4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств
действующих веществ пестицидов
в овощах, цитрусовых, плодовых,
ягодах и орехах

Сборник методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.2986-12; 4.1.2989-12; 4.1.2993-12;
4.1.2996-12; 4.1.3006-12

Москва 2012

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 22.12.2012 № 2).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 19 марта 2012 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств ципродинила
в моркови методом капиллярной газожидкостной
хроматографии

Свидетельство об аттестации МВИ от 25.11.2011 № 0107.25.11.11.

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярного газохроматографического анализа для определения массовых концентраций ципродинила в моркови в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг.

Название вещества по ИСО: ципродинил.

Название вещества по ИЮПАК: 4-циклопропил-6-метил-N-фенил-пиридин-2-амин.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₄H₁₅N₃.

Молекулярная масса 225,3.

Представляет собой бежевый порошок со слабым запахом. Т_пл 75,9 °С. Давление паров 5,1×10^-1 мПа (25 °С; кристаллическая модификация А); 4,7×10^-1 мПа (25 °С; кристаллическая модификация В). Растворимость (мг/дм³) в воде при 25 °С: 20 (рН 5); 13 (рН 7); 15 (рН 9). Растворимость в органических растворителях при 25 °С (г/дм³) гексан - 30; ацетон - 610; этанол - 160; толуол - 460; октанол - 140. Стабильность в водных растворах: ДТ₅₀ при рН 4 - 9 и 25 °С - более года; плотность при 20 °С: 1,21 г/см³.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD₅o) крысы, мыши > 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD₅₀) крысы > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC₅₀, 4 ч) для крыс > 1200 мг/дм³.

Ципродинил является среднестойким соединением в растениях и почве с периодом разложения в почве 20 - 60 дней. В растениях метаболизируется посредством гидроксилирования 6-метильной группы, а также пиримидинового и фенильного ядра.

1. Погрешность измерений

При соблюдении всех регламентируемых условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерения при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

2. Метод измерений

Измерения концентраций ципродинила выполняют методом газовой хроматографии (ГХ) с применением термоионного детектора (ТИД) после извлечения вещества из исследуемой пробы органическим растворителем, очистки экстрактов путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и дополнительной очистки на колонке с флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные средства измерений, устройства и материалы

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений и устройств иных производителей, технические характеристики которых не уступают указанным, а также материалов, обеспечивающих нормативы точности при проведении измерений.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать «Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением», ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

·     процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;

·     выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: приготовление растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флоризилом, проверка хроматографического поведения ципродинила на колонке с флоризилом.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Ацетон

Ацетон перегоняют над небольшим количеством марганцево-кислого калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30.

7.1.2. Гексан

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над прокаленным карбонатом натрия.

7.2. Кондиционирование хроматографической колонки

Колонку капиллярную (VF-5ms) кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С, не подсоединяя к детектору в течение 8 - 10 ч.

7.3. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.3.1. Исходный раствор ципродинила для градуировки (концентрация 250 мкг/см³)

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,025 г аналитического стандарта ципродинила, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °С около 4 месяцев.

7.3.1.1. Рабочий раствор № 1 для градуировки (концентрация 25,0 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10,0 см³ исходного раствора для градуировки с концентрацией 250 мкг/см³ (п. 7.3.1), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают на ультразвуковой бане, получают рабочий раствор № 1 для градуировки с концентрацией ципродинила 25 мкг/см³. Раствор хранится в холодильнике в течение 2 месяцев.

7.3.1.2. Рабочие растворы № 2 - 5 для градуировки и внесения (концентрация 0,25 - 2,5 мкг/см³). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0 см³ исходного раствора № 1 для градуировки с концентрацией 25 мкг/см³ (п. 7.3.1.1), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают на ультразвуковой бане, получают рабочие растворы № 2 - 5 для градуировки и внесения с концентрацией ципродинила 0,25; 0,5; 1,0 и 2,5 мкг/см³.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 30 дней.

Эти растворы ципродинила используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующих веществ методом «внесено-найдено».

7.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (S, мВ ∙ с) от концентрации ципродинила в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки № 2 - 5.

В испаритель газового хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора, приготовленного по п. 7.3.1.2 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества, на основании которых строят градуировочную зависимость.

7.5. Приготовление смеси гексан-ацетон (объемное соотношение 9:1) для очистки экстрактов на колонке с флоризилом

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 90 см³ гексана и 10 см³ ацетона, перемешивают.

7.6. Подготовка хроматографирующей колонки, наполненной флоризилом, для очистки проб

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 12 мм уплотняют тампоном из стекловаты, выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г флоризила в 15 см³ ацетона. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия массой 1 г. Колонку промывают 15 см³ гексана, смывы отбрасывают, не допуская полного высыхания колонки и оставляют ее для насыщения на 2 часа.

7.7. Проверка хроматографического поведения ципродинила на колонке с флоризилом

В стакан емкостью 50 см³ помещают 1 см³ стандартного раствора в гексане № 5 с концентрацией 2,5 мкг/см³, добавляют 4 см³ гексана, перемешивают содержимое и наносят на колонку. Пропускают через колонку 30 см³ смеси гексан-ацетон (9:1) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, отбирая последовательно по 5 см³ элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в колбы для упаривания и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

Сухой остаток в концентраторах растворяют в 1 см³ ацетона и анализируют содержание ципродинила в элюатах по п. 9.4. По результатам обнаружения ципродинила в каждой фракции определяют объем смеси гексан-ацетон (9:1), необходимый для полного вымывания ципродинила.

Примечание. При отработке методики или поступления новой партии флоризила проверку хроматографического поведения ципродинила на колонке следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании нового флоризила и растворителей.

7.8. Приготовление раствора сульфата натрия с массовой долей 2 % (2 %-й раствор)

Навеску 2 г безводного сульфата натрия вносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³, добавляют 600 - 700 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения соли и доводят водой до метки.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ: ГОСТ 1721-85 «Морковь столовая свежая заготавливаемая и поставляемая. Технические условия»; «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (№ 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы моркови хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике не более 1 недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция

Измельченный образец моркови массой 25 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 500 см³, вносят 80 см³ ацетонитрила, устанавливают на механический встряхиватель на 30 мин. Полученный экстракт осторожно декантируют и фильтруют через фильтр «красная лента» в делительную воронку емкостью 500 см³. Экстракцию повторяют дважды, используя каждый раз по 80 см³ ацетонитрила и встряхивая по 15 мин. Экстракты отфильтровывают в ту же делительную воронку.

К объединенному экстракту в делительную воронку приливают 50 см³ гексана и встряхивают в течение минуты. После разделения слоев нижний слой сливают в стакан емкостью 200 см³, а гексан отбрасывают. Экстракт возвращают в делительную воронку и промывают еще раз 50 см³ гексана.

Промытый экстракт переносят в колбу для упаривания емкостью 250 см³, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре 40 °С и очищают перераспределением в системе жидкость-жидкость по п. 9.2, затем на хроматографической колонке, заполненной флоризилом по п. 9.3.

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе жидкость-жидкость

Водный остаток в колбе, полученный по п. 9.1, разбавляют 50 см³ 2 %-го раствора сульфата натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку емкостью 250 см³. Обмывают колбу 50 см³ раствора сульфата натрия и сливают в ту же делительную воронку. Вносят в воронку 50 см³ хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения нижний органический слой фильтруют через помещенный в химическую воронку с бумажным фильтром безводный сульфат натрия в колбу для упаривания вместимостью 150 см³. Экстракцию повторяют дважды, используя каждый раз по 50 см³ хлористого метилена. Объединенные экстракты объединяют и концентрируют на вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40 °С.

Далее проводят очистку пробы на колонке с флоризилом по п. 9.3.

9.3. Очистка экстракта в колонке с флоризилом

Сухой остаток в колбе, полученный по п. 9.2, растворяют в 5 см³ гексана и наносят на колонку с флоризилом, подготовленную по п. 7.5. Промывают колонку 5 см³ смеси гексан-ацетон (9:1), предварительно обмыв ею колбу, в которой находится проба, элюат отбрасывают. Пропускают через колонку 20 см³ указанной смеси, собирая элюат в кругло-донную колбу для упаривания емкостью 150 см³.

Содержимое концентратора упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С.

Остаток растворяют в 1 см³ гексана и анализируют содержание ципродинила методом ГЖХ по п. 9.4.

9.4. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый «Кристалл 2000М», оснащенный термоионным детектором.

Хроматографическая колонка капиллярная VF-5ms, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 160 °С, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 20 °С в минуту до температуры 260 °С.

Температура детектора: 300 °С.

Температура испарителя: 230 °С.

Скорость газа 1 (азот): давление 80 кПа; 34,403 см³/с, поток 1,530 см³/мин.

Газ 2 (азот): деление потока 1:4,2.

Скорость потока водорода 11,5 см³/мин; скорость потока воздуха 200 см³/мин.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Ориентировочное время удерживания ципродинила: 8,075 - 8,103 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,25 - 2,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф не менее 2 раз. Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 2,5 мкг/см³, разбавляют гексаном.

10. Обработка результатов измерений

Содержание ципродинила в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

 где

С - концентрация ципродинила, найденная по градуировочной характеристике в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

т - масса анализируемого образца, г.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:

 где                                                 (1)

X₁, Х₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8σ_r.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

 мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

 - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

 где

δ - граница расширенной неопределенности (табл. 1), %.

Если содержание ципродинила менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание ципродинила в пробе моркови менее 0,01 мг/кг»^*.

______________

^* - 0,01 мг/кг - предел обнаружения ципродинила в моркови.

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание ципродинила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,25 до 2,5 мкг/см.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

 где

X - концентрация ципродинила в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

С - известная концентрация градуировочного раствора ципродинила, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

6 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 6 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов ципродинила, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.4.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С_д должна удовлетворять условию:

 - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

Δ_л = ± 0,84Δ, где

Δ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

 где

δ - граница относительной погрешности методики (показатель точности, табл. 1), %.

Контрольный параметр процедуры К_к рассчитывают по формуле:

 где

, , С_д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

|К_к| ≤ К,                                                               (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предел воспроизводимости (R):

 где                                               (3)

X₁, Х₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

14. Разработчики

Ракитский В.Н., Юдина Т.В., Ларькина М.В. (ФБУН «Федеральный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора).