Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций действующих
веществ пестицидов в воде, почве, зелёной
массе, зерне и соломе зерновых культур,
ботве и корнеплодах свеклы
Сборник методических указаний
по методам контроля
МУК 4.1.3021-12; 4.1.3043-12
Москва 2013
1. Разработаны сотрудниками ГНУ «Всероссийский НИИ защиты растений» Россельхозакадемии.
2. Введены в действие с момента утверждения.
3. Введены впервые.
СОДЕРЖАНИЕ
УТВЕРЖДАЮ Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Г.Г. Онищенко 3 июля 2012 г. Дата введения: с момента утверждения |
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Измерение концентраций флуксапироксада в
воде,
почве, зелёной массе, зерне и соломе зерновых культур
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Методические указания
МУК 4.1.3021-12
Свидетельство о метрологической аттестации от 11.10.2011 № 01.5.04.035/01.00043/2011.
Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации флуксапироксада в воде - в диапазоне концентраций 0,001 - 0,005 мг/дм3, в почве и зерне - в диапазоне концентраций 0,005 - 0,05 мг/кг, в зеленой массе - 0,02 - 0,1 мг/кг, соломе - 0,05 - 0,25 мг/кг.
Название действующего вещества по номенклатуре ICO: флуксапироксад.
Название действующего вещества по номенклатуре IUPAC: ( ± )3-(дифторметил)-1-метил-М(3¢,4¢,5¢-трифтор[1,1¢-бифенил]-2-ил)-1Н-пиразол-4-карбоксамид.
Структурная формула:
Брутто формула: C18H12F5N3O.
Молекулярная масса: 381.
Химически чистое вещество представляет собой кристаллический порошок бежевого цвета без запаха.
Температура плавления: > 157 °С.
Давление пара 1,1×10-7 мРа.
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода КowlgP > 3,0 (20 °С).
Растворимость в воде (мг/дм3, 20 °С): 3,88.
Растворимость в органических растворителях (г/дм3, 20 °С): ацетон ® 250; ацетонитрил, дихлорметан, этилацетат ® 100; метанол - 53,4; толуол - 20,0.
Гидролитически стабилен в водных растворах при рН 4 - 9.
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная - ЛД50 > 2000 мг/кг массы тела. Острая кожная - ЛД50 > 2000 мг/кг массы тела. Острая ингаляционная - ЛК50 (4 ч) > 5,1 мг/л. Раздражающее действие - кролики: кожа - не раздражает; глаза - не раздражает.
Сенсибилизация - не обладает.
Область применения
Фунгицид для обработки вегетирующих растений против комплекса болезней зерновых культур.
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица 1
Метрологические параметры
Объект анализа |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) |
Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), sr, % |
Показатель внутрилабораторной прецизионности, sRл, % |
Показатель воспроизводимости, sR, % |
Показатель точности* (границы относительной погрешности), ± d, % |
Вода |
0,001 - 0,005 |
5 |
7 |
9 |
17 |
Почва |
0,005 - 0,05 |
7 |
9 |
12 |
23 |
Зерно |
0,005 - 0,05 |
7 |
9 |
12 |
23 |
Зеленая масса |
0,02 - 0,1 |
6 |
7 |
10 |
20 |
Солома |
0,05 - 0,1 |
7 |
10 |
12 |
22 |
0,1 - 0,25 |
6 |
8 |
10 |
18 |
|
* Соответствует расширенной неопределенности Uотн. при коэффициенте охвата k = 2 |
Таблица 2
Полнота извлечения флуксапироксада, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для п = 20, Р = 0,95
Предел обнаружения, мг/кг (мг/дм3) |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/дм3) |
Среднее значение определения, % |
Стандартное отклонение, S |
Доверительный интервал среднего результата, ± % |
|
Вода |
0,001 |
0,001 - 0,005 |
95,9 |
2,3 |
1,1 |
Почва |
0,005 |
0,005 - 0,05 |
87,2 |
7,3 |
3,6 |
Зерно |
0,005 |
0,005 - 0,05 |
86,8 |
7,3 |
3,6 |
Зеленая масса |
0,02 |
0,02 - 0,1 |
88,5 |
9,4 |
4,4 |
Солома |
0,05 |
0,05 - 0,25 |
82,1 |
9,9 |
4,7 |
Методика основана на: определении флуксапироксада методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его твердофазной экстракции из воды или жидкостной экстракции из образцов почвы, зеленой массы и соломы ацетонитрилом в присутствии ацетатного буфера, насыщенного сульфатом магния, и обеспечивающего разделение водной и органической фаз; очистке ацетонитрильного экстракта с помощью дисперсионной твердофазной экстракции при одновременном удалении воды безводным сульфатом магния. При анализе зерна используют «Набор для пробоподготовки по методу QuEChERS Interlab VetexQ для обычных овощей, фруктов и зерна (кат. № IL-5056)» с дополнительной очисткой на патронах с силикагелем.
