УТВЕРЖДАЮ
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра
здравоохранения Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
24 июня 2003 г.
Дата введения - 30 июня 2003 г.
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств концентрации биспирибака-натрия в почве, воде, зерне и зеленой массе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания
МУК 4.1.1450-03
1. Вводная часть
Фирма-производитель: «Кумиаи Кемикал Индастри Ко, ЛТД» (Япония).
Торговое название: KIH-2023.
Название действующего вещества по ИСО: Биспирибак-натрия.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 2,6-бис[(4,6-диметоксипиримидин-2-ил)окси]бензоат натрия.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: C19H17N4NaО8.
Молекулярная масса: 452,36.
Удельная масса при 20 °C: 0,0795.
Агрегатное состояние: порошок.
Цвет: белый.
Температура плавления: 219,5 °C.
Летучесть (давление пара) при 25 °C: 5,04´10-6 мПа.
Растворимость в воде при 25 °C: 73,3 г/л.
Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в метаноле, слабо растворим в ацетоне, еще слабее в дихлорметане, этилацетате и н-гексане.
Коэффициент распределения октанол/вода: - 1,03 (23 °C).
В России установлены следующие гигиенические нормативы:
Препарат проходит предрегистрационные испытания. Гигиенические нормативы применения биспирибак-натрия в России не установлены.
Фирмой предложен ПДК (в воде) = 0,001 ppm.
Период полуразложения в почве 31,1 - 133 сут. (в зависимости от почвенно-климатических условий).
Область применения препарата
KIH-2023 - послевсходовый гербицид с широким спектром применения. KIH-2023 обладает превосходной эффективностью при нанесении на листву по отношению к злаковым травам, осоковым и многим широколистным видам.
KIH-2023 ингибирует активность фермента, ацетолактатсинтазы, блокируя биосинтез алифатических аминокислот с разветвленной углеродной цепью. Гербицид уничтожает чувствительные растения путем замедления их роста с последующим хлорозом, некрозом и гибелью растений. KIH-2023 обладает селективностью по отношению к рису и эффективно уничтожает куриное просо.
Этот препарат проходит предрегистрационные испытания на заливном рисе с нормой расхода менее 150 г/га препаративной формы.
2. Методика определения остаточных количеств биспирибак-натрия в почве, воде, зерне и зеленой массе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на определении биспирибак-натрия с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии после его экстракции из воды, растительного материала и почвы водным раствором ацетонитрила. В дальнейшем проводят переэкстракцию с помощью метиленхлорида и очистку экстракта смесью гексанэтилацетат на концентрирующем патроне «Диапак-Силикагель».
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода приведена в табл.
2.1.3. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен и может применяться для анализа биспирибак-натрия в почве, воде и растительном материале риса, обрабатываемых другими пестицидами.
Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95, n = 24)
|
Анализируемый объект |
*Предел обнаружения, мг/кг (мг/л) |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л) |
Среднее значение определения, % |
Доверительный интервал среднего результата, % |
Стандартное отклонение, S, % |
|
|
Вода |
питьевая |
0,001 |
0,001 - 0,01 |
95,7 |
10,97 |
± 2,24 |
|
|
открытый водоем (пруд) |
0,001 |
0,001 - 0,01 |
93,7 |
8,36 |
± 1,70 |
|
Почва |
дерново-подзолистая |
0,01 |
0,01 - 0,10 |
84,0 |
9,64 |
± 1,96 |
|
|
чернозем выщелоченный |
0,01 |
0,01 - 0,10 |
80,3 |
9,61 |
± 1,96 |
|
Растения |
зерно риса |
0,01 |
0,01 - 0,10 |
82,3 |
13,02 |
± 2,65 |
|
|
солома риса |
0,01 |
0,01 - 0,10 |
87,7 |
8,56 |
± 1,74 |
|
* Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 2 нг. |
||||||
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.2.1. Реактивы, материалы и растворы
KIH-2023 с содержанием 99,8 % д.в., аналитический стандарт № SQ-804-2
Деионизированная вода ГОСТ 7602-72
Метанол LiChrosolv, gradient grad N6007, Merck
96 % уксусная кислота, ледяная ГОСТ 61-75
Кислота хлороводородная, 1 н раствор, хч ГОСТ 3118-77
Ацетонитрил, Merck (для ВЭЖХ)
Ацетонитрил, ч, Харьков МРТУ 6-09-6448-69
Н-гексан, ч, Новочеркасск ТУ-6-09-4521-77
Натрий сернокислый безводный, ч ГОСТ 4166-76
Метиленхлорид, хч ТУ 6-09-06-856-77
Натрий хлористый ТУ-6-09-1252-76
Калий фосфорнокислый двузамещенный, 12-водный, art.6346, Merck
Калий фосфорнокислый однозамещенный, art. 6579, Merck
Бумажные фильтры «синяя лента» диаметром 11,0 см, обеззоленные
ТУ 6-09-1678-86
Универсальная индикаторная бумага, Merck
2.2.2. Посуда и оборудование
Высокоэффективный жидкостный хроматограф
«Altex» с ультрафиолетовым детектором
«Spectroflow 757» или другой аналогичного типа
Стальная колонка для ВЭЖХ Ultrasphere ODS (4,6´250 мм), 5 мкм
Самописец, модель ВД40 Kipp & Zonen или другой аналогичного типа
Баня водяная СН-9230 FLAWIL/SG, Buchi или другая аналогичного типа
Весы аналитические FX-40 А &D Company или другие аналогичного типа
Весы лабораторные технические ВЛТК-500 или другие аналогичного типа
Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73
или другой аналогичного типа
Ротационный испаритель, модель Rotavapor R110, Buchi или другой аналогичного типа
Иономер модель И-135, ТЗАП
Сито с диаметром отверстий 1 мм
Воронки делительные на 250 мл ГОСТ 10054-75
Колбы конические плоскодонные на 250 мл и 500 мл, КШП-100, КШП-250
ГОСТ 10394-72
Колбы мерные на 50 и 100 мл ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные на 25 и 100 м ГОСТ 1770-74Е
Концентраторы грушевидные (конические) НШ29 КГУ-100-14/19, ТС
ГОСТ 10394-72
Концентрирующие патроны «ДИАПАК-Силикагель» (черный - черный) АО Био ХимМак отд. Хроматографии ТУ 4215-002-05451931-94
Микрошприц Hamilton company на 50 и 100 мкл или другой аналогичного типа
Пипетка цифровая на 5,0 мл Aldrich Chemical company, Wheaton или другая аналогичного типа
Стаканы химические, стеклянные на 100 мл ГОСТ 6236-72
Стеклянные палочки
Скальпель или нож
2.3. Подготовка к определению
2.3.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В колбу на 1000 мл вносят 700 мл бидистиллированной воды, добавляют 300 мл ацетонитрила и 1 мл уксусной кислоты. Полученный раствор ацетонитрил - вода - уксусная кислота (30:70:1 по объему) фильтруют и дегазируют.
2.3.2. Кондиционирование колонки
Промыть колонку для ВЭЖХ системой ацетонитрил - вода - уксусная кислота (30:70:1 по объему) в течение 60 мин при скорости подачи подвижной фазы 1,0 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (10 - 20 мин).
2.3.3. Активизация концентрирующего патрона «Диапак-Силикагель»
Патрон «Диапак-Силикагель» (черный - черный) промывают 10 мл метанола с помощью шприца с разъемом типа Люер.
Примечание. Профиль вымывания может меняться при использовании новой партии концентрирующих патронов и растворителей.
2.3.4. Приготовление буферного раствора (1/20 М двузамещенного фосфорнокислого калия и 1/20 М однозамещенного фосфорнокислого калия)
17,9 г К2НРO4 ´ 12Н2O и 6,9 г КН2РO4 ´ Н2O переносят в мерную колбу на 1000 мл и добавляют 600 - 700 мл бидистиллированной воды. Затем перемешивают до полного растворения внесенного вещества и доводят водой до метки.
