Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций действующих
веществ пестицидов в воде, почве, зеленой
массе, зерне и соломе зерновых культур,
семенах и масле рапса, зерне гороха,
семенах и масле льна
Сборник
методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.3020-12; 4.1.3022-12;
4.1.3042-12; 4.1.3045-12
Москва 2013
1. Разработаны сотрудниками ГНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» Россельхозакадемии, ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева».
2. Введены в действие с момента утверждения.
3. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы Главный государственный санитарный Г.Г. Онищенко 3 июля 2012 г. Дата введения: с момента утверждения |
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение остаточных количеств мепикват
хлорида
в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых
культур, семенах и масле рапса методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии
с масс-спектрометрическим детектированием
Методические
указания
МУК 4.1.3020-12
Свидетельство о метрологической аттестации от 9.04.2012 № 01.5.04.072/01.00043/2012.
Настоящие методические указания устанавливают метод измерения массовой доли мепикват хлорида в воде в диапазоне 0,001 - 0,01 мг/дм3, в почве 0,025 - 0,25 мг/кг, в зерне зерновых, семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,02 - 0,2 мг/кг, в зеленой массе и соломе зерновых - 0,05 - 0,5 мг/кг.
Название действующего вещества по ICO: мепикват хлорид.
Название действующего вещества по IUPAC: 1,1-диметилпиперидин.
Структурная формула:
Эмпирическая формула: С7Н16ClN.
Молекулярная масса: 149,7.
Гигроскопичные кристаллы без цвета и запаха. Температура плавления: > 300 °С. Давление паров при 20 °С < 1 ∙ 10-11 мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: Kow log P = -3,55 (рН 7).
Растворимость в воде при 20 °С > 50 % (вес); в органических растворителях (г/100 мл при 20 °С) - в метаноле 48,7, n-октаноле - 0,962, ацетонитриле - 0,280, дихлорметане - 0,051, ацетоне - 0,002, в толуоле, n-гептане и этилацетате - < 0,001.
Стабилен в водных растворах (30 дней при рН 3, 5, 7 и 9, 25 °С). Стабилен при воздействии солнечного света.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая оральная токсичность (LD50) для крыс - 270 мг/кг, подкожная > 1160 мг/кг, не ирритант для кожи и глаз (кролики); ингаляционная токсичность (LC50) для крыс - более 2,84 мг/дм3 воздуха (7 ч). Класс токсичности по ВОЗ - III. DT50 в почве 11 - 40 дней при 20 °С.
Область применения препарата - регулятор роста растений.
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица 1
Метрологические параметры
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr„ % |
Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время», «оператор» в одной лаборатории), σRл, % |
Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR, % |
Показатель точности* (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), ± δ, % |
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Вода от 0,001 до 0,01 вкл. |
7 |
9 |
12 |
25 |
Почва от 0,025 до 0,25 вкл. |
7 |
9 |
12 |
25 |
Зеленая масса от 0,05 до 0,5 вкл. |
6 |
8 |
11 |
24 |
Солома от 0,05 до 0,5 вкл. |
6 |
8 |
11 |
24 |
Зерно от 0,02 до 0,2 вкл. |
6 |
8 |
11 |
24 |
Семена рапса от 0,02 до 0,2 вкл. |
6 |
8 |
11 |
24 |
Масло рапса от 0,02 до 0,2 вкл. |
6 |
7 |
8 |
16 |
* Соответствует расширенной неопределенности Uотн при коэффициенте охвата k = 2 |
Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.
Таблица 2
Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) |
Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) |
Среднее значение определения, % |
Стандартное отклонение, S, % |
Доверительный интервал среднего результата, ± % |
|
Вода |
0,001 |
0,001 - 0,01 |
97 |
3,6 |
3,3 |
Почва |
0,025 |
0,025 - 0,25 |
90 |
4,9 |
4,5 |
Зеленая масса |
0,05 |
0,05 - 0,5 |
85 |
4,2 |
3,8 |
Солома |
0,05 |
0,05 - 0,5 |
83 |
4,3 |
3,9 |
Зерно |
0,02 |
0,02 - 0,2 |
94 |
4,0 |
3,6 |
Семена рапса |
0,02 |
0,02 - 0,2 |
88 |
5,2 |
4,7 |
Масло рапса |
0,02 |
0,02 - 0,2 |
90 |
4,8 |
4,4 |
Методика основана на определении мепикват хлорида методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой на патронах с оксидом алюминия. Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания. Массовую концентрацию мепикват хлорида в пробе определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике.
Избирательность метода определения мепикват хлорида достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа с масс-спектрометрическим детектированием.
3.1. Средства измерений
Хромато-масс-спектрометр Agilent Triple Quard LC/MS модель 6460 производства фирмы Agilent Technologies, состоящий из: |
|
- высокоэффективного жидкостного хроматографа Agilent 1200; |
|
- масс-спектрометра Agilent модели Triple Quard LC/MS 6460, оснащенного системой ионизации «электроспрей» |
|
Весы аналитические ВЛА-200 |
|
Весы технические ВЛКТ-500 |
|
Колбы мерные на 10, 100, 1000 см3 |
|
Микродозаторы одноканальные «BIOHIT» переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3, Финляндия |
Номер в Госреестре средств измерений 36152-07 |
Пипетки градуированные |
|
Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 |
|
рН-метр универсальный ЭВ-74 |
ГОСТ 22261-76 |
Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Ацетонитрил для ВЭЖХ, сорт 1 |
ТУ 6-09-3534-87 |
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) |
|
Изопропиловый спирт, хч |
ТУ 6-09-402-75 |
Карбонат магния (магний углекислый основной водный), ч |
|
Калия перманганат, хч |
|
Кислота муравьиная Reagent Grade, № G2453-85060 по каталогу Agilent |
|
Кислота соляная, хч |
|
Мепикват хлорид, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,0 % (BASF) |
|
Метилен хлористый, хч |
ТУ 2631-44493179-98 |
Натрия гидроксид, чда |
|
Оксид алюминия для хроматографии, ч, размер частиц 100 - 200 мкм, 1-й степени активности по Брокману, нейтральный |
ТУ 6-09-426-75 |
Подвижные фазы для ВЭЖХ: |
|
- подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему) |
|
- подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, по объему) |
|
Спирт метиловый, хч |
Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Колонка Zorbax Eclipse XDB-C18 (150×4,6) мм, 5 мкм |
|
Аппарат для встряхивания |
ТУ 64-1-1081-73 |
Ванна ультразвуковая УЗВ-1.3 |
|
Воронки лабораторные В-75-110 |
|
Воронки делительные ВД-3-250 |
ГОСТ 8613-75 |
Гомогенизатор |
МРТУ 42-1505-63 |
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС |
ГОСТ 10384-72 |
Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 29-32 ТС |
ГОСТ 10384-72 |
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ |
ТУ 1-01-0593-79 |
Насос водоструйный |
|
Патроны Диапак С (БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 22.0300) |
|
Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 (Швейцария) |
|
Стеклянные флаконы (виалы) для градуировочных и анализируемых растворов вместимостью 1,8 см3 с завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками фирмы Supelco, номер по каталогу 2-6951 |
|
Центрифуга производства фирмы Eppendorf, Германия |
|
Шейкер Multi Reax производства фирмы Heidolph, Германия |
Примечание. Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168- 89 «Почвы. Отбор проб»; ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Семена рапса хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 2 месяцев. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объёма 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
5.2. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Zorbax Eclipse XDB-C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,6 см3/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.
5.3. Приготовление растворов для подготовки проб
Раствор 2М HCl: в мерную колбу на 1000 см3 вносят 197 г 36 %-й соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.
Раствор 6М HCl: в мерную колбу на 1000 см3 вносят 605 г 36 %-й соляной кислоты, добавляют бидистиллированную воду до метки и перемешивают.