Идентификация флуксапироксада проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженном дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки |
Номер в Госреестре средств измерений 42816-09 |
Весы аналитические ВЛА-200 |
|
Весы технические ВЛКТ-500 |
|
Колбы мерные на 10, 25, 50, 100 см3 |
|
Микродозаторы одноканальные «BIOHIT» переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3, Финляндия |
Номер в Госреестре средств измерений 36152-07 |
Пипетки градуированные |
|
Цилиндры мерные на 50 и 100 см3 |
Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Ацетон, осч |
ТУ 6-09-3513-86 |
Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ» или хч |
ТУ 6-09-3534-87 |
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) |
|
н-Гексан, хч |
ТУ 6-09-3375-78 |
Кислота ортофосфорная, хч |
|
Кислота уксусная, ледяная |
ГОСТ 61-69 |
Магний серно-кислый безводный, хч |
ГОСТ 4523-67 |
Набор для пробоподготовки по методу QuEChERS Interlab VetexQ для обычных овощей, фруктов и зерна (кат. № 1L-5056) |
|
Натрий уксусно-кислый, ч |
ГОСТ 199-68 |
Силикагель, Merck 1.09385.1000 |
|
Смесь № 1: этилацетат-гексан в соотношении 1:4 по объему |
|
Смесь № 2: этилацетат-гексан в соотношении 1:1 по объему |
|
Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005 М Н3РО4 в соотношении 50:50 |
|
Уголь активированный БАУ-А |
ГОСТ 6217-4-74 |
Флуксапироксад с содержанием основного вещества 99,7 % (BAS 700 F) |
|
Этилацетат, хч |
ГОСТ 1138-84 |
Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100´2,1) мм, 1,7 мкм (Waters) |
|
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC Shield RP18 (100´2,1) мм, 1,7 мкм (Waters) |
|
Аппарат для встряхивания и Multi Reax (фирмы Heidolph, Германия) |
ТУ 64-1-1081-73 |
Воронки лабораторные В-75-110 |
|
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 см3 |
|
Патроны Диапак С16 (БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 21.0040) |
|
Патроны Диапак С (БиоХимМак СТ), 0,4 г (номер по каталогу 22.0300) |
|
Пробирки полипропиленые центрифужные с крышками объемом 15 и 50 см3 |
|
Ротационный вакуумный испаритель фирмы BUCHI, мод. R 205 (Швейцария) |
|
Фильтры бумажные «красная лента» |
ТУ 6.091678-86 |
Центрифуга ОПн-8УХЛ4.2 или 5804R (фирмы Eppendorf AG, Германия) |
ТУ 5.375-4261-76 |
Шприц медицинский с разъемом Льюера |
ГОСТ 22090 |
Примечание. Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07.
Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 ± 5) °С и относительной влажности не более 80 %;
• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7.1. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Acquity ВЕН С18 и Acquity Shield RP18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.
7.2. Приготовление растворов
7.2.1. Раствор 0,005 М ортофосфорной кислоты: (0,5 ± 0,01) г 98 %-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
7.2.2. Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50 по объёму, используя мерные цилиндры.
7.2.3. Приготовление элюента № 1: в колбе на 100 см3 смешивают 80 см3 н-гексана и 20 см3 этилацетата, используя мерные цилиндры.
7.2.4. Приготовление элюента № 2: в колбе на 100 см3 смешивают 50 см3 н-гексана и 50 см3 этилацетата, используя мерные цилиндры.
7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов
7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску флуксапироксада (50 ± 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом.
7.3.2. Приготовление градуировочных растворов (анализ на колонке Acquity ВЕН С18).
Градуировочные растворы с концентрациями флуксапироксада 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 и 0,1 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50).
7.3.2.1. Раствор № 1 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой (5 мкг/см3). В другую мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят 2,0 см3 полученного раствора. Объем вновь доводят до метки подвижной фазой (0,1 мкг/см3).
7.3.2.2. Раствор № 2 с концентрацией 0,08 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 8,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.2.3. Раствор № 3 с концентрацией 0,06 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 6 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.2.4. Раствор № 4 с концентрацией 0,04 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 4 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.2.5. Раствор № 5 с концентрацией 0,02 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.3. Приготовление градуировочных растворов (анализ на колонке Acquity Shield RP18).
Градуировочные растворы с концентрациями флуксапироксада 0,01, 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50).
7.3.3.1. Раствор № 1 с концентрацией 5,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3.2. Раствор № 2 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 4,0 см3 раствора № 1 и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3.3. Раствор № 3 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 2,0 см3 раствора № 1 и доводят до метки подвижной фазой.
7.3.3.4. Раствор № 4 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.3.5. Раствор № 5 с концентрацией 0,02 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.
7.3.3.6. Раствор № 6 с концентрацией 0,01 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 3 и доводят объем до метки подвижной фазой.
Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
При изучении полноты определения флуксапироксада в воде, почве, зерне, зеленой массе и соломе зерновых культур используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
7.4. Построение градуировочного графика
Дня установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация флуксапироксада в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации флуксапироксада в градуировочном растворе.
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:
C = KS, где
S - площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
где
С - аттестованное значение массовой концентрации флуксапироксада в градуировочном растворе;
Ск - результат контрольного измерения массовой концентрации флуксапироксада в градуировочном растворе;
lконтр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (lконтр. = 10 % при Р = 0,95).
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79), а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 «Вода. Общие требования к отбору проб»; ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна»; ГОСТ 28168-89 «Почвы. Отбор проб». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
9.1. Определение флуксапироксада в воде
Через патрон Диапак С16 пропускают 50 см3 воды. Фильтрат отбрасывают. Флуксапироксад элюируют 3 см3 ацетона. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 см3 подвижной фазы. 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.
9.2. Определение флуксапироксада в зеленой массе и соломе зерновых культур
В полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 помещают 10 г измельченной зеленой массы или 4 г соломы, прибавляют 10 см3 воды, 10 см3 ацетонитрила, 0,1 см3 ледяной уксусной кислоты, 4 г безводного магния серно-кислого и 1 г натрия уксусно-кислого. Пробирку плотно закрывают пробкой, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют при скорости 8000 об./мин в течение 10 мин. Супернатант декантируют и количественно переносят в другую тефлоновую центрифужную пробирку. Если супернатант декантировать не удается, то массу фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр «красная лента». Измеряют объем супернатанта или фильтрата и прибавляют к нему силикагель и безводный магний серно-кислый из расчета 50 мг силикагеля, 150 мг магния серно-кислого на 1 см3 супернатанта. При работе с образцами зеленой массы или соломы к супернатанту также прибавляют активированный уголь из расчета 7,5 мг на 1 см3 супернатанта. Пробирку плотно закрывают пробкой, встряхивают на аппарате 15 мин и центрифугируют при скорости 8000 об./мин в течение 10 мин. Количественно отбирают с помощью шприца верхний ацетонитрильный слой, переносят его в мерную колбу вместимостью 10 см3 и доводят объем до метки водой. 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.
9.3. Определение флуксапироксада в почве
В полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 помещают 10 г просеянной почвы, прибавляют 3 см3 воды для смачивания пробы, через 2 мин прибавляют 10 см3 воды, 10 см3 ацетонитрила, 0,1 см3 ледяной уксусной кислоты, 4 г безводного магния серно-кислого и 1 г натрия уксусно-кислого. Пробирку плотно закрывают крышкой, встряхивают на аппарате в течение 15 мин и центрифугируют при скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Отбирают 5 см3 верхнего ацетонитрильного слоя и переносят его в полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 15 см3, содержащую 250 мг силикагеля и 750 мг безводного магния серно-кислого. Пробирку плотно закрывают крышкой, встряхивают на аппарате 10 мин и центрифугируют при скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Аликвоту 2 см3 переносят в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, остаток очищают на патроне Диапак С.
9.4. Определение флуксапироксада в зерне
В полипропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 50 см3 помещают 10 г измельченного зерна, добавляют 15 см3 воды, 10 см3 ацетонитрила и содержимое влагонепроницаемого пакета из «Набора для пробоподготовки по методу QuEChERS Interlab VetexQ для обычных овощей, фруктов и зерна (кат. № IL-5056)». Пробирку плотно закрывают, встряхивают на аппарате в течение 15 мин, центрифугируют при скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Отбирают 5 см3 верхнего ацетонитрильного слоя и переносят в полипропиленовую центрифужную пробирку из набора вместимостью 15 см3, содержащую сорбент. Пробирку плотно закрывают, встряхивают на аппарате в течение 15 мин, центрифугируют при скорости 4000 об./мин в течение 10 мин. Аликвоту 2 см3 переносят в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, остаток очищают на патроне Диапак С.
9.5. Очистка на патроне Диапак С
9.5.1. Кондиционирование патрона Диапак С
Патрон с силикагелем Диапак С промывают 2 см3 элюента № 2, затем 3 см3 гексана.
9.5.2. Дополнительная очистка проб почвы и зерна на патронах Диапак С
Сухой остаток, полученный по пп. 9.4 или 9.5 растворяют в 1 см3 гексана, наносят на предварительно кондиционированный патрон, колбу ополаскивают 1 см3 гексана и так же наносят на патрон. Патрон промывают 6 см3 элюента № 1, элюат отбрасывают. Флуксапироксад элюируют 3 см3 смеси № 2, элюат собирают, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе, остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы и 10 мм3 вводят в хроматограф.
9.6. Условия хроматографирования
9.6.1. Условия анализа проб воды, зеленой массы и соломы
Ультраэффективный жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2,1´100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 230 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания флуксапироксада (4,8 ± 0,1) мин.
9.6.2. Условия анализа проб почвы и зерна
Ультраэффективный жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY SHIELD RP 18 (2,1´100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 230 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3. Время удерживания флуксапироксада (5,0 ± 0,1) мин.
Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций (0,01 - 0,2) мкг/см3.
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание флуксапироксада в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
где
Sx - площадь пика флуксапироксада на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
V - объём пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
Р - навеска анализируемого образца, г;
F - полнота извлечения флуксапироксада, приведенная в табл. 2, %.
Содержание остаточных количеств флуксапироксада в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флуксапироксада с концентрацией 0,2 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предел повторяемости:
X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;
r - значение предела повторяемости (r = 2,8sr).
При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
Результат анализа представляют в виде:
мг/кг при вероятности Р = 0,95, где
- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
D - граница абсолютной погрешности, мг/кг;
где
d - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
«содержание вещества в пробе «менее нижней границы определения» (например: менее 0,005 мг/кг*, где «*» - 0,005 мг/кг - предел обнаружения флуксапироксада в почве и зерне зерновых).
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:
где
, () - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:
Dл = ± 0,84D, где
D - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
где
d - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:
, , Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R):
где (3)
X1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Долженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Черменская Т.Д., Комарова А.С. (ГНУ Всероссийский НИИ защиты растений Россельхозакадемии).