кг, в почве - менее 0,01 мг/кг, дифлюфеникана в пробах почвы и зерна менее 0,01 мг/кг, содержание изопротурона и дифлюфеникана в пробах воды менее 0,001 мг/дм3, а в пробах соломы менее 0,02 мг/кг*
*0,005 мг/кг - предел обнаружения изопротурона в зерне, 0,01 мг/кг - предел обнаружения дифлюфеникана в пробах почвы и зерна, изопротурона в пробах почвы; 0,001 мг/дм3 - предел обнаружения изопротурона и дифлюфеникана в воде, а 0,02 мг/кг - предел обнаружения в пробах соломы.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:
Cд = Δл,x + Δл,x' где
±Δл,x (±Δл,x') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:
Δл = ±0,84∙Δ, где
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры Kк рассчитывают по формуле:
Kк = Х' - Х - Сд, где
Х', Х, Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Kк) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
|Kк| ≤ K |
(2) |
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
|
(3) |
где Х1 и Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Долженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Луговкина Н.В., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург).
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.679) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10036).