Смесь 6М HCl-MeOH (9:1): в конической колбе на 1000 см3 вносят 900 см3 6М соляной кислоты и добавляют 100 см3 метанола.
Экстрагент № 1: в колбе на 1000 см3 смешивают 650 см3 бидистиллированной воды, 350 см3 метанола и 50 см3 2М НСl.
Элюент № 1 для очистки на патроне: в колбе на 500 см3 смешивают 100 см3 метанола с 400 см3 ацетонитрила (1:4), элюента № 2 - смешивают 50 см3 метанола с 450 см3 ацетонитрила (1:9).
Раствор гидроксида натрия 1М: в мерную колбу на 100 см3 помещают 4 г гидроксида натрия, растворяют в 100 см3 дистиллированной воды, доводят водой до метки и перемешивают.
Подвижная фаза А: в мерную колбу на 1000 см3 помещают 1000 см3 бидистиллированной деионизованной воды, затем микродозатором вносят 1 см3 муравьиной кислоты.
Подвижная фаза Б: в мерную колбу на 1000 см3 помещают 1000 см3 метилового спирта, затем микродозатором вносят 1 см3 муравьиной кислоты.
Смесь метанола с ацетонитрилом: в колбе на 100 см3 с помощью мерных цилиндров смешивают 20 см3 метанола с 80 см3 ацетонитрила (смесь 1:4) и 10 см3 метанола с 90 см3 ацетонитрила (смесь 1:9).
5.4. Приготовление растворов для градуировки
Основной раствор мепикват хлорида с массовой концентрацией 10 мкг/см3.
Точную навеску мепикват хлорида массой (10 ± 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и добавляют около 90 см3 бидистиллированной воды. Содержимое колбы тщательно перемешивают, выдерживают 20 мин при температуре 20 °С, после чего добавляют воду до метки. Затем 10 см3 полученного раствора с концентрацией 100 мкг/см3 вносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки бидистиллированной водой - получен основной раствор с концентрацией 10 мкг/см3.
Градуировочные растворы с концентрациями 1,0; 5,0; 10,0; 15,0; 20,0 и 25,0 нг/см3 готовят из основного раствора методом последовательного разбавления, используя подвижную фазу А.
Раствор № 1 с концентрацией мепикват хлорида 25 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,25 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 2 с концентрацией мепикват хлорида 20 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят ОД см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 3 с концентрацией мепикват хлорида 15 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,15 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 4 с концентрацией мепикват хлорида 10 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5,0 см3 раствора № 2 и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 5 с концентрацией мепикват хлорида 5 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 5,0 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Раствор № 6 с концентрацией мепикват хлорида 1 нг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 раствора № 4 и доводят объем до метки подвижной фазой А.
Основной и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение месяца.
Для внесения в контрольный образец при определении полноты извлечения используют основной раствор, разбавленный ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом последовательного разбавления. Растворы для внесения в масло готовят из основного раствора с концентрацией 100 мкг/см3 методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом.
5.5. Построение градуировочного графика
Для каждого из градуировочных растворов регистрируют хроматограммы в условиях, указанных в п. 7 и определяют абсолютное время удерживания и площадь пика мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующего MRM (114→98). Одновременно в режиме автоматической обработки данных определяют соотношение площадей пиков, соответствующих MRM (11498) и MRM (114→58) (S98/S58).
В режиме автоматической обработки данных строят градуировочную характеристику (площадь пика - концентрация мепикват хлорида в растворе). Для этого в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций).
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента:
где
λконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. (λконтр. = 10 % при Р = 0,95).
5.6. Подготовка патронов с оксидом алюминия для очистки экстракта
В картридж емкостью 10 см3 для твердофазной экстракции вносят 2,5 г оксида алюминия 2-й степени активности и уплотняют центрифугированием 10 мин при 8000 об./мин.
Приготовление оксида алюминия 2-й степени активности: к 97 г Al2O3 (активность 1, влажность 0 %) добавляют 3 см3 воды и перемешивают в шейкере 2 ч при 300 rpm.
Оксид алюминия готовят в день использования и хранят в эксикаторе.
5.7. Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.
6.1. Определение мепикватхлорида в воде
Подщелачивают 25 см3 воды 1М раствором гидроксида натрия до рН 9 и пропускают через картридж с силикагелем (Диапак С) со скоростью 3 - 4 см3/мин. Мепикват хлорид элюирут от 5 см3 смеси 6М НСl-МеОН (9:1). Элюат выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 5 см3 смеси (метиловый спирт : подвижная фаза А в соотношении 1:9) и 10 мм3 раствора вводят в жидкостный хроматограф.
6.2. Извлечение мепикват хлорида из почвы
Навеску почвы (5 ± 0,1) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и добавляют 50 см3 дистиллированной воды. После перемешивания на аппарате для встряхивания в течение 5 мин в почвенную вытяжку добавляют карбонат магния до получения нейтральной реакции. В полученную смесь добавляют 100 см3 хлористого метилена и тщательно встряхивают. Затем ее выдерживают в ультразвуковой ванне в течение 10 мин и декантируют в делительную воронку на 250 см3 через стеклянную воронку с ватным фильтром. После разделения фаз нижний слой переносят в другую делительную воронку (верхний слой отбрасывают), добавляют к нему 50 см3 разбавленной соляной кислоты (125 см3 кислоты и 825 см3 воды) и энергично встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев водную фазу (верхний слой) собирают в колбу емкостью 100 см3. К органической фазе (оставшийся нижний слой) повторно добавляют 50 см3 разбавленной соляной кислоты. После разделения слоев водную фазу собирают в ту же колбу, органическую фазу отбрасывают. Из объединенной водной фазы (100 см3) отбирают аликвоту 2 см3 (1/50 экстракта) и упаривают ее на ротационном испарителе при температуре водяной бани 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.3. Извлечение мепикват хлорида из зерна
Навеску измельченного зерна массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М НСl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 см3 смеси и центрифугируют 5 мин при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 4,0 см3 супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.4. Извлечение мепикват хлорида из зеленой массы и соломы зерновых культур
Навеску измельченной зеленой массы или соломы массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М HCl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 см3 смеси и центрифугируют 5 мин при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,5 см3 супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.5. Извлечение мепикват хлорида из семян рапса
Навеску измельченных семян массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М НСl в соотношении 65:30:5) в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Затем в колбу добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают колбу в течение 1 мин. Отбирают из колбы в пробирку 10 см3 смеси и центрифугируют 5 мин при 4000 об./мин. Затем отбирают из пробирки 2,0 см3 супернатанта и выпаривают до сухого остатка на роторном испарителе при 70 °С. Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.6. Извлечение мепикват хлорида из масла рапса
Навеску масла массой (5 ± 0,05) г помещают в коническую колбу емкостью 250 см3 и экстрагируют мепикват хлорид 100 см3 экстрагента № 1 (вода-метанол-2М HCl в соотношении 65:30:5) на ультразвуковой установке в течение 10 мин. Смесь помещают в делительную воронку емкостью 250 см3 и промывают двумя порциями хлористого метилена по 50 см3, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 - 3 мин и собирая нижний водный слой. К водной фазе добавляют 100 см3 бидистиллированной воды и энергично встряхивают в течение 1 мин. Аликвоту полученного водного экстракта 2,0 см3 выпаривают досуха на роторном испарителе при 70 °С.
Дальнейшую очистку проводят на патронах с оксидом алюминия по п. 6.7.
6.7. Очистка на патронах с оксидом алюминия
Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов по пп. 6.2 - 6.6, растворяют в 1 см3 метанола в ультразвуковой ванне в течение 0,5 мин и добавляют 4 см3 ацетонитрила. Полученный раствор количественно переносят в подготовленный картридж для твердофазной экстракции и дают ему впитаться. Промывают картридж 1 раз 5 см3 смеси метанол-ацетонитрил (1:4), затем 3 раза по 5 см3 смесью метанол-ацетонитрил (1:9). Элюат от 4 промывок собирают в грушевидную колбу емкостью 100 см3. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см3 смеси метиловый спирт:подвижная фаза А (1:9 по объему) и 10 мм3 раствора вводят в жидкостный хроматограф.
7.1. Хроматографические условия измерений
Колонка: Zorbax Eclipse XDB-C18 (150×4,6) мм, 5 мкм.
Температура термостата колонки (30 ± 1) °С.
Подвижная фаза А: вода + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v).
Подвижная фаза Б: метанол + муравьиная кислота (1000 + 1, v/v).
Скорость потока элюента: 0,4 мл/мин.
Объем вводимой пробы 10 мм3.
Режим элюирования: градиентный:
Время, мин |
% А |
% В |
0 |
100 |
0 |
0,1 |
100 |
0 |
4,0 |
10 |
90 |
8,0 |
10 |
90 |
8,1 |
100 |
0 |
19,0 |
100 |
0 |
7.2. Масс-спектрометрические условия измерений
Тип ионного источника |
ESI positive polarity (электроспрей) |
Режим сканирования |
Multiple reaction monitoring (MRM) 114→98 (основной) 114→58 (подтверждающий) |
Напряжение на фрагменторе, v |
135 |
Параметры работы ионного источника: |
|
Gas temperature, °C |
350 |
Gas flow, л/мин |
10 |
Nebulizer, psi |
35 |
Sheath gas temperature, °C |
350 |
Sheath gas flow, л/мин |
10 |
Capillary, v |
3500 |
Nozzle voltage, v |
2000 |
7.3. Обработка результатов анализа
Анализ проводят в тех же условиях, в которых проводили градуировку прибора.
Каждый раствор хроматографируют не менее 2 раз (параллельные определения). Растворы анализируют непосредственно друг за другом.
Мепикват хлорид идентифицируют по абсолютному времени удерживания, определенному ранее при градуировке (±0,3 мин). В режиме автоматической обработки данных определяют площади пиков мепикват хлорида (в усл. ед.), соответствующих MRM (114→98) и MRM (114→58). Соотношение S98/S58 не должно отличаться от найденного при градуировке более чем на 15 %.
Массовую концентрацию (Сх, мкг/см3) мепикват хлорида в каждом из анализируемых растворов определяют в режиме автоматической обработки данных по построенной ранее градуировочной характеристике.
Содержание мепикват хлорида в исследуемых образцах (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
где
Сх - концентрация мепикват хлорида, найденная по градуировке, мкг/см3;
V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
А1 - аликвота анализируемого экстракта (2,0 см3 - для рапса и почвы, 2,5 см3 - для зеленой массы и соломы, 4 см3 - для зерна);
А2 - общий объем экстракта (200 см3 - для рапса, зерна, зеленой массы и соломы и 100 см3 - для почвы);
Р - навеска анализируемого образца, г (см3 для воды).
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор мепикват хлорида 25 нг/см3, разбавляют подвижной фазой А для ВЭЖХ.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:
X1, X2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r - значение предела повторяемости (r = 2,8σr).
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
(Х ± Δ) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где
δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,02 мг/кг*, где «*» - 0,02 мг/кг - предел обнаружения мепикват хлорида в зерне).
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
10.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
10.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
, где
± Δл,Х (±Δл,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:
Δт = ±0,84Δ, где
Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где
δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
Кк = Х' - Х - Сд, где
X', X, Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
|Кк| ≤ К, (2)
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
10.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости
где (3)
X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.
11.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф с масс-спектрометрическим детектором.
11.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленные ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.
Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием, ознакомленный с руководством по эксплуатации прибора, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 10.
Долженко В.И., Цибульская И.А., Берестецкий А.О. (ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений» Россельхозакадемии, Санкт-Петербург).
Крылов А.И., Лопушанская Е.М. (ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологии им. Д.И. Менделеева», Санкт-Петербург).