2.3.5. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия
В колбу объемом 500 мл переносят 300 мл бидистиллированной воды и добавляют хлористый натрий порциями при тщательном перемешивании до получения насыщенного раствора.
2.3.6. Приготовление стандартных растворов
Взвешивают 0,01 г биспирибак-натрия (содержащего 99,8 % д.в.) в мерной колбе на 100 мл. Навеску растворяют в метаноле и доводят объем до метки метанолом (стандартный раствор № 1, концентрация 100 мкг/мл). Раствор хранится в холодильнике не более 120 суток.
Методом последовательного разбавления подвижной фазой для ВЭЖХ раствора № 1 готовят стандартные растворы KIN-2023 (используются в день проведения анализа) с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/мл, которые могут храниться в холодильнике не более 20 суток.
При изучении полноты открываемости биспирибак-натрия в модельных матрицах используют ацетоновые растворы вещества.
2.4. Построений градуировочного графика
Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 100 мкл рабочего раствора биспирибак-натрия с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/мл. Проводят не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.
По полученным данным строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации биспирибак-натрия в растворе в мкг/мл.
2.5. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утв. 21.08.79 № 2051-79.
Пробы воды в стеклянной или инертной полиэтиленовой таре хранят при температуре 0 - 4 °C в течение не более 7 сут., для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при - 18 °C. Отобранные пробы соломы и зерна риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при температуре 0 - 4 °C. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, солому риса нарезают кусочками 1´1 см, зерно риса измельчают на лабораторной мельнице.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция гербицида из анализируемой пробы
2.6.1.1. Вода.
Образец воды объемом 250 мл фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) в делительную воронку на 500 мл и добавляют 50 мл метиленхлорида, 50 мл буферного раствора (1/20 М двузамещенного фосфорнокислого калия и 1/20 М однозамещенного фосфорнокислого калия), 5 мл раствора хлористого натрия. Встряхивают две минуты. Переносят метиленхлорид из первой во вторую делительную воронку и прибавляют 50 мл буферного раствора (1/20 М двузамещенного фосфорнокислого калия и 1/20 М однозамещенного фосфорнокислого калия), 5 мл раствора хлористого натрия. После встряхивания и разделения смеси, буферные растворы объединяют и подкисляют до pH 1,01 н HСl. К полученному экстракту добавляют 200 мл этилацетата и 5 мл NaCl, встряхивают и фильтруют в колбу на 500 мл через фильтр с безводным сульфатом натрия. Процедуру повторяют дважды со 100 мл этилацетата и 2 мл NaCl. Полученный объем экстракта выпаривают до 1 мл (при 45 °C на роторном испарителе) и переносят на активированный концентрирующий патрон «Диапак-Силикагель». Патрон промывают раствором гексан-этилацетат (5:1) со скоростью 2 капли в секунду. Первые 5 мл элюата отбрасывают, следующие 100 мл собирают в концентратор на 250 мл. Элюат выпаривают на вакуумном роторном испарителе при температуре не выше 40 °C досуха. Сухой остаток растворяют в 4 мл 30 %-го водного ацетонитрила (п. 2.3.1).
Анализируют биспирибак-натрий на высокоэффективном жидкостном хроматографе (п. 2.7).
2.6.1.2. Почва.
