Федеральная
служба по надзору в сфере защиты прав потребителей
и благополучия человека
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение
остаточных
количеств химических веществ
в объектах окружающей среды, атмосферном
воздухе, воздухе рабочей зоны
и сельскохозяйственной продукции
Сборник
методических указаний
МУК
4.1.1960, 4.1.1961, 4.1.1963
- 4.1.1980-05
1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром «Токсикология пестицидов и агрохимикатов» (Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Калинин А.В.).
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-гигиеническому нормированию Минздрава России (протокол № 1 от 31 марта 2005 г.).
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.
4. Введены в действие с 1 июля 2005 г.
5. Введены впервые.
Содержание
УТВЕРЖДАЮ |
Руководитель Федеральной службы |
по надзору в сфере защиты прав |
потребителей и благополучия человека, |
Главный государственный санитарный |
врач Российской Федерации |
Г.Г. Онищенко |
21 апреля 2005 г. |
Дата введения: 1 июля 2005 г. |
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств
метрибузина в воде, почве, томатах и картофеле
методом газожидкостной хроматографии
Методические
указания
МУК 4.1.1972-05
Действующее вещество: метрибузин.
4-амино-6-трет-бутил-4,5-дигидро-3-метилтио-1,2,4-триазин-5-он (ИЮПАК).
4-амино-6-(1,1-диметилэтил)-3-(метилтио)-1,2,4-триазин-5(4Н)-он (С.А.)
Эмпирическая формула: C8H14N4OS.
Молекулярная масса: 214,3.
Белое кристаллическое вещество со слабым характерным запахом.
Температура плавления: 126,2 °С.
Давление паров при 20 °С: 0,058 мПа.
Растворимость (г/л) при 20 °С: вода - 1,05, гексан - 1,0, толуол - 87, этанол - 190, дихлорметан - 340, метанол - 450, ацетон - 820, этилацетат - более 600.
Стабильность к гидролизу при 20 °С: устойчив в присутствии слабых кислот и щелочей.
В присутствии света в водных фотолитических условиях метрибузин быстро деградирует с периодом полураспада менее 24 ч.
В биологически активных почвах в аэробных условиях быстро разрушается, главным образом за счет деятельности микроорганизмов.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - 2000 мг/кг, для мышей - 700 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 20000 мг/кг. Метрибузин не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика.
Нетоксичен для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.
Гигиенические нормативы: ПДК в почве - 0,2 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм3, в воде рыбохозяйственных водоемов присутствие гербицида не допускается; МДУ в томатах и картофеле - 0,25 мг/кг.
Область применения препарата
Системный гербицид избирательного действия из класса триазинонов. Эффективен против однолетних двудольных и злаковых сорных растений в посевах сои, томатов, люцерны, кукурузы, зерновых злаков и посадках картофеля.
Методика основана на газохроматографическом определении метрибузина на неподвижной фазе OV-17 с использованием термоионного детектора (ТИД) после экстракции его из воды дихлорметаном, из почвы и растительного материала водным ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании картофеля и томатов.
Таблица
Метрологические параметры метода
Анализируемый объект |
Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 |
|||||
предел обнаружения мг/дм3, мг/кг |
диапазон определяемых концентраций мг/дм3, мг/кг |
среднее значение определения, % |
стандартное отклонение S, % |
относительное отклонение, DS, % |
доверительный интервал среднего, % |
|
Вода |
0,001 |
0,001 - 0,01 |
92,1 |
2,6 |
1,2 |
±2,2 |
Почва |
0,1 |
0,1 - 1,0 |
88,1 |
5,2 |
2,3 |
±4,8 |
Томаты |
0,1 |
0,1 - 1,0 |
89,5 |
4,5 |
2,0 |
±4,2 |
Картофель |
0,1 |
0,1 - 1,0 |
90,1 |
4,2 |
1,9 |
±3,9 |
Метрибузин, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,7 % (Байер, Германия) |
|
Ацетон, чда |
|
Вода дистиллированная |
ГОСТ 7602-72 |
Гексан, ч |
ТУ 6-09-3375-78 |
Дихлорметан |
ГОСТ 19433-88 |
Калий углекислый, хч |
|
Калия перманганат, хч |
|
Кальция хлорид, хч |
ГОСТ 4161-77 |
Кислота серная, хч |
|
Натрия гидроксид, хч |
|
Натрия сульфат безводный, хч |
|
Натрий двууглекислый, хч |
|
Натрия хлорид, хч |
|
Этилацетат |
|
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (7:3, по объему) |
|
Азот газообразный, осч |
ГОСТ 0203-74 |
Водород, получаемый из генератора водорода |
ГОСТ 3023-80 |
Воздух из баллона |
|
Силикагель (0,063 - 0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности |
|
Стекловата |
|
Целит 535 (2 - 15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный |
|
Фильтры бумажные, «синяя лента» |
ТУ 6-09-1678 |
Хроматограф газовый «Кристалл 2000 М» с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 × 10-14 г/с или аналогичный |
|
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1000×3 мм, неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм) |
|
Колонка капиллярная для ГЖХ НР-5, длина 12,5 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, неподвижная фаза SE-52, фирма Hewlett Packard, США или аналогичная |
|
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф |
ТУ 64-1-2850 |
Аппарат для встряхивания АВУ |
ТУ 64-1-1081-83 |
Весы аналитические типа ВЛР-200 |
ГОСТ 19401-74 |
Водоструйный насос |
|
Гомогенизатор |
МРТУ 42-1505-63 |
или аналогичный |
|
Прибор для перегонки при атмосферном давлении |
|
Ротационный испаритель тип ИР-1М |
ТУ 25-11-917-76 |
Сито с отверстиями диаметром 1 мм |
|
Баня водяная |
ТУ 46-22-603-75 |
Воронка Бюхнера |
ГОСТ 0147-73 |
Воронки делительные, вместимостью 100 и 250 мл |
|
Воронки для фильтрования, стеклянные |
ГОСТ 8613-75 |
Колба Бунзена |
ГОСТ 5614-75 |
Колбы конические с притертыми пробками, вместимостью 250 мл |
|
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10 и 100 мл |
