Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации,
Первый заместитель Министра
здравоохранения Российской Федерации
Г.Г. Онищенко
29 июня 2003 г.
Дата введения: с момента утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение
массовых концентраций (+ -)-2,3-дигидро-3-
метил-9-фтор-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-7Н-
пиридо[1,2,3-dе]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты
(офлоксацина) в воздухе рабочей зоны методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания
МУК 4.1.1626-03
1. Область применения
Настоящие методические указания устанавливают количественный хроматографический анализ воздуха рабочей зоны на содержание (+-)-2,3-дигидро-3-метил-9-фтор-10-(4-метилпиперазин-1-ил)-7-оксо-7Н-пиридо[1,2,3-de]-1,4-бензоксазин-6-карбоновой кислоты (офлоксацина) в диапазоне концентраций от 0,25 до 5,00 мг/м3.
2. Характеристика вещества
2.1. Структурная формула
2.2. Эмпирическая формула C18H20FN3O4.
2.3. Молекулярная масса 361,4.
2.4. Регистрационный номер CAS 82419-36-1.
2.5. Физико-химические свойства.
Офлоксацин - антибактериальный препарат широкого спектра действия, кристаллический порошок слегка желтоватого цвета, Тпл. 260 - 280 °С, малорастворим в воде и в этиловом спирте, растворим в органических растворителях, растворим в смеси ацетонитрила и воды (элюенте).
Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.
2.6. Токсикологическая характеристика.
Офлоксацин обладает антимикробным действием, вызывает нарушение микрофлоры, обладает фотосенсибилизирующим действием.
Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны 0,5 мг/м3. Класс опасности - второй.
3. Погрешность измерений
Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций офлоксацина с погрешностью не более ± 16 % при доверительной вероятности 0,95.
4. Метод измерений
Измерения массовых концентраций офлоксацина основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора при длине волны 286 нм.
Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.
Нижний предел измерения содержания офлоксацина в хроматографируемом объеме раствора 0,010 мкг.
Нижний предел измерения концентрации офлоксацина в воздухе 0,25 мг/м3 (при отборе 200 дм3 воздуха).
Определению не мешают сопутствующие вещества (целлюлоза микрокристаллическая, титана диоксид, поливинилпирролидон низкомолекулярный, магний стеариново-кислый, оксипропилцеллюлоза).
5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы
5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
|
Хроматограф жидкостный микроколоночный «Милихром» со спектрофотометрическим детектором |
|
|
Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50´2 мм, заполненная сорбентом Сепарон С18, фракция 5 мкм |
|
|
Пробоотборное устройство ПУ-3Э |
ТУ 4215-000-11696625-95 |
|
Весы аналитические ВЛА-200 |
|
|
Фильтродержатель |
ТУ 95.72.05-77 |
|
Устройство для фильтрации жидкостей НПФ «Биохром» |
|
|
Колбы мерные, вместимостью 500, 50 и 25 см3 |
|
|
Пипетки, вместимостью от 1, 2, 5 и 10 см3 |
|
|
Цилиндр мерный со шлифом, вместимостью 100 см3 |
ТУ 25.11.900-73 |
|
Бюксы 50/30 |
|
|
Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 см3 |
|
|
Фильтры АФА-ВП-10 |
ТУ 95-743-80 |
|
Фильтры «Владипор» типа ММФК-1Г |
ТУ 6-05-221-433-79 |
5.2. Реактивы
|
ВФС 42-3556-99 |
|
|
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии |
ТУ 6-09-14-2167-84 |
|
Калий дигидрофосфат, хч |
|
|
ортофосфорная кислота, хч |
ГОСТ 6552-58 |
|
Вода дистиллированная |
Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.
6. Требования безопасности
6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.
6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
7. Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений и обработке результатов допускаются лица с высшим и средним специальным образованием, имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе.
8. Условия измерений
8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не более 80 %.
