4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
действующих веществ пестицидов
в овощах, цитрусовых, плодовых,
ягодах и орехах

Сборник методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.2986-12; 4.1.2989-12; 4.1.2993-12;
4.1.2996-12; 4.1.3006-12

Москва 2012

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 № 2).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств кломазона в капусте
методом капиллярной газожидкостной хроматографии

Свидетельство о метрологической аттестации от 23.09.2011 № 01.5.04.032/01.00043/2011.

1. Общие положения

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в капусте массовой концентрации кломазона в диапазоне концентраций 0,01 - 1,0 мг/кг.

Название вещества по ИСО: кломазон.

Название вещества по ИЮПАК: 2-(2-хлоробензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₂H₁₄ClNO₂.

Молекулярная масса: 239,7.

Химически чистый кломазон представляет собой вязкую светло-коричневую жидкость.

Плотность - 1,192 при 20 °С.

Давление паров при 25 °С - 19,2 мПа.

Растворимость в воде - 1,1 г/л.

Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе, циклогексаноне, гексане, гептане, хлористом метилене, метаноле, диметилформамиде, толуоле, диоксане и других органических растворителях.

Коэффициент распределения в системе октанол-вода при 20 °С lgP = 2,5.

Кломазон устойчив при хранении. При комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °С в течение 3 месяцев. В водных растворах период полураспада при солнечном свете более 30 дней, в почве - 30 - 135 дней (в зависимости от почвенно-климатических условий).

Краткая токсикологическая характеристика

ЛД₅₀ для крыс - 1369 - 2077 мг/кг. ЛД₅₀ для мышей 2350 мг/кг.

Гигиенические нормативы. МДУ кломазона в капусте не установлен.

Область применения

Селективный системный гербицид, используемый для борьбы со злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями на посевах сои, кукурузы, рапса, гороха и ряде овощных культур при довсходовом и послевсходовом внесении. Он хорошо проникает в растение через корни и листья и подавляет рост и развитие двудольных и злаковых сорняков.

2. Методика определения кломазона в капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии

2.1. Принцип метода

Метод определения кломазона в капусте основан на экстракции пестицида органическим растворителем и очистке на патроне Диапак С. Количественное определение кломазона проводят методом газожидкостной хроматографии с капиллярной колонкой и использованием термоионного детектора.

Идентификация кломазона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

2.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Метрологическая характеристика метода

Таблица 2

Полнота извлечения кломазона, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0,95

2.3. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается использование другого вспомогательного оборудования иных производителей с аналогичными техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03.

Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

·     процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

·     выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Отбор проб и хранение

Отбор проб капусты проводят в соответствии с ГОСТ 1724-85 «Капуста белокочанная свежая. Заготовка и поставка» или ГОСТ 7967-87 «Капуста краснокочанная свежая. Заготовка и поставка».

Для длительного хранения аналитические пробы капусты помещают в герметично закрытый двойной полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °С.

8. Подготовка к определению

8.1. Кондиционирование колонки

Капиллярную или насадочную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С до установления нулевой линии.

8.2. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см³ растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 см³ и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с типовыми методиками.

8.3. Приготовление элюента № 1

Для приготовления раствора гексан/этилацетат в соотношении 9/1 в мерную колбу на 100 см³ вносят 10 см³ этилацетата и доводят до метки гексаном.

8.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

8.4.1. Основной раствор с концентрацией 100 мкг/см³. Точную навеску кломазона (10 ± 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, растворяют в гексане и доводят объем до метки гексаном.

Градуировочные растворы кломазона с концентрациями 10,0, 5,0, 1,0, 0,2 и 0,1 мкг/см³ готовят методом последовательного разбавления основного раствора, используя гексан.

8.4.2. Раствор № 1 с концентрацией кломазона 10 мкг/см³. В мерную колбу вместимостью 10 см³ вносят 1 см³ основного раствора и доводят объем до метки гексаном.

8.4.3. Раствор № 2 с концентрацией кломазона 5 мкг/см³. В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 5 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.4. Раствор № 3 с концентрацией кломазона 1 мкг/см³. В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.5. Раствор № 4 с концентрацией кломазона 0,2 мкг/см³. В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 2 см³ раствора № 3 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.6. Раствор № 5 с концентрацией кломазона 0,1 мкг/см³. В мерную колбу вместимостью 10 см³ помещают 1 см³ раствора № 3 и доводят объем до метки гексаном.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток. Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют основной раствор кломазона, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации.

8.5. Построение градуированного графика

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мм³ градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации кломазона в градуировочном растворе (мкг/см³).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

 где

С - аттестованное значение массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе;

С_к - результат контрольного измерения массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе;

λ_контр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (λ_контр. = 10 % при Р = 0,95).

8.6. Проверка хроматографического поведения кломазона на патронах Диапак С

Перед употреблением патрон промывают 10 - 15 см³ гексана. Затем в патрон вносят 3 см³ градуировочного раствора кломазона № 3 (1 мкг/см³ кломазона в гексане) и промывают 5 см³ гексана. Элюат отбрасывают. Для определения фракции, содержащей кломазон, используют элюент № 1 (гексан/этилацетат - 9/1 по объему). В патрон вносят 6 см элюента № 1 и отбирают фракции элюата по 1 см³ в мерные пробирки на 5 см³. Элюаты выпаривают досуха с помощью установки для упаривания растворителей в токе азота. Сухие остатки растворяют в 1 см³ гексана и последовательно вводят в хроматограф. Фракции, содержащие кломазон, объединяют.

8.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводятся в соответствии с требованиями технической документации.

9. Проведение определения

9.1. Экстракция кломазона из капусты

Капусту измельчают, берут навеску (10 ± 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 см³, проводят экстракцию 70 см³ гексана на ультразвуковой бане в течение 10 мин, экстракцию повторяют дважды порциями по 40 см³. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр «красная лента» и упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С до объема 1 - 2 см³. Дальнейшую очистку проводят на патронах Диапак С по п. 9.2.

9.2. Очистка экстрактов на патронах Диапак С

Количественно переносят в патрон 1 - 2 см³ полученного по п. 9.1 экстракта и промывают 3 см³ гексана, фильтрат отбрасывают. Кломазон элюируют 4 см³ элюента № 1 (гексан/этилацетат - 9/1), собирая в колбу-концентратор на 10 см³, выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 см³ гексана и хроматографируют.

9.3. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с ДТИ.

Колонка капиллярная кварцевая длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с неподвижной фазой НР-35, толщина слоя 0,25 мкм.

Температура колонки программируется от 170 °С (1 мин) до 250 °С (5 мин) со скоростью 25 °С/мин, температура испарителя 280 °С, детектора 380 °С.

Расход газа-носителя (азот) через колонку Г₁ - 3,8 см³/мин (давление на входе 100 кПа), Г₂ - 22 см³/мин (сброс пробы), Г₄ - 20 см³/мин (поддув ТИД), Г₅ - 13,5 см³/мин (водород к ТИД), Г₆ - 200 см³/мин (воздух к ТИД). Деление потока 1:1. Объем вводимой пробы - 1 мм³.

Время удерживания кломазона 5 мин (35 ± 5) с.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание кломазона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

 где

Н₁ - высота (площадь) пика кломазона в стандартном растворе, мм (мв ∙ с);

Н₂ - высота (площадь) пика кломазона в анализируемой пробе, мм (мв ∙ с);

V - объём экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

Р - навеска анализируемого образца, г;

С - концентрация кломазона в стандартном растворе, мкг/см³.

Содержание остаточных количеств кломазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор кломазона 10 мкг/см³, разбавляют гексаном.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

 где                                                        (1)

X₁, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (r = 2,8σ_r).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,01^*, где ^* - 0,01 мг/кг - предел определения кломазона в капусте).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

С_д = Δ_л,Х + Δ_л,Х', где

± Δ_л,Х (± Δ_л,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

Δ_л = ± 0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры К_к рассчитывают по формуле:

К_к = Х' - Х - С_д, где

Х', Х, С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг (мг/дм³).

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|К_к| ≤ К,                                                                (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

 где                                                 (3)

X₁ и X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг (мг/дм³);

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

14. Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Остроухова О.К. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург).

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.032/01.00043/2011) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10797).