ГОСТ 9737-70 |
Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 100 мл |
|
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл |
|
Пробирки градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл |
|
Стаканы стеклянные емкостью 400 мл |
ГОСТ 6236-72 |
Цилиндры мерные, вместимостью 50, 100 и 250 мл |
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы почвы, картофеля и томатов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике; пробы клубней и плодов замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 3 дней, при температуре -18 °С в течение месяца. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а клубни и плоды измельчают.
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2,5 %-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO4 и 2 г K2CO3).
Этилацетат промывают равным объемом 5 %-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 ч.
Готовую насадку (3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 - 10 ч.
Капиллярную колонку с фазой НР-5 устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 280 °С в течение 8 - 10 ч.
Основной стандартный раствор метрибузина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,7 % д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метрибузина соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.
При изучении полноты открывания метрибузина в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора метрибузина с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ×с от концентрации крезоксим-метила в растворе в мкг/мл.
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 2 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) и 10 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в с, после чего она готова к работе.
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора метрибузина с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание метрибузина по п. 2.7.1.
Фракции, содержащие метрибузин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание метрибузина в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
Примечание. Профиль вымывания метрибузина может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют 30 мл дихлорметана и встряхивают 1 мин. Нижний органический слой отделяют, собирая в коническую колбу емкостью 100 мл. Водный слой экстрагируют дихлорметаном еще дважды порциями по 30 мл. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С. Остаток растворяют в 1 мл этилацетата и анализируют на содержание метрибузина по п. 2.7.1.
2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему) и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.3 Томаты, картофель. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему) и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин. К суспензии добавляют 2 г целита и содержимое фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.
Аликвоты почвенного (из п. 2.6.1.2) и растительного (из п. 2.6.1.3) экстрактов упаривают до водной фазы на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл дихлорметана. Смесь встряхивают в течение 1 минуты и после разделения слоев отделяют органическую фазу, пропуская ее через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Экстракцию водной фазы дихлорметаном повторяют еще два раза (по 20 мл).
Объединенный дихлорметановый экстракт, содержащий метрибузин, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов растительного материала и почвы, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Метрибузин элюируют 20 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухие остатки экстрактов почвы и растительного материала растворяют в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание метрибузина по п. 2.7.1.
Хроматограф газовый «Кристалл 2000 М» с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 × 10-14 г/с или аналогичный.
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1000×3 мм; неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).
Температура детектора 320 °С, инжектора 230 °С, термостата колонки 215 °С.
Скорость потока газа-носителя (азота) - 35 мл/мин.
Расход водорода - 11,5 мл/мин.
Расход воздуха - 200 мл/мин.
Объем вводимой пробы - 2 мкл.
Время удерживания метрибузина - 2 мин 20 с.
Предел детектирования - 0,2 нг.
Линейный диапазон детектирования - 0,2 - 2,0 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика метрибузина.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
Хроматограф газовый «Кристалл 2000 М» с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 × 10-14 г/с или аналогичный.
Колонка капиллярная кварцевая НР-5, 12,5 м×0,32 мм×0,25 мкм (SE-52).
Температура термостата испарителя - 280 °С, детектора - 320 °С, термостата колонки по следующей программе: 100 °С - 1 мин; 25°/мин до 200 °С; 5°/мин до 230 °С; 30°/мин до 275 °С; выдержка - 3 мин.
Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22 мл/мин.
Деление потока: 1:1.
Абсолютное время удерживания метрибузина: 5 мин 15 с.
Объем вводимой пробы - 1 мкл.
Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,5 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика метрибузина.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
Содержание метрибузина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
Х - содержание метрибузина в пробе, мг/кг или мг/дм3;
H1 - площадь пика образца, мВ×с;
H0 - площадь пика стандарта, мВ×с;
А - концентрация стандартного раствора метрибузина, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
m - объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для воды - 100 мл; для почвы и растительного материала - 5 г).
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
Талалакина Т.Н., Дубовая Л.В., Макеев А.М.,
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.