8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
9. Подготовка к выполнению измерения
9.1. Приготовление растворов
9.1.1. Стандартный раствор № 1 офлоксацина в растворе элюента концентрацией 500 мкг/см3 готовится растворением 25 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 см3.
9.1.2. Стандартный раствор № 2 офлоксацина в растворе элюента концентрацией 100 мкг/см3 готовится разбавлением стандартного раствора № 1. Растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.
9.1.3. Раствор дигидрофосфата калия концентрацией 0,02 М готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 см3 дистиллированной воды в колбе данного объема.
9.1.4. Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 90 см3 0,02 М раствора дигидрофосфата калия и 10 см3 ацетонитрила. Раствор доводят до рН 3 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров «Владипор» и дегазируют под вакуумом.
9.2. Подготовка прибора
Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.
9.3. Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора № 2 согласно табл. 1. Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.
Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:
состав элюента: ацетонитрил-0,02М раствор дигидрофосфата калия 1:9, рН 3;
скорость потока элюента 100 мм3/мин;
объем вводимой пробы 2 мм3;
длина волны спектрофотометрического детектора 286 нм;
время удерживания офлоксацина 5 мин.
Растворы для установления градуировочной характеристики при определении офлоксацина
|
Стандартный раствор офлоксацина № 2, см3 |
Раствор элюента, см3 |
Концентрация вещества, мкг/см3 |
Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг |
|
|
1 |
0 |
20,0 |
0 |
0 |
|
2 |
1,0 |
19,0 |
5 |
0,01 |
|
3 |
2,0 |
18,0 |
10 |
0,02 |
|
4 |
3,0 |
17,0 |
15 |
0,03 |
|
5 |
5,0 |
15,0 |
25 |
0,05 |
|
6 |
10,0 |
10,0 |
50 |
0,1 |
|
7 |
20,0 |
0 |
100 |
0,2 |
Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа.
На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6 растворов разных концентраций и растворителя, проводя не менее 5 параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика от количества компонента в хроматографируемом объеме раствора (мкг). Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.
9.4. Отбор пробы воздуха
Воздух с объемным расходом 20 дм3/мин аспирируют через фильтр АФА ВП-10. Для измерения 1/2 ПДК офлоксацина достаточно отобрать 200 дм3 воздуха. Пробы можно хранить в течение трех суток.
10. Выполнение измерения
Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс с пришлифованной крышкой и приливают пипеткой 5 см3 раствора элюента. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин и сливают его в пробирку. Аналогичным образом проводят повторную экстракцию с фильтра и объединяют растворы. Степень экстракции с фильтра 92 %. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.
11. Расчет концентрации
Концентрацию офлоксацина (С, мг/м3) в воздухе вычисляют по формуле:
где
а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;
б - объем пробы, взятый для хроматографирования, см3;
в - общий объем раствора пробы, см3;
V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, дм3 (см. прилож. 1).
12. Оформление результатов анализа
Результат количественного анализа представляют в виде (С ± D) мг/м3, Р = 0,95, где D - характеристика погрешности, D = 0,16С + 0,02.
13. Контроль погрешности методики
Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля точности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.
Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа офлоксацина
|
Наименование метрологической характеристики |
|||
|
Характеристика погрешности D, мг/м3 (Р = 0,95) |
Норматив оперативного контроля точности К, мг/м3 (Р = 0,90, т = 2) |
Норматив оперативного контроля воспроизводимости D, мг/м3 (P = 0,95, m = 2) |
|
|
От 0,25 до 5,0 |
0,02 + 0,16С |
0,03 + 0,17С |
0,07 + 0,05С |
13.1. Оперативный контроль воспроизводимости
Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата С1 и С2 анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:
При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в неделю.
13.2. Оперативный контроль точности
Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, делают добавку анализируемого компонента δС из раствора, нанося его на фильтр. Величина добавки должна соответствовать 50 - 150 % от содержания компонента в пробе. Результаты анализа С1 без добавки и С2 с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т.д. Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:
14. Нормы затрат времени на анализ
Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 4 ч.
Методические указания разработаны Российским государственным медицинским университетом (Е.Б. Гугля).
Приложение 1
Приведение объема воздуха к стандартным условиям
Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле:
, где
Vt - объем воздуха, отобранного для анализа, дм3;
Р - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);
t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства расчета V20 следует пользоваться таблицей коэффициентов (прилож. 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить Vt на соответствующий коэффициент.
Приложение 2
Коэффициенты для приведения объема воздуха к стандартным условиям
|
Давление Р, кПа/мм рт. ст. |
||||||||||
|
t °C |
97,33/730 |
97,86/734 |
98,4/738 |
98,93/742 |
99,46/746 |
100/750 |
100,53/754 |
101,06/758 |
101,33/760 |
101,86/764 |
|
-30 |
1,1582 |
1,1646 |
1,1709 |
1,1772 |
1,1836 |
1,1899 |
1,1963 |
1,2026 |
1,2058 |
1,2122 |
|
-26 |
1,1393 |
1,1456 |
1,1519 |
1,1581 |
1,1644 |
1,1705 |
1,1768 |
1,1831 |
1,1862 |
1,1925 |
|
-22 |
1,1212 |
1,1274 |
1,1336 |
1,1396 |
1,1458 |
1,1519 |
1,1581 |
1,1643 |
1,1673 |
1,1735 |
|
-18 |
1,1036 |
1,1097 |
1,1158 |
1,1218 |
1,1278 |
1,1338 |
1,1399 |
1,1460 |
1,1490 |
1,1551 |
|
-14 |
1,0866 |
1,0926 |
1,0986 |
1,1045 |
1,1105 |
1,1164 |
1,1224 |
1,1284 |
1,1313 |
1,1373 |
|
-10 |
1,0701 |
1,0760 |
1,0819 |
1,0877 |
1,0986 |
1,0994 |
1,1053 |
1,1112 |
1,1141 |
1,1200 |
|
-6 |
1,0540 |
1,0599 |
1,0657 |
1,0714 |
1,0772 |
1,0829 |
1,0887 |
1,0945 |
1,0974 |
1,1032 |
|
-2 |
1,0385 |
1,0442 |
1,0499 |
1,0556 |
1,0613 |
1,0669 |
1,0726 |
1,0784 |
1,0812 |
1,0869 |
|
0 |
1,0309 |
1,0366 |
1,0423 |
1,0477 |
1,0535 |
1,0591 |
1,0648 |
1,0705 |
1,0733 |
1,0789 |
|
+2 |
1,0234 |
1,0291 |
1,0347 |
1,0402 |
1,0459 |
1,0514 |
1,0571 |
1,0627 |
1,0655 |
1,0712 |
|
+6 |
1,0087 |
1,0143 |
1,0198 |
1,0253 |
1,0309 |
1,0363 |
1,0419 |
1,0475 |
1,0502 |
1,0557 |
|
+10 |
0,9944 |
0,9999 |
0,0054 |
1,0108 |
1,0162 |
1,0216 |
1,0272 |
1,0326 |
1,0353 |
1,0407 |
|
+14 |
0,9806 |
0,9860 |
0,9914 |
0,9967 |
1,0027 |
1,0074 |
1,0128 |
1,0183 |
1,0209 |
1,0263 |
|
+18 |
0,9671 |
0,9725 |
0,9778 |
0,9830 |
0,9884 |
0,9936 |
0,9989 |
1,0043 |
1,0069 |
1,0122 |
|
+20 |
0,9605 |
0,9658 |
0,9711 |
0,9783 |
0,9816 |
0,9868 |
0,9921 |
0,9974 |
1,0000 |
1,0053 |
|
+22 |
0,9539 |
0,9592 |
0,9645 |
0,9696 |
0,9749 |
0,9800 |
0,9853 |
0,9906 |
0,9932 |
0,9985 |
|
+24 |
0,9475 |
0,9527 |
0,9579 |
0,9631 |
0,9683 |
0,9735 |
0,9787 |
0,9839 |
0,9865 |
0,9917 |
|
+26 |
0,9412 |
0,9464 |
0,9516 |
0,9566 |
0,9618 |
0,9669 |
0,9721 |
0,9773 |
0,9799 |
0,9851 |
|
+28 |
0,9349 |
0,9401 |
0,9453 |
0,9503 |
0,9555 |
0,9605 |
0,9657 |
0,9708 |
0,9734 |
0,9785 |
|
+30 |
0,9288 |
0,9339 |
0,9391 |
0,9440 |
0,9432 |
0,9542 |
0,9594 |
0,9645 |
0,9670 |
0,9723 |
|
+34 |
0,9167 |
0,9218 |
0,9268 |
0,9318 |
0,9368 |
0,9418 |
0,9468 |
0,9519 |
0,9544 |
0,9595 |
|
+38 |
0,9049 |
0,9099 |
0,9149 |
0,9199 |
0,9248 |
0,9297 |
0,9347 |
0,9397 |
0,9421 |
0,9471 |
Приложение 3
Указатель основных синонимов, технических, торговых и фирменных названий веществ
1. Амиодарон
2. Амоксициллина тригидрат
3. Ацикловир
4. Витамин А
5. Галоперидол
6. Ксиланаза
7. Лоперамида гидрохлорид
8. Мексидол
9. Мексикор
10. Офлоксацин
11. Пиразинамид
12. Ретинола ацетат
13. Родопол-23
14. Симвастатин
15. Трамадол
16. Хладон-23
17. Хладон-31-10
18. Хладон-116
19. Хладон-122
20. Хладон-R11511
21. Цианборгидрид натрия
22. Этамбутола дигидрохлорид
Приложение 4
Вещества, определяемые по ранее утвержденным методическим указаниям
|
Название вещества |
Ссылка на опубликованные методические указания |
|
1 |
2 |
|
1. №-децил-N,N-диметил-1-деканаминий хлорид (дидецилдиметиламмоний хлорид; «Арквад 2.10.50») |
МУ по фотометрическому измерению концентраций диалкилдиметиламмоний хлорида (С17 - С20) и алкилбензилдиметиламмоний хлорида (С10 - С16)-ДОН-2, диалкиламинопропионитрила (С7 - С9)-ИФХАН-ГАЗ, алкилтриметиламмоний хлорида (С10 - С16), ДОН-52 в воздухе рабочей зоны. № утв. 4905-88, дата утв. 12.12.88, вып. 25. М., 1989, с. 49 |
|
2. Поликарбонофторид |
МУ на гравиметрическое определение пыли в воздухе рабочей зоны и в системах вентиляционных установок. МУ № 1719-77, дата утв. 18.04.77, вып. 1 - 5. М., 1981, с. 235 |
|
3. Препарат МЭК-Сх-3 |
МУ по фотометрическому измерению массовых концентраций эндо-1,3в-ксиланазы (ксиланаза) в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1642-03, дата утв. 29.06.03, вып. 42 |
|
4. Препарат ПФП-1 |
МУ по спектрофотометрическому измерению концентрации амилазы в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1575-03, дата утв. 29.06.03, вып. 38 |
|
5. Препарат Феркон |
МУ по фотометрическому измерению массовых концентраций целловиридина в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1753-03, дата утв. 29.06.03, вып. 46 |
|
6. Селенит натрия |
МУ по атомно-абсорбционному измерению массовых концентраций селена и диоксида селена в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1368-03, дата утв. 16.05.03, вып. 41 |
|
7. Триамин G-12Д |
МУ по спектрофотометрическому измерению концентраций N’, N’-бис-(3-аминопропил)-додециламина(лонзабака) в воздухе рабочей зоны. МУК 4.1.1522-03, дата утв. 29.06.03, вып. 37 |
СОДЕРЖАНИЕ