Навеску почвы 50 г (в пересчете на воздушно-сухую почву) помещают в коническую колбу на 500 мл, приливают 100 мл смеси 80 %-го водного ацетонитрила. Биспирибак-натрий экстрагируют при перемешивании в течение 1 ч. Экстракт фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) в колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют со 100 мл растворителя в течение 20 мин. Экстракты объединяют и при температуре 45 °C, используя роторный вакуумный испаритель, выпаривают до 100 мл. Остаток экстракта переносят в делительную воронку на 500 мл и добавляют 100 мл метиленхлорида, 100 мл буферного раствора (1/20 М двузамещенного фосфорнокислого калия и 1/20 М однозамещенного фосфорнокислого калия), 5 мл раствора хлористого натрия. Встряхивают две минуты. Переносят метиленхлорид из первой во вторую делительную воронку и прибавляют 50 мл буферного раствора, 5 мл раствора хлористого натрия. После встряхивания и разделения смеси, буферные растворы объединяют и подкисляют до pH 1,01 н HCl. К полученному экстракту добавляют 100 мл этилацетата и 5 мл NaCl, встряхивают и фильтруют через фильтр с безводным сульфатом натрия в колбу на 500 мл. Процедуру повторяют дважды. Полученный объем экстракта выпаривают до 1 мл (при 45 °C на роторном испарителе) и переносят на активированный концентрирующий патрон «Диапак-Силикагель». Далее процедура анализа биспирибак-натрия в почве аналогична описанной выше п. 2.6.1.1.
2.6.1.3. Зерно и солома риса.
Измельченную растительную пробу (зерно - 25 г, солома - 15 г) помещают в коническую колбу на 500 мл и приливают 100 мл смеси 80 %-го водного ацетонитрила. Биспирибак-натрий экстрагируют при перемешивании в течение 40 мин. Экстракт фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) в колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют со 100 мл растворителя в течение 20 мин. Экстракты объединяют и при температуре 45 °C, используя роторный вакуумный испаритель, выпаривают до 100 мл. Остаток экстракта переносят в делительную воронку на 500 мл и добавляют 50 мл метиленхлорида, 50 мл буферного раствора (1/20 М двузамещенного фосфорнокислого калия и 1/20 М однозамещенного фосфорнокислого калия), 5 мл раствора хлористого натрия. Встряхивают две минуты. Переносят метиленхлорид из первой во вторую делительную воронку и прибавляют 50 мл буферного раствора, 5 мл раствора хлористого натрия. После встряхивания и разделения смеси, буферные растворы объединяют и подкисляют до pH 1,01 н HCl. К полученному экстракту добавляют 100 мл этилацетата и 5 мл NaCl, встряхивают и фильтруют через фильтр с безводным сульфатом натрия в колбу на 500 мл. Процедуру повторяют дважды. Полученный объем экстракта упаривают до 1 мл (при 45 °C на вакуумном роторном испарителе) и переносят на активированный концентрирующий патрон «Диапак-Силикагель». Далее процедура анализа биспирибак-натрия в соломе и зерне риса аналогична описанной выше п. 2.6.1.1.
2.7. Условия хроматографирования
Стальная колонка для ВЭЖХ Ultrasphere ODS, с внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 250 мм, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - уксусная кислота (30:70:1 по объему).
Скорость потока элюента - 1 мл/мин.
Тип детектора - ультрафиолетовый «Spectroflow 757»
Объем вводимой пробы - 100 мкл.
Время удерживания - 21 мин.
Линейный диапазон детектирования - 2 - 20 нг.
Самописец, модель ВД40 Kipp & Zonen.
Скорость движения ленты самописца - 1 мм/мин.
Рабочая длина волны - 246 нм.
Чувствительность - 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,0 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
2.8. Обработка результатов анализов
Содержание биспирибак-натрия в пробах воды, почвы, зерне и зеленой массе риса рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
где
Х - содержание вещества в пробе, мг/кг;
Н1, Н0 - высота пика образца и стандарта соответственно, мм;
А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
т - масса или объем анализируемого образца, г или мл;
Р - содержание биспирибак-натрия в аналитическом стандарте, мкг/мл.
3. Требования к технике безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами и электронагревательными приборами.
4. Разработчики
Ю.Я. Спиридонов, Г.Е. Ларина.
143050, Московская обл., Одинцовский р-он, п/о Большие Вяземы, ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии Россельхозакадемии, отдел гербологии.
Телефон \Факс: (096) 33-4-11-07.
E-mail; galina_larina@vniif.rosmail.com.
СОДЕРЖАНИЕ