4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ
В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ, СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОМ
СЫРЬЕ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Измерение концентрации Ацетамиприда
в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

СБОРНИК МЕТОДИЧЕСКИХ УКАЗАНИЙ
МУК 4.1.1131-02

ВЫПУСК 1

МОСКВА
2004

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации, Первый

заместитель Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

Дата введения: 1 января 2003 г.

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентрации Ацетамиприда
в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

1. Вводная часть

Фирма производитель: Ниппон Сода (Япония).

Торговое название: МОСПИЛАН.

Общепринятое название вещества: Ацетамиприд.

Название по ИЮПАК: (Е)-N¹-[(6-хлор-3-пиридил)метил]-N²-циано-N¹-метилацетамидин.

C₁₀H₁₄ClN₄                                                                                                       М. м. 222,7

Химически чистый Ацетамиприд представляет бесцветный кристаллический порошок без запаха.

Температура плавления: 98,9 °С.

Давление паров при 25 °С: менее 1,0 × 10^-6 Па.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K_ow logP = 0,80.

Растворимость в воде составляет 4,25 г/л.

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,2 мг/дм³.

2. Методика измерения концентраций Ацетамиприда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Ацетамиприда с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры «синяя лента».

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.7.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, а также пестицидов, применяемых при возделывании огурцов и томатов защищенного фунта, а также картофеля.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 5 нг (измерение по п. 2.7.1); 0,5 нг (измерение по п. 2.7.2).

Предел обнаружения в воздухе - 0,05 мг/м³ (при отборе 10 л воздуха).

Диапазон определяемых концентраций - 0,05 - 1,0 мг/м³.

Среднее значение определения - 93,8 %.

Стандартное отклонение (S) - 2,91 %.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 1,19 %.

Доверительный интервал среднего - 3,06 %.

Суммарная погрешность измерения не превышает 22 %.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Ацетамиприд с содержанием д. в. 99,9 %, Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ 6-09-4326-76
Вода бидистиллированная или деионизированная
Бумажные фильтры «синяя лента», обеззоленные, предварительно промытые ацетонитрилом	ТУ 6-09-2678-77

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Waters (США) или аналогичный
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная Лихросорбом RP-18, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа
Жидкостный хроматограф Милихром с ультрафиолетовым детектором
Хроматографическая колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Сепароном С18, зернением 5 мкм
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11-917-76
Весы аналитические типа ВЛА-200	ГОСТ 34104-80Е
Насос водоструйный	ГОСТ 10696-75
Аспирационное устройство типа ЭА-1 или аналогичное	ТУ 25-11-1414-78
Барометр	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1 °С, пределы измерения 0 - 55 °С	ГОСТ 215-73Е
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1000 мл	ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные, вместимостью 10, 50, 500 и 1000 мл	ГОСТ 1770-74Е
Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью 100 мл	ГОСТ 10394-72
Стаканы химические, вместимостью 100 мл	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл	ГОСТ 20292-74
Воронки химические, конусные, диаметром 34 - 40 мм	ГОСТ 25336-82Е
Фильтродержатели
Стеклянные палочки

2.4. Отбор проб

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».

В течение 15 мин последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух с объемным расходом 2,0 л/мин аспирируют в течение 5 мин через фильтр «синяя лента».

Фильтры с отобранными пробами, упакованные в полиэтиленовые пакеты, можно хранить в холодильнике не более двух недель.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Отмеряют 300 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 700 мл воды, перемешивают и дегазируют.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (3 : 7, по объему) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 100 мкл/мин (измерение по п. 2.7.1) или 1 мл/мин (измерение по п. 2.7.2).

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор Ацетамиприда с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9 % д. в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 мкг/мл (измерение по п. 2.7.1) готовят из основного стандартного раствора Ацетамиприда соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.1).

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1 и 0,25 мкг/мл (измерение по п. 2.7.2) готовят из основного стандартного раствора Ацетамиприда соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 2.5.1). Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.

2.5.4. Построение градуировочного графика

2.5.4.1. Градуировочный график А (измерение по п. 2.7.1). Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 10 мкл рабочего стандартного раствора Ацетамиприда с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мкг/мл.

2.5.4.2. Градуировочный график В (измерение по п. 2.7.2). Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора Ацетамиприда с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1 и 0,25 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или Б) зависимости высоты хроматографического пика, мм, от концентрации Ацетамиприда в растворе, мкг/мл.

2.6. Описание определения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетонитрила, оставляют на 5 - 7 мин, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетонитрила объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном испарителе почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 1 мл (измерение по п. 2.7.1) или в 20 мл (измерение по п. 2.7.2) подвижной фазы для ВЭЖХ и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия)

Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Сепароном С18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30 : 70, по объему).

Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.

Рабочая длина волны: 248 нм.

Чувствительность: 0,2 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 10 мкл.

Время выхода Ацетамиприда: около 6 мин.

Линейный диапазон детектирования: 5 - 100 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.7.2. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Waters (США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная Лихросорбом RP-18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (30 : 70, по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 248 нм.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время выхода Ацетамиприда: около 5 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,5 - 5,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание Ацетамиприда рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

, где

Х - содержание Ацетамиприда в пробе воздуха, мг/м³;

С - концентрация Ацетамиприда в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

V - объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенного к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С), дм³.

, где

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °С;

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст;

и - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. Разработчики

Профессор Калинин В.А., Довгилевич А.В., Довгилевич Е.В., Калинина Т.С., Устименко Н.В.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева, кафедра химических средств защиты растений.

127550, г. Москва, Тимирязевский проезд, д. 2, телефон: 976-02-20.

СОДЕРЖАНИЕ