НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСТ Р 51435- 99 (ИСО 8128-1-93)

СОК ЯБЛОЧНЫЙ,
СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ
И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК

Метод определения содержания патулина
с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 590-ст

4 Настоящий стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128-1-93 «Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии», кроме приложения «Библиография»

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

6 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август, 2018 г.

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

ГОСТ Р 51435-99
(ИСО 8128-1-93)

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Метод определения содержания патулина
с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

Дата введения - 2001-01-01

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм³ при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см³.

2 Сущность метода

Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.

3 Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации «для ВЭЖХ».

3.1 Растворитель: этилацетат.

3.2 Подвижная фаза - раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10 %.

3.3 Экстрагирующий раствор - водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм³.

3.4 Ацетатный буфер, pH 4.

Смешивают 16,4 см³ уксусной кислоты [c (CH₃COOH) = 0,2 моль/дм³] с 3,6 см³ раствора ацетата натрия [c (CH₃COONa) = 0,2 моль/дм³].

3.5 Уксусная кислота, ледяная.

3.6 Стандартный раствор патулина (C₇H₆O₄).

3.6.1 Приготовление стандартного раствора

Навеску патулина массой 10,0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см³ в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.

Пипеткой переносят 10,0 см³ приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см³, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см³.

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 мм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.

3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина

Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1) ρ_ps, мкг/см³, вычисляют по формуле

(1)

где A - оптическая плотность стандартного раствора патулина;

A₂₇₆ - молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, дм³ · моль^-1 · см^-1 (A₂₇₆ = 14600);

M - молярная масса патулина, г/моль;

C - постоянная прибора (обычно C = 1).

4 Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм³.

Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:

4.1 Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.

4.2 Обращенно-фазовая колонка ODS¹⁾ или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:

________

¹⁾ ODS - октадецилсилан.

- эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;

- длина 250 мм;

- внутренний диаметр 4,6 мм;

- неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.

5 Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

6 Проведение испытаний

6.1 Приготовление испытуемого раствора

При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

6.1.1 Пробу объемом 5,0 см³ экстрагируют порцией этилацетата объемом 5,0 см³ (3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5,0 см³. Этилацетатные фазы объединяют и экстрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2,0 см³.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее, например в течение 1 - 2 мин, из-за нестабильности патулина в щелочной среде.

6.1.2 Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5,0 см³, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1 - 2 см³.

6.1.3 Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см³ с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 см³ каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С. Остаток растворяют в 0,5 см³ подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).

6.2 Построение градуировочного графика

Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 7,5 см³ переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см³, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.

Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1 см³/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0,01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.

В хроматограф (4.1) вводят от 0,010 до 0,030 см³ каждого градуировочного раствора.

Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат - соответствующие величины высоты или площади пиков.

6.3 Проведение определения

В хроматограф вводят от 0,010 см³ до 0,030 см³ испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).

7 Обработка результатов

Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте ρ_p, мкг/дм³, вычисляют по формуле

(2)

где ρ_pt - концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см³.

V₁ - объем, из которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см³;

V₂ - объем пробы продукта, взятый для экстракции, см³.

8 Точность метода

8.1 Сходимость результатов

r = 41,9 мкг/дм³; s_r = 14,9 мкг/дм³,

где r - предел сходимости;

s_r - среднеквадратическое отклонение сходимости.

8.2 Воспроизводимость результатов

R = 47,5 мкг/дм³; S_R = 22,6 мкг/дм³,

где R - предел воспроизводимости;

S_R - среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.

9 Протокол испытаний

В протоколе испытаний указывают:

- метод испытаний;

- результат испытаний;

- окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.

Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